Testen van de in vitro en in vivo efficiëntie van mRNA-lipide nanodeeltjes geformuleerd door microfluïdische menging

Lipide nanodeeltjes (LNP's) hebben de laatste tijd veel aandacht getrokken met de succesvolle ontwikkeling van de COVID-19 mRNA-vaccins door Moderna en Pfizer/BioNTech. Deze vaccins hebben de werkzaamheid van mRNA-LNP-therapieën aangetoond en de deur geopend voor toekomstige klinische toepassingen. In mRNA-LNP-systemen dienen de LNP's als leveringsplatforms die de mRNA-lading beschermen tegen afbraak door nucleasen en hun intracellulaire afgifte bemiddelen. De LNP's bestaan doorgaans uit vier componenten: een ioniseerbaar lipide, een fosfolipide, cholesterol en een lipide-verankerd polyethyleenglycol (PEG)-conjugaat (lipide-PEG). Hier worden LNP's die mRNA inkapselen dat codeert voor vuurvliegluciferase geformuleerd door microfluïdische menging van de organische fase met LNP-lipidecomponenten en de waterige fase die mRNA bevat. Deze mRNA-LNP's worden vervolgens in vitro getest om hun transfectie-efficiëntie in HepG2-cellen te evalueren met behulp van een bioluminescente plaatgebaseerde test. Bovendien worden mRNA-LNP's in vivo geëvalueerd bij C57BL/6-muizen na een intraveneuze injectie via de laterale staartader. Bioluminescentiebeeldvorming van het hele lichaam wordt uitgevoerd met behulp van een in vivo beeldvormingssysteem. Representatieve resultaten worden getoond voor de mRNA-LNP-kenmerken, hun transfectie-efficiëntie in HepG2-cellen en de totale luminescente flux in C57BL/6-muizen.