Abstract
Bioengineering
La recherche préclinique en thérapie génique, en particulier sur des modèles de rongeurs et de grands animaux, nécessite la production de vecteurs AAV à haut rendement et pureté. Les approches traditionnelles dans les laboratoires de recherche impliquent souvent une utilisation intensive de boîtes de culture cellulaire pour cultiver HEK293T cellules, un processus qui peut être à la fois laborieux et problématique. Ici, une méthode interne unique est présentée, qui simplifie ce processus avec une plate-forme spécifique d’usine de cellules (ou d’empilements de cellules, CF10). L’intégration d’une séparation biphasique polyéthylèneglycol/aqueuse avec une ultracentrifugation à gradient d’iodixanol améliore à la fois le rendement et la pureté des vecteurs AAV générés. La pureté des vecteurs AAV est vérifiée par SDS-PAGE et coloration à l’argent, tandis que le rapport entre les particules pleines et vides est déterminé à l’aide de la microscopie électronique à transmission (MET). Cette approche offre une plate-forme d’usine cellulaire efficace pour la production de vecteurs AAV à haut rendement, associée à une méthode de purification améliorée pour répondre aux exigences de qualité des études in vivo .
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