Un procedimiento simplificado y estandarizado para generar vectores de virus adenoasociados de alta calidad y alto título utilizando una plataforma de fábrica de células

La investigación preclínica de terapia génica, particularmente en modelos de roedores y animales grandes, requiere la producción de vectores AAV con alto rendimiento y pureza. Los enfoques tradicionales en los laboratorios de investigación a menudo implican el uso extensivo de placas de cultivo celular para cultivar células HEK293T, un proceso que puede ser laborioso y problemático. Aquí, se presenta un método interno único, que simplifica este proceso con una plataforma específica de fábrica de celdas (o pilas de celdas, CF10). La integración de la partición bifásica de polietilenglicol/acuoso con la ultracentrifugación en gradiente de yodixanol mejora tanto el rendimiento como la pureza de los vectores AAV generados. La pureza de los vectores AAV se verifica mediante SDS-PAGE y tinción de plata, mientras que la proporción de partículas llenas y vacías se determina mediante microscopía electrónica de transmisión (TEM). Este enfoque ofrece una plataforma de fábrica de células eficiente para la producción de vectores AAV con altos rendimientos, junto con un método de purificación mejorado para satisfacer las demandas de calidad de los estudios in vivo .