Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Representative Results
Discussion
Acknowledgements
Materials
References
Bioengineering
Denna artikel presenterar integrationen av en spektralfokuseringsmodul och en pulslaser med dubbla utgångar, vilket möjliggör snabb hyperspektral avbildning av guldnanopartiklar och cancerceller. Detta arbete syftar till att demonstrera detaljerna i multimodala olinjära optiska tekniker på ett standardlaserscanningsmikroskop.
Att undersöka guldnanopartiklar (AuNPs) i levande system är viktigt för att avslöja interaktionen mellan AuNPs och biologiska vävnader. Dessutom, genom att integrera olinjära optiska signaler såsom stimulerad Raman-spridning (SRS), tvåfotonexciterad fluorescens (TPEF) och övergående absorption (TA) i en bildplattform, kan den användas för att avslöja biomolekylär kontrast av cellulära strukturer och AuNPs på ett multimodalt sätt. Denna artikel presenterar en multimodal olinjär optisk mikroskopi och tillämpar den för att utföra kemiskt specifik avbildning av AuNPs i cancerceller. Denna bildplattform ger ett nytt tillvägagångssätt för att utveckla effektivare funktionaliserade AuNPs och avgöra om de befinner sig inom vaskulaturer som omger tumören, pericellulära eller cellulära utrymmen.
Guldnanopartiklar (AuNPs) har visat stor potential som biokompatibla avbildningssonder, till exempel som effektiva ytförstärkta Raman-spektroskopi (SERS) substrat i olika biomedicinska applikationer. Större tillämpningar inkluderar områden som biosensing, bioimaging, ytförbättrade spektroskopier och fototermisk terapi för cancerbehandling1. Dessutom är det avgörande att undersöka AuNPs i levande system för att bedöma och förstå interaktionen mellan AuNPs och biologiska system. Det finns olika analytiska tekniker, inklusive Fourier transform infraröd (FTIR) spektroskopi2, laserablation induktivt kopp....
1. Slå på lasersystemet
SF-TRU-modulen (Spectral Focusing Timing and Recombination Unit) introduceras mellan femtosekundlasern med dubbla utgångar och det modifierade laserscanningsmikroskopet. Det avstämbara ultrasnabba lasersystemet som används i denna studie har två utgångsportar som levererar en stråle med en fast våglängd på 1 045 nm och den andra strålen som är avstämbar i intervallet 680–1 300 nm. En detaljerad schematisk bild av SF-TRU-modulen och multimodal bildplattform visas i figur 1. SF-T.......
Denna studie har presenterat kombinationen av SF-TRU-modul och ultrasnabbt lasersystem med dubbla utgångar som demonstrerade dess tillämpningar för multimodal mikrospektroskopi. Med sin förmåga att undersöka upptaget av guldnanopartiklar (AuNPs) av cancerceller kan den multimodala bildplattformen visualisera de cellulära svaren på hypertermiska cancerbehandlingar när laserstrålar absorberas av AuNPs.
Dessutom uppnås snabb kemiskt specifik avbildning och hög spektral upplösning gen.......
Name | Company | Catalog Number | Comments |
APE SRS Detection Unit | APE (Angewandte Physik & Elektronik GmbH) | APE Lock-in Module | Combined system containing a large area Si photo-diode for detecting the pump beam along with a Lock-In amplifier for detecting the beam modulations |
Confocal Scanning Unit | Olympus | FV 3000 | Confocal scanning unit used for imaging |
CML Latex Beads, 4% w/v, 1.0 µm | Invitrogen | C37483 | Polystyrene microspheres |
Coverslips | Thorlabs | CG15CH2 | 22 mm x 22 mm coverslips for seeding cells |
FBS | Gibco | 10500-064 | Foetal Bovine Serum (Heat Inactivated) |
Flouview | Olympus | FV31S-SW | Laser scanning microscope control software |
Function Generator | BX precision | 40543 | Used to generate square wave function which is fed to EOM in SF-TRU to produce modulations in the stokes beam |
FV3000 | Olympus | IX83P2ZF | Other microscope frames can be used. |
Gold Nanoparticles | Nanopartz | A11-60 | Spherical gold nanoparticles, 60 nm diameter |
Input Output Interface | Olympus | FV30 ANALOG | This unit allows voltage readouts from PMT and LockIn to be fed into the confocal scanning software and allows timing pulses to be sent between the olympus microscope and the SF-TRU unit. |
InSight X3 | Newport | Spectra-Physics | Dual-output femtosecond pulsed laser. Tunable (680–1300 nm) and fixed (1045 nm) laser outputs with the repetition rate of 80 MHz. |
Microscope Frame | Olympus | IX83 | Inverted microscope |
Mouse 4T1 cells | ATCC | CRL-2539 | Mouse breast cancer cells |
NA 1.2 Water Immersion Objective | Olympus | UPLSAPO60XW/IR | The multiphoton 60x Objective has a 0.28 mm working distance. Other similar objectives can be used. |
NA 1.4 Condenser | Nikon | CSC1003 | Other condensers with NA higher than the excitation objective can also be used. |
PMT | Hamamatsu | R3896 | PMT used for detecting anti-stokes photos for CARS micrsocopy |
PMT Connector | Hamamatsu | C13654-01-Y002 | Connector for PMT |
Power Supply | RS | RSPD-3303 C | Programmable power supply which is used for providing the correct voltage to the PMT |
RPMI-1640 | Gibco | A10491-01 | Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium has since been found suitable for a variety of mammalian cells. |
SF-TRU | Newport Spectra Physics | SF-TRU | System designed for controlling the time delay and dispersion of the 2 laser outputs and for performing the beam modulations required for SRS |
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved