Трансплантация почки у мышей необходима для изучения механизмов острого и хронического отторжения аллотрансплантата. Здесь мы представляем новую хирургическую технику для анастомоза сосудов и имплантации мочеточника в модели трансплантации брюшной почки у мышей. В традиционных моделях трансплантации почки мышей верхняя часть аорты перевязывается примерно по отношению к почечным артериям.
Левая почечная вена донора трансецируется в полую вену, а донорская аорта делится поровну ниже почечной артерии, чтобы позже анастомозировать брюшную аорту реципиента. В этой модифицированной технике трансплантации почки мыши донорская левая почечная вена также трансецируется в полую вену, но донорская аорта разрезается над потомством почечной артерии и ее анастомозом к реципиентной брюшной аорте. В то время как донорский конец аорты перевязывается, мочеточниковая артерия намеренно сохраняется.
Теперь приступаем к демонстрации хирургической процедуры. Для анестезии поместите мышь в коробку для вдыхания изофлурана примерно от 40 до 60 секунд, чтобы вызвать потерю сознания. Как только мышь будет обезболена, взвесьте мышь.
В зависимости от массы мыши обезболенной мыши дают внутрибрюшинную инъекцию кетамина, ксилазина, ацепромазина. Когда анестезия вступит в силу, обрежьте брюшной мех. Затем исправьте и вылечите мышь на рабочем столе.
Срежьте кожу с помощью поперечного абдоминального разреза. Разрезать мышцы брюшной стенки. Далее крышкой осторожно отодвиньте внутренние органы солевой впитанной марлей.
Обнажают левую почку, аорту и нижнюю полую вену. Тщательно прижигайте левые поясничные вены, включая их нижележащие ветви и другие мелкие сосуды, включая левый сосуд надпочечников. Мобилизовать область аорты между левой и правой почечными артериями длиной примерно два миллиметра.
Отделяют инфраренальную нижнюю полую вену и аорту. И пройдите изогнутые щипцы под аорту, чтобы поместить вокруг этого сосуда свободный стяжкой 7,06 шва. Перекрестный зажим области аорты ниже правой почечной артерии и нижней полой вены с помощью двух пятимиллиметровых микрососудистых зажимов.
Трансекция левой почечной вены из полой вены. Промыть аорту одним миллилитром раствора гепарина. Затяните лигатуру и срежьте аорту ниже лигатуры, а также ниже проксимального зажима.
Готовьтесь тщательно, чтобы нежная мочеточниковая артерия полностью сохранилась. полностью освободить левую почку и связанные с ней сосуды, осторожно прижигая все сосуды, окружающие ткани. Удалить почку и хранить ее в растворе клеточной линии при четырех градусах.
Начальные этапы операции аналогичны тем, которые ранее были показаны для мыши-донора, включая анестезию и дезинфекцию. Откройте брюшную полость через срединный разрез, затем накройте органы брюшной полости влажной марлей с помощью физиологического раствора. Тщательно сохраняйте инфраренальную аорту и убедитесь, что каждая крупная ветвь сосуда прижигается.
Используйте электрическое прижигание, чтобы тщательно рассечь левый мочеточник в положении, близком к тазу почек. Затем удалить левую почку. Обнажите нижнюю полую вену и брюшную аорту и отделите их от окружающей жировой ткани примерно более четырех миллиметров в длину.
Затем перекрестный зажим каждый с двумя микрососудистыми зажимами приблизительно и дистально из них. Используйте держатель микроиглы для направления 10/0 монофиламентной шовной иглы, которая помещается через стенку аорты от проксимального к дистальному способу. Эллиптическая артериотомия размером примерно в один миллиметр достигается путем мягкого вытягивания шва вверх, при этом разрезая непосредственно нижнюю часть иглы тонкими, изогнутыми ножницами.
Выполняйте донорско-реципиентный анастомоз аорты сквозным способом. Сшивают проксимальный и дистальный концы анастомоза. Последний стежок с использованием двух отдельных швов 10,0.
После завязывания оставьте два длинных шва, включая иглу, на месте. Пришивают левую сторону стенки аорты к анастомозу непрерывно двумя равномерно расположенными швами в дистально-проксимальном направлении. После последнего стежка проведите шов через частичную толщину стенки сосуда над верхним шовным стяжением и одновременно приложите мягкое сцепление с коротким концом нижнего шовного галстука.
Обратите внимание, что в этой новой безузловой технике последний стежок не привязан к короткому концу верхнего галстука. Переверните пересаженную почку в нормальное положение. Теперь непрерывно пришивают правую стенку анастомоза аорты проксимальным и дистальным способом, используя три шва проксимальным и дистальным способом.
Обратите внимание, по сравнению с обычной хирургической техникой, последний шов сливается с дистальным галстуком поблизости. Не привязывайте его к концу нижнего шва, обрежьте его, чтобы вместо этого осталась свободная длина около двух-трех миллиметров. Разрезать нижнюю полую вену продольно с достаточной длиной примерно 1,5 миллиметра.
Расположите этот разрез немного ниже его аортального аналога. Выполните венозный анастомоз, используя ту же процедуру наложения швов, что и ранее описанная, с той разницей, что для каждой стороны анастомоза необходимо четыре-пять швов. Конечный стежок оставляется свободным концом аналогичной длины, похожим на аортальный анастомоз, описанный выше.
И новая техника безузлового анастомоза, последний стежок не завязывается, а остается свободным. Это сокращает время операции и позволяет хирургу увеличить или уменьшить размер анастомоза. Это улучшение уменьшает сложность и послеоперационные осложнения сосудистого анастомоза.
После завершения обоих анастомозов используйте сухой тампон, чтобы оказывать мягкое давление на ушную область в течение примерно 10-20 секунд. После этого оба зажима можно снять. Проникните через мочевой пузырь реципиента с помощью прямой иглы со швом 10,0 и вставьте ее в просвет иглы 21 г для руководства.
Теперь направьте иглу 21 G, чтобы сшить отверстие в месте предыдущего применения иглы и вытащить иглу. Сшить обрезанный конец мочеточника и снова перфорировать мочевой пузырь этим швом 10,0 в месте его входа. Отбуксируйте нить 10.0 и мочеточник в мочевой пузырь через построенное отверстие.
Анастомоз мочеточника донора к мочевому пузырю реципиента. Здесь соединяют наружную мембрану мочеточника с наружной мембраной стенки мочевого пузыря и выполняют прерывистые швы тремя-четырьмя швами. Вытяните тяговый шов.
Поместите кишечник обратно в брюшную полость. Выполняют двухслойные швы, сначала мышцы живота, а затем кожу, чтобы закрыть брюшную рану. Поместите пересаженных мышей в кислородную и температурную камеру для восстановления после операции.
Дайте адекватную послеоперационную анальгезию через четыре дня после операции. Выполняют контралатеральную нефрэктомию мыши-реципиента через пять дней после трансплантации анестезии. Поднимите и запишите состояние мыши.
Мы сравнили обычные и модифицированные методы трансплантации, оценив гистологические изменения трансплантированных почек изотрансплантата по сравнению с нативными контралатеральными почками реципиента. Как степень трофея почечных канальцев, так и почечный интерстициальный фиброз не оказались существенно отличающимися через четыре и 12 недель после трансплантации соответственно. Ранее мы исследовали результат этой новой бесузлывой методики и сравнивали ее с классическим подходом с точки зрения технических аспектов процедуры интероперационных и послеоперационных осложнений.
Модифицированная методика, показанная здесь, была связана с меньшим возникновением внутритрансплантатных артериальных венозных тромботических событий. Время на выполнение стеноза было значительно меньше и был достигнут отличный почечный изотрансплантат, долгосрочная выживаемость. Трансплантация почки у мышей является сложной и передовой процедурой.
Это новая хирургическая техника для анастомоза сосудов и почечной имплантации, направленная на улучшение общего показателя успеха, что делает ее надежным инструментом для изучения аутоиммунного ответа после трансплантации почки.
