Abstract
Bioengineering
临床前基因治疗研究,特别是在啮齿动物和大型动物模型中的研究,需要生产高产量和高纯度的 AAV 载体。研究实验室的传统方法通常涉及广泛使用细胞培养皿来培养HEK293T细胞,这一过程既费力又有问题。本文介绍了一种独特的内部方法,该方法使用特定的细胞工厂(或细胞堆栈,CF10)平台简化了这一过程。聚乙二醇/水性两相分配与碘克沙醇梯度超速离心相结合,提高了所生成 AAV 载体的产量和纯度。AAV 载体的纯度通过 SDS-PAGE 和银染验证,而满颗粒与空颗粒的比率则使用透射电子显微镜 (TEM) 确定。这种方法为高产量生产 AAV 载体提供了一个高效的细胞工厂平台,并结合了改进的纯化方法,以满足 体内 研究的质量要求。
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