Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Representative Results
Discussion
Acknowledgements
Materials
References
Bioengineering
Bu makalede, altın nanopartiküllerin ve kanser hücrelerinin hızlı hiperspektral görüntülenmesini sağlayan spektral odaklama modülü ve çift çıkışlı darbe lazerinin entegrasyonu sunulmaktadır. Bu çalışma, multimodal doğrusal olmayan optik tekniklerin ayrıntılarını standart bir lazer tarama mikroskobu üzerinde göstermeyi amaçlamaktadır.
Canlı sistemlerde altın nanopartiküllerin (AuNP'ler) araştırılması, AuNP'ler ve biyolojik dokular arasındaki etkileşimi ortaya çıkarmak için gereklidir. Ayrıca, uyarılmış Raman saçılması (SRS), iki foton uyarılmış floresan (TPEF) ve geçici absorpsiyon (TA) gibi doğrusal olmayan optik sinyalleri bir görüntüleme platformuna entegre ederek, hücresel yapıların ve AuNP'lerin biyomoleküler kontrastını multimodal bir şekilde ortaya çıkarmak için kullanılabilir. Bu makalede multimodal doğrusal olmayan optik mikroskopi sunulmakta ve kanser hücrelerinde AuNP'lerin kimyasal olarak spesifik görüntülenmesini gerçekleştirmek için uygulanmaktadır. Bu görüntüleme platformu, daha verimli işlevselleştirilmiş AuNP'ler geliştirmek ve tümörü, perisellüler veya hücresel alanları çevreleyen vaskülatürler içinde olup olmadıklarını belirlemek için yeni bir yaklaşım sunmaktadır.
Altın nanopartiküller (AuNP'ler), biyouyumlu görüntüleme probları olarak, örneğin çeşitli biyomedikal uygulamalarda etkili yüzey geliştirilmiş Raman spektroskopisi (SERS) substratları olarak büyük potansiyel göstermiştir. Başlıca uygulamalar arasında biyoalgılama, biyogörüntüleme, yüzey geliştirilmiş spektroskopiler ve kanser tedavisi için fototermal tedavi gibi alanlarbulunmaktadır 1. Ayrıca, canlı sistemlerdeki AuNP'lerin araştırılması, AuNP'ler ve biyolojik sistemler arasındaki etkileşimi değerlendirmek ve anlamak için çok önemlidir. AuNP'lerin dokulardaki dağılımını araştırmak için başarıyla kullanılan Fourier dönüşümü....
1. Lazer sistemini açma
Spektral Odaklama Zamanlaması ve Rekombinasyon Birimi (SF-TRU) modülü, çift çıkışlı femtosaniye lazer ve modifiye lazer tarama mikroskobu arasında tanıtıldı. Bu çalışmada kullanılan ayarlanabilir ultra hızlı lazer sistemi, sabit bir 1.045 nm dalga boyunda bir ışın ve 680-1.300 nm aralığında ayarlanabilir diğer ışın sağlayan iki çıkış portuna sahiptir. SF-TRU modülünün ve multimodal görüntüleme platformunun ayrıntılı bir şeması Şekil 1'de gösteri.......
Bu çalışmada SF-TRU modülü ve ultra hızlı çift çıkışlı lazer sisteminin kombinasyonu sunulmuş ve multimodal mikrospektroskopi için uygulamaları gösterilmiştir. Altın nanopartiküllerin (AuNP'ler) kanser hücreleri tarafından alımını araştırma yeteneği ile multimodal görüntüleme platformu, lazer ışınları AuNP'ler tarafından emildiğinde hipertermik kanser tedavilerine hücresel yanıtları görselleştirebilir.
Ayrıca, hızlı kimyasal olarak spesifik görünt.......
Name | Company | Catalog Number | Comments |
APE SRS Detection Unit | APE (Angewandte Physik & Elektronik GmbH) | APE Lock-in Module | Combined system containing a large area Si photo-diode for detecting the pump beam along with a Lock-In amplifier for detecting the beam modulations |
Confocal Scanning Unit | Olympus | FV 3000 | Confocal scanning unit used for imaging |
CML Latex Beads, 4% w/v, 1.0 µm | Invitrogen | C37483 | Polystyrene microspheres |
Coverslips | Thorlabs | CG15CH2 | 22 mm x 22 mm coverslips for seeding cells |
FBS | Gibco | 10500-064 | Foetal Bovine Serum (Heat Inactivated) |
Flouview | Olympus | FV31S-SW | Laser scanning microscope control software |
Function Generator | BX precision | 40543 | Used to generate square wave function which is fed to EOM in SF-TRU to produce modulations in the stokes beam |
FV3000 | Olympus | IX83P2ZF | Other microscope frames can be used. |
Gold Nanoparticles | Nanopartz | A11-60 | Spherical gold nanoparticles, 60 nm diameter |
Input Output Interface | Olympus | FV30 ANALOG | This unit allows voltage readouts from PMT and LockIn to be fed into the confocal scanning software and allows timing pulses to be sent between the olympus microscope and the SF-TRU unit. |
InSight X3 | Newport | Spectra-Physics | Dual-output femtosecond pulsed laser. Tunable (680–1300 nm) and fixed (1045 nm) laser outputs with the repetition rate of 80 MHz. |
Microscope Frame | Olympus | IX83 | Inverted microscope |
Mouse 4T1 cells | ATCC | CRL-2539 | Mouse breast cancer cells |
NA 1.2 Water Immersion Objective | Olympus | UPLSAPO60XW/IR | The multiphoton 60x Objective has a 0.28 mm working distance. Other similar objectives can be used. |
NA 1.4 Condenser | Nikon | CSC1003 | Other condensers with NA higher than the excitation objective can also be used. |
PMT | Hamamatsu | R3896 | PMT used for detecting anti-stokes photos for CARS micrsocopy |
PMT Connector | Hamamatsu | C13654-01-Y002 | Connector for PMT |
Power Supply | RS | RSPD-3303 C | Programmable power supply which is used for providing the correct voltage to the PMT |
RPMI-1640 | Gibco | A10491-01 | Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium has since been found suitable for a variety of mammalian cells. |
SF-TRU | Newport Spectra Physics | SF-TRU | System designed for controlling the time delay and dispersion of the 2 laser outputs and for performing the beam modulations required for SRS |
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved