Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

שיטה לסינון אנלוגים של פנטניל המבוססת על זמן השמירה שלהם, ניידות ותבנית פיצול ספקטרומטריית מסות.

Abstract

השימוש בפנטניל והופעתם של אנלוגים פנטניל בעשורים האחרונים הפכו לדאגה גוברת לקהילה בכללותה. פנטניל והאנלוגים שלו הם התורמים העיקריים למנת יתר קטלנית ולא קטלנית בארצות הברית. רוב המקרים האחרונים של מנת יתר הקשורה לפנטניל קשורים לפנטניל המיוצר באופן לא חוקי ולעוצמה הקיצונית הנלווית אליו. בעבודה הנוכחית, אנו מתארים פרוטוקול אנליטי בעל תפוקה גבוהה להקרנה של אנלוגים פנטניל. השימוש בכרומטוגרפיה נוזלית משלימה, ספקטרומטריית ניידות יונים לכודים וספקטרומטריית מסות טנדם מאפשרים הפרדה והקצאה של מאות אנלוגים של פנטניל מדגימה אחת בסריקה אחת. הגישה המתוארת מנצלת את ההתפתחות האחרונה של רכישה תלוית נתונים ורכישה בלתי תלויה בנתונים באמצעות הצטברות מקבילית במלכודת הניידות ואחריה פיצול רציף באמצעות דיסוציאציה הנגרמת על ידי התנגשות. אנלוגים פנטניל מוקצים בביטחון מבוסס על זמן השמירה שלהם, ניידות, דפוס פיצול MS.

Introduction

פנטניל והאנלוגים שלו הם התורמים העיקריים למנת יתר קטלנית ולא קטלנית בארצות הברית 1,2. המרכז לבקרת מחלות ומניעתן (CDC) דיווח כי מספר מקרי המוות ממנת יתר סינתטיים הקשורים לאופיואידים בין השנים 2013 ל-2021 היה מעל 258,000. בשנת 2021 לבדה, ניתן לייחס מעל 68,000 מקרי מוות ממנת יתר לאופיואידים סינתטיים, בסך הכל 82% מכלל מקרי המוות הקשורים למנת יתר במדינה3. מאז 2013 זוהו מאות אנלוגים של פנטניל, בעוצמות משתנות4. עם הופעתם של אנלוגים פנטניל המיוצרים באופן לא חוקי, אופיואיד סינתטי לוח II עצמו נשאר אופיואיד סינתטי הפופולרי ביותר זמין בארצות....

Protocol

1. הכנת מדגם

  1. אחסן את ערכת ההקרנה האנלוגית פנטניל ב -20 ° C לאחר קבלתם. יש להשהות מחדש כל דגימה לריכוז סופי של 400 מיקרוגרם/מ"ל על ידי תוספת של 500 מיקרוליטר מתנול טהור בדרגת LC/MS.
  2. מערבבים באמצעות מערבל צלחות או מערבולת במהירות 400 סל"ד למשך שעה או מערבולת במהירות.......

Representative Results

ערכת הסינון האנלוגית פנטניל של 250 תקני אנלוגים חולקה ל -14 קבוצות: 12 קבוצות של 17 אנלוגים ו -2 קבוצות של 16 אנלוגים, כדי למנוע הפרעות m/z. כל אנלוגי מאופיין גם על ידי m/z, זמן שמירה (RT), ניידות (K) ותבנית פיצול MS/MS.

דוגמאות להפרדות איזומריות מוצגות באיור 3

Discussion

ההפרדה האנליטית של דגימות ביולוגיות המכילות תוכן איזומרי גבוה יכולה להיות מאתגרת מבחינה אנליטית. במאמר זה, השיטה המתוארת שואפת לאפיין 29 קבוצות איזומרים, ובסך הכל 185 אנלוגים מתוך ערכה סטנדרטית של 250 אופיואידים. במהלך הכנת קבוצת הבדיקה, חשוב לוודא שאין שני אנלוגים עם m/z שלא.......

Acknowledgements

המחבר מבקש להודות על התמיכה הראשונית של ד"ר סזאר רמירז במהלך פיתוחי השיטה הראשוניים.

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Ammonium formate for HPLCFluka17843-50G
Eppendorf Snap-Cap Microcentrifuge Safe-Lock TubesFisher05-402-25
ESI-L Low Concentration Tuning mixAgilentG1969-85000
Fentanyl Analog Screening (FAS) Kit Cayman Chemical9003237, 9003286, 9003380, 9003381kit of 250 snthetic opioids, 210 fentanyl analogs, broken up into one kit and emergent panel versions 1-4
Formic acid Optima LC/MSFisherA117-50
Onyx guard column (5 x 4.6 mm) PhenomenexCHO-7649guard column for C18 columns
Onyx monolithic C18 HPLC column (100 x 4.6 mm)PhenomenexCHO-7643reverse phase C18 LC column
Optima grade acetonitrile FisherA996-4
Optima grade methanolFisherA454-4
Optima grade waterFisherW7-4
PipetteFisher05-719-510kit of 1-10 µL, 10-100 µL, and 100-1000 µL pipette
Pipette tips 10µLFisher94060100
Pipette tips 1000µLFisher94056710
Pipette tips 200µLFisher94060310
Plate mixerIKA MS 3 D S1IKA MS 3 digtital
Prominence LC-20 CE ultrafast liquid chromatographShimadzu, Japanequiped with DGU-20A5, LC-20AD, SIL-20AC, CTO-20A, SPD-M20A, CBM-20A, SPD-20A
timsTOF ProBruker Daltonics Inc., Billerica, MAtimsTOF instrument with PASEF 

References

  1. Gladden, R. M., Martinez, P., Seth, P. Fentanyl Law Enforcement Submissions and Increases in Synthetic Opioid-Involved Overdose Deaths - 27 States, 2013-2014. Morbidity and Mortality Weekly Report. 65 (33), 837-843 (2016).
  2. Rudd, R. A., Seth, P., David, F., Scholl, L.

Explore More Articles

213

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved