Zaman Çözümlü Cryo-Elektron Mikroskopisi için Hızlı Şebeke Hazırlığı

Kriyo-elektron mikroskopisi (kriyo-EM) alanı, yeni donanım ve işleme algoritmaları ile hızla gelişmekte, daha yüksek çözünürlüklü yapılar ve daha zorlu sistemler hakkında bilgi üretmektedir. Kriyo-EM için örnek hazırlık, geleneksel şişirme sistemlerinin yerini almak için geliştirilen yeni yaklaşımlarla benzer bir devrime uğruyor. Bunlar arasında piezo-elektrikli dağıtıcıların kullanımı, pin baskısı ve doğrudan püskürtme yer almaktadır. Bu gelişmeler sonucunda, ızgara hazırlama hızı saniyelerden milisaniyelere kadar gidiyor ve özellikle proteinlerin ve substratların dalmadan önce hızla karıştırılabileceği zaman çözülen kriyo-EM alanında yeni fırsatlar sağlıyor, kısa ömürlü ara durumları hapsediyor. Burada, hem standart hızlı ızgara hazırlığı hem de zaman çözümlenmiş deneyler için şirket içi zaman çözümlü EM cihazımızda ızgara yapmak için standart bir protokol açıklıyoruz. Protokol, 4 ızgaranın hazırlanması için ≥ 2 mg / mL konsantrasyonlarında en az 50 μL numune gerektirir. Örnek uygulama ve donma arasındaki gecikme 10 ms kadar düşük olabilir. Bir sınırlama, daha yüksek hızlarda ve şişirme yöntemine kıyasla artan buz kalınlığıdır. Bu protokolün başkalarının kendi ızgara yapma cihazlarını tasarlamalarına ve zaman çözümlenmiş deneyler tasarlamak isteyenlere yardımcı olacağını umuyoruz.