DNA kırıntıları Ayrılma Agaroz Jel Elektroforezi

Agaroz jel elektroforezi 100 bp den 25 kb ¹ arasında değişen boyutlarda DNA parçaları ayıran en etkili yoludur. Agaroz deniz yosunu cins Gelidium ve Gracilaria izole edilen ve tekrarlanan agarobiose (L-ve D-galaktoz) alt birimlerinin ² oluşur. Jelleşme sırasında, agaroz polimerler non-kovalent ilişkilendirmek ve gözenek boyutları bir jel moleküler eleme özelliklerini belirlemek demetleri bir ağ oluştururlar. Agaroz jel elektroforezi kullanımı DNA ayrılması devrim. Agaroz jel onaylanmasından önce, DNA öncelikle sadece boyut bir yaklaşım sağlanır sükroz yoğunluk gradient santrifüj kullanılarak ayrıldı. Agaroz jel elektroforez ile DNA ayırmak için, DNA jel ve uygulanan akım önceden dökme kuyulara yüklenir. DNA (RNA) molekülün fosfat omurgası olumsuz bir elektrik alanı yerleştirildiği zaman, bu nedenle, şarj edilmiş, DNA fragmanları p göçedecektirositively anot ücret. DNA üniform bir kütle / yük oranına sahip olduğu için, DNA molekülleri, yapılan yol moleküler ağırlığının ³ log ile ters orantılı olduğu gibi bir kalıp içinde bir agaroz jeli içinde boyutu ile birbirinden ayrılır. Bir agaroz jeli ile DNA hareketi için öncü modelinin ön kenarı ileriye doğru hareket eder ve ⁴ boyunca molekülün geri kalan çeker sayede, "reptation yanlı" edilir. ; 2) agaroz konsantrasyonu; 3) DNA yapısı ^5; 4) etidyum bromid, 6 arasında uygulanan gerilim, 5) bulunması) türü DNA molekülü 1) boyutu: bir jel yoluyla bir DNA molekülü göç oranı aşağıdaki tarafından belirlenir agaroz ve 7) elektroforez tamponu. Ayırma işleminden sonra, DNA molekülleri uygun bir boya ile boyama sonra UV ışığı altında görüntülendi olabilir. Bu protokolü takip ederek, öğrenciler olmalıdır:

1. DNA fragmanları bir jel matriks içerisinde ayrılmış olan tarafından mekanizmasının anlaşılması
2. Konformasyon nasıl anlayınDNA molekülü bir jel matris yoluyla hareketlilik belirleyecek
3. Kendi ihtiyaçları için uygun konsantrasyonda bir agaroz çözümü belirlemek
4. DNA örneklerinin elektroforezi için bir agaroz jel hazırlayın
5. Jel elektroforez cihazı ve güç kaynağı kurma
6. DNA parçalarının ayrılması için uygun bir gerilim seçmek
7. Etidyum bromür DNA bantlarının görüntülenmesi için izin mekanizmasını anlamak
8. Ayrılmış DNA parçalarının boyutlarını belirlemek