未精製組換えアデノ随伴ウイルスベクターを用いた培養細胞における導入遺伝子発現

組換えアデノ随伴ウイルスベクター(rAAV)は、幅広い組織タイプに組み込むことなく、強力で耐久性のある導入遺伝子発現を達成できるため、動物モデルや臨床現場での遺伝子導入によく使用されています。rAAVは、治療への応用に加えて、培養細胞における研究者の実験ニーズや科学的目標に合わせた導入遺伝子を送達するための有用な実験ツールです。例としては、外因性レポーター遺伝子、過剰発現カセット、RNA干渉、ゲノムワイドスクリーニング用のツールを含むCRISPRベースのツールなどがあります。rAAV形質導入は、エレクトロポレーションやケミカルトランスフェクションよりも細胞への害が少なく、製造に特別な装置や高価な試薬を必要としません。rAAVを含む粗溶解物または馴化培地は、rAAVの過小評価されている特徴である多くの細胞タイプを形質導入するために、さらに精製することなく培養細胞に直接添加することができます。ここでは、基本的な導入遺伝子カセットクローニングのプロトコルを提供し、粗rAAV製剤を作製して培養細胞に適用する方法を示します。原理の証明として、rAAVアプリケーションでまだ報告されていない3種類の細胞(胎盤細胞、筋芽細胞、小腸オルガノイド)の形質導入を実証しています。粗rAAV調製の適切な使用法、遺伝子導入におけるrAAVの限界、およびカプシドの選択に関する考慮事項について説明します。このプロトコルは、研究者が面倒な滴定および精製ステップを必要とせずに、rAAVを使用して細胞培養で生産的なDNA送達を達成するためのシンプルで低コストで効果的な方法を概説しています。