Axoplasm Isolation from Rat Sciatic Nerve

Isolation of pure axonal cytoplasm (axoplasm) from peripheral nerve is crucial for biochemical studies of many biological processes. In this article, we ...

Weizmann Institute of Science

&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x8F74;&#x7A81;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28; (&#x795E;&#x7ECF;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8F74;&#x6D46;) &#x7EC4;&#x6210;&#x53D8;&#x5316;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x8BB8;&#x591A;&#x751F;&#x7269;&#x8FC7;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x8F74;&#x7A81;&#x7684;&#x6307;&#x5BFC;&#xFF0C;&#x5E94;&#x5BF9;&#x635F;&#x4F24;&#x3001; &#x7A81;&#x8D77;&#x548C;&#x8F74;&#x7A81;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x751F;&#x5316;&#x4E0E;&#x5206;&#x5B50;&#x7814;&#x7A76;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x673A;&#x5236;&#x5DF2;&#x5927;&#x91CF;&#x96C6;&#x4E2D;&#x5728;&#x4F53;&#x5916;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7531;&#x4E8E;&#x83B7;&#x5F97;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x63D0;&#x53D6;&#x7269;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7684;&#x56F0;&#x96BE;&#x3002;&#x5728;&#x4F53;&#x5916;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E0D;&#x53EF;&#x80FD;&#x590D;&#x5236;&#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#xFF0C;&#x6574;&#x4E2A;&#x795E;&#x7ECF;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8F74;&#x6D46;&#x63D0;&#x53D6;&#x7684;&#x53EF;&#x9760;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5C06;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x795E;&#x7ECF;&#x8F74;&#x7A81;&#x7684;&#x673A;&#x7406;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x548C;&#x8BC4;&#x4F30;&#x65B0;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x5927;&#x9F20;&#x5468;&#x56F4;&#x795E;&#x7ECF;&#xFF0C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5B75;&#x5316;&#x7684;&#x6E17;&#x6DB2;&#xFF0C;&#x5355;&#x72EC;&#x7684;&#x9AD3;&#x9798;&#x548C;&#x6EB6;&#x8840; nonaxonal &#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x5176;&#x6B21;&#x662F;&#x5269;&#x4F59;&#x7684;&#x8F74;&#x7A81;&#x4E30;&#x5BCC;&#x6750;&#x6599;&#x4E2D;&#x63D0;&#x53D6;&#x795E;&#x7ECF;&#x5206;&#x518C;&#x5931;&#x6563;&#x77ED;&#x7F51;&#x6BB5;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8F74;&#x6D46;&#x7684;&#x5236;&#x5907;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x8FD9;&#x9879;&#x65B0;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x53EF;&#x4EE5;&#x964D;&#x4F4E;&#x8840;&#x6E05;&#x548C;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6C61;&#x67D3;&#x548C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x8F74;&#x7A81;&#x5185;&#x5BB9;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

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Localized changes in the composition of axonal cytoplasm (axoplasm) are critical for many biological processes, including axon guidance, responses to injury, neurite outgrowth, and axon-glia interactions. Biochemical and molecular studies of these mechanisms have been heavily focused on in vitro systems because of the difficulty of obtaining subcellular extracts from mammalian tissues in vivo. As in vitro systems might not replicate the in vivo situation, reliable methods of axoplasm extraction from whole nerve would be helpful for mechanistic studies on axons. Here we develop and evaluate a new procedure for preparation of axoplasm from rat peripheral nerve, based on incubation of separated short segements of nerve fascicles in hypotonic medium to separate myelin and lyse nonaxonal structures, followed by extraction of the remaining axon-enriched material. We show that this new procedure reduces serum and glial cell contamination and facilitates proteomic analyses of axonal contents.

Axoplasm isolation from peripheral nerve.

Changements localis&#xE9;s dans la composition du cytoplasme axonal (axoplasme) sont essentielles pour de nombreux processus biologiques, y compris le guidage axonal, les r&#xE9;ponses &#xE0; des blessures, la croissance des neurites, et des axones des cellules gliales-interactions. Des &#xE9;tudes biochimiques et mol&#xE9;culaires de ces m&#xE9;canismes ont &#xE9;t&#xE9; fortement ax&#xE9;e sur des syst&#xE8;mes in vitro en raison de la difficult&#xE9; d&#x26;#39;obtenir des extraits de tissus de mammif&#xE8;res subcellulaires in vivo. Comme dans les syst&#xE8;mes in vitro pourrait ne pas reproduire la situation in vivo, des m&#xE9;thodes fiables d&#x26;#39;extraction axoplasme de nerf entier serait utile pour les &#xE9;tudes m&#xE9;canistiques sur les axones. Ici, nous d&#xE9;velopper et d&#x26;#39;&#xE9;valuer une nouvelle proc&#xE9;dure pour la pr&#xE9;paration de axoplasme du nerf p&#xE9;riph&#xE9;rique chez le rat, bas&#xE9; sur l&#x26;#39;incubation d&#x26;#39;s&#xE9;par&#xE9;s segements courts de faisceaux nerveux dans un milieu hypotonique &#xE0; s&#xE9;parer de la my&#xE9;line et lyser structures nonaxonal, suivie par l&#x26;#39;extraction de l&#x26;#39;axone reste-mat&#xE9;riau enrichi. Nous montrons que cette nouvelle proc&#xE9;dure permet de r&#xE9;duire la contamination de cellules gliales et le s&#xE9;rum et facilite les analyses prot&#xE9;omiques de contenu axonales.

Isolement axoplasme de nerfs p&#xE9;riph&#xE9;riques

Lokalisierte &Auml;nderungen in der Zusammensetzung der axonalen Zytoplasma (Axoplasm) sind entscheidend f&uuml;r viele biologische Prozesse, einschlie&szlig;lich Axon Anleitung, Antworten zu Verletzungen, Neurit Auswuchs und Axon-Glia Interaktionen. Biochemische und Molekulare Studien dieser Mechanismen haben stark konzentriert auf in-vitro-Systemen wegen der Schwierigkeit, subzellulare Ausz&uuml;ge aus in-vivo S&auml;ugetier-Gewebe zu erhalten. Wie in Vitro Systeme m&ouml;glicherweise nicht repliziert die in-vivo Situation, zuverl&auml;ssige Methoden der Axoplasm Extraktion von ganzen Nerv w&auml;re hilfreich f&uuml;r mechanistische Studien &uuml;ber Axone. Hier wir Entwicklung und Bewertung ein neues Verfahrens zur Vorbereitung der Axoplasm aus Ratte peripherer Nerven, basierend auf einer Bebr&uuml;tungszeit von getrennten kurze Segmente der Nerv Faszikeln hypotones Medium zu trennen Myelin und Nonaxonal Strukturen, gefolgt durch Extraktion des verbleibenden Axon angereicherten Materials aufzul&ouml;sen. Wir zeigen, dass dieses neue Verfahren Serum und Gliazelle Kontamination reduziert und Proteomic Analysen axonale Inhaltsverzeichnis erleichtert.

Axoplasm Isolation von peripheren Nerven.

Localizzate le modifiche nella composizione del citoplasma assonale (assoplasma) sono fondamentali per molti processi biologici, tra cui orientamento assone, risposte a lesioni, escrescenza dei neuriti e assone-glia Interazioni. Studi di biochimici e molecolari di questi meccanismi sono stati fortemente concentrati su sistemi in vitro a causa della difficolt&agrave; di ottenere sottocellulari estratti da tessuti di mammiferi in vivo. Come in vitro sistemi non potrebbero replicare la situazione in vivo, affidabili metodi di estrazione assoplasma dall&#39;intero nervo sarebbe utile per gli Studi meccanicistici su assoni. Qui abbiamo sviluppare e valutare una nuova procedura per la preparazione di assoplasma da nervi periferici ratto, basato sull&#39;incubazione di separati brevi segmenti di fascicoli nervosi in mezzo ipotonico per separare la mielina e lyse nonaxonal strutture, seguite da estrazione del restante materiale arricchita di assone. Dimostriamo che questa nuova procedura riduce il siero e la contaminazione delle cellule gliali e facilita l&#39;analisi proteomic Sommario assonale.

Isolamento assoplasma dai nervi periferici.

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&#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB41C; axonal &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; (axoplasm)&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xBCC0;&#xD654;&#xB294; &#xB9CE;&#xC740; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xACFC;&#xC815;, &#xCD95; &#xC0AD; &#xC9C0;&#xCE68;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; neurite &#xD30C;&#xC0DD;&#xBB3C; &#xBD80;&#xC0C1;&#xACFC; axon &#xBA85;&#xACFC; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC758; &#xC0DD; &#xD654; &#xD559;&#xC801; &#xBC0F; &#xBD84;&#xC790; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xBB34; &#xAC81; &#xAC8C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC870;&#xC9C1; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; subcellular &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;&#xC744; &#xC5BB;&#xAE30;&#xC758; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6C0; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xC9D1;&#xC911; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCCB4; &#xC678;&#xB85C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC0C1;&#xD669; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC804;&#xCCB4; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; axoplasm &#xCD94;&#xCD9C;&#xC758; &#xC2E0;&#xB8B0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95; &#xCD95; &#xC0AD;&#xC5D0; &#xAE30;&#xACC4; &#xB860; &#xC801;&#xC778; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774; &#xB420; &#xAC83; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558; &#xACE0; &#xD3C9;&#xAC00; axoplasm myelin&#xB97C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD558; &#xACE0; nonaxonal &#xAD6C;&#xC870;, &#xB098;&#xBA38;&#xC9C0; &#xCD95; &#xC0AD; &#xB18D;&#xCD95; &#xBB3C;&#xC9C8;&#xC758; &#xCD94;&#xCD9C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBBF8;&#xD589;&#xC744; lyse &#xACE0;&#xC628; &#xB9E4;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xC2E0;&#xACBD; fascicles&#xC758; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB41C; &#xC9E7;&#xC740; &#xC5F4;&#xAD50;&#xD658;&#xAE30;&#xC758; &#xBD80; &#xD654;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC950; &#xB9D0; &#xCD08; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC900;&#xBE44;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC808;&#xCC28;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC0C8; &#xC774;&#xB807;&#xAC8C; &#xD608; &#xCCAD; &#xBC0F; &#xAD50; &#xC138;&#xD3EC; &#xC624;&#xC5FC; &#xAC10;&#xC18C; &#xBC0F; axonal &#xB0B4;&#xC6A9;&#xC758; proteomic &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB9D0; &#xCD08; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; axoplasm &#xACA9;&#xB9AC;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Cambios localizados en la composici&#xF3;n del citoplasma axonal (axoplasma) son fundamentales para muchos procesos biol&#xF3;gicos, incluyendo el direccionamiento del ax&#xF3;n, las respuestas a las lesiones, el crecimiento neur&#xED;tico, y las interacciones ax&#xF3;n-glia. Los estudios bioqu&#xED;micos y moleculares de estos mecanismos han sido fuertemente centrado en sistemas in vitro debido a la dificultad de obtenci&#xF3;n de extractos subcelulares de tejidos de mam&#xED;feros in vivo. Al igual que en sistemas in vitro no se puede reproducir la situaci&#xF3;n in vivo, m&#xE9;todos confiables de la extracci&#xF3;n de axoplasma de los nervios en su conjunto ser&#xED;a muy &#xFA;til para los estudios sobre los mecanismos de los axones. Aqu&#xED; desarrollar y evaluar un nuevo procedimiento para la preparaci&#xF3;n de axoplasma de nervio perif&#xE9;rico de rata, basado en la incubaci&#xF3;n de separados segements cortos de fasc&#xED;culos nerviosos en medio hipot&#xF3;nico para separar la mielina y lisar las estructuras nonaxonal, seguido por extracci&#xF3;n de los restantes ax&#xF3;n material enriquecido. Se demuestra que este nuevo procedimiento reduce la contaminaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas glial y el suero y facilita los an&#xE1;lisis prote&#xF3;micos de contenidos axonal.

Axoplasma Aislamiento de los nervios perif&#xE9;ricos

&#x9006;&#x884C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4ECE;&#x8F74;&#x7A81;&#x7D22;&#x739B;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5185;&#x5728;&#x518D;&#x751F;&#x673A;&#x5236;&#x5DF4;&#x80FA;&#x5916;&#x56F4;&#x7684;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143; &#xFF1B;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x635F;&#x4F24;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x8054;&#x7CFB;&#x4E0D;&#x662F;&#x5341;&#x5206;&#x6E05;&#x695A;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x4E8E;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x7814;&#x7A76;&#x548C;&#x57FA;&#x56E0;&#x82AF;&#x7247;&#x6307;&#x8BC1;&#x5927;&#x7EA6; 900 &#x78F7;&#x9178;&#x9006;&#x884C;&#x635F;&#x4F24;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5728;&#x5927;&#x9F20;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x5750;&#x9AA8;&#x795E;&#x7ECF;&#x8F74;&#x7A81;&#x548C;&#x80CC;&#x6839;&#x795E;&#x7ECF;&#x8282;&#x635F;&#x4F24;&#x4F53;&#x5185;&#x53CD;&#x5E94;&#x5927;&#x7EA6; 4500 &#x6210;&#x7EE9;&#x5355;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x96C6;&#x7684;&#x8BA1;&#x7B97;&#x5206;&#x6790;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x5927;&#x7EA6; 400 &#x5197;&#x4F59;&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x4FE1;&#x4EE4;&#x7F51;&#x7EDC;&#x8FDE;&#x63A5;&#x5230; 39 &#x5377;&#x5165;&#x5BF9;&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x635F;&#x4F24;&#x7684;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;&#x4E2A;&#x522B;&#x4EFB;&#x804C;&#x4EBA;&#x6570;&#x8FC7;&#x591A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x96C6;&#x7EBF;&#x5668;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC; Abl&#x3001; AKT&#x3001; p38&#x3001; &#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C &#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x6444;&#x52A8;&#x5F71;&#x54CD;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x7A81;&#x8D77;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x77DB;&#x76FE;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;Abl &#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6;&#x96C6;&#x7EBF;&#x5668;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x7684;&#x6270;&#x52A8;&#x4E86;&#x76F8;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x5355;&#x4E2A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x6444;&#x52A8;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x795E;&#x7ECF;&#x635F;&#x4F24;&#x53CD;&#x5E94;&#x7531;&#x591A;&#x4E2A;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7EC4;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x63A7;&#x5236;&#x548C;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x7F51;&#x7EDC;&#x5197;&#x4F59;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5230;&#x635F;&#x4F24;&#x54CD;&#x5E94;&#x9C81;&#x68D2;&#x6027;&#x3002;

&#x4E2D;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x9006;&#x884C;&#x635F;&#x4F24;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7F51;&#x7EDC;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;

Retrograde signaling from axon to soma activates intrinsic regeneration mechanisms in lesioned peripheral sensory neurons; however, the links between axonal injury signaling and the cell body response are not well understood. Here, we used phosphoproteomics and microarrays to implicate approximately 900 phosphoproteins in retrograde injury signaling in rat sciatic nerve axons in vivo and approximately 4500 transcripts in the in vivo response to injury in the dorsal root ganglia. Computational analyses of these data sets identified approximately 400 redundant axonal signaling networks connected to 39 transcription factors implicated in the sensory neuron response to axonal injury. Experimental perturbation of individual overrepresented signaling hub proteins, including Abl, AKT, p38, and protein kinase C, affected neurite outgrowth in sensory neurons. Paradoxically, however, combined perturbation of Abl together with other hub proteins had a reduced effect relative to perturbation of individual proteins. Our data indicate that nerve injury responses are controlled by multiple regulatory components, and suggest that network redundancies provide robustness to the injury response.

Signaling to transcription networks in the neuronal retrograde injury response.

Signalisation r&#xE9;trograde de l&#x26;#39;axone vers le soma active des m&#xE9;canismes de r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;ration intrins&#xE8;ques dans l&#xE9;s&#xE9;s neurones sensoriels p&#xE9;riph&#xE9;riques, mais les liens entre la signalisation des l&#xE9;sions axonales et la r&#xE9;ponse du corps cellulaire ne sont pas bien comprises. Ici, nous avons utilis&#xE9; phosphoprot&#xE9;omique et des micror&#xE9;seaux d&#x26;#39;impliquer environ 900 phosphoprot&#xE9;ines des blessures r&#xE9;trograde de signalisation dans les axones du nerf sciatique de rat in vivo et environ 4500 dans les transcriptions de la r&#xE9;ponse in vivo &#xE0; des blessures dans les ganglions de la racine dorsale. Analyses computationnelles de ces ensembles de donn&#xE9;es identifi&#xE9; environ 400 r&#xE9;seaux de signalisation redondants axonales connect&#xE9;s &#xE0; 39 facteurs de transcription impliqu&#xE9;s dans la r&#xE9;ponse des neurones sensoriels de l&#xE9;sions axonales. Perturbation exp&#xE9;rimentale de l&#x26;#39;individu surrepr&#xE9;sent&#xE9;s prot&#xE9;ines de signalisation, y compris les moyeux Abl, AKT, p38, et la prot&#xE9;ine kinase C, affect&#xE9; la croissance des neurites dans les neurones sensoriels. Paradoxalement, cependant, des perturbations combin&#xE9; de Abl ainsi que les prot&#xE9;ines du moyeu d&#x26;#39;autres ont eu un effet r&#xE9;duite par rapport &#xE0; la perturbation des prot&#xE9;ines individuelles. Nos donn&#xE9;es indiquent que les r&#xE9;ponses des blessures nerveuses sont contr&#xF4;l&#xE9;s par de multiples composants de r&#xE9;gulation, et de sugg&#xE9;rer que les licenciements du r&#xE9;seau offrent la robustesse de la r&#xE9;ponse des blessures.

Signalisation aux r&#xE9;seaux de transcription dans la r&#xE9;ponse neuronale r&#xE9;trograde des blessures

Retrograde Signalisierung von Axon Soma aktiviert systeminterne Regenerierung Mechanismen in lesioned periphere sensorische Neuronen; Allerdings sind die Verbindungen zwischen axonale Sch&auml;digung zu signalisieren und die Zellk&ouml;rper Antwort nicht gut verstanden. Hier haben wir Phosphoproteomics und Microarrays rund 900 Phosphoproteine retrograde Verletzungen signalisieren in Ratte Ischiasnerv Axone in-vivo und etwa 4500 Abschriften der in-vivo als Reaktion auf Verletzung in den Spinalganglien hineinzuziehen. Computational Analysen diese Datens&auml;tze identifiziert rund 400 redundante axonale Signalling verbundenen Netzwerke zu 39 Transkriptionsfaktoren, die die sensorischen Neuron-Reaktion auf axonale Sch&auml;digung in Verbindung gebracht. Experimentelle St&ouml;rung individueller &uuml;berrepr&auml;sentiert Signalling Hub-Proteine, einschlie&szlig;lich Abl, AKT, p38 und Proteinkinase C, betroffen Neurit Auswuchs in sensorischen Neuronen. Paradoxerweise hatte jedoch kombinierte St&ouml;rung von Abl zusammen mit anderen Proteinen Nabe eine geringere Wirkung im Verh&auml;ltnis zu einer St&ouml;rung der einzelnen Proteine. Unsere Daten zeigen, dass Nerven Verletzung Antworten von mehreren regulatorische Komponenten kontrolliert werden und schlagen vor, da&szlig; Netzwerk Entlassungen Robustheit der Verletzung Antwort bieten.

Signalisierung Transkription Netzwerke in der neuronalen retrograde Verletzungen-Antwort.

Segnalazione retrograda dall&#39;axon a soma attiva meccanismi di rigenerazione intrinseco in elettivamente neuroni sensoriali periferici; Tuttavia, i collegamenti tra la segnalazione di danno assonale e la risposta del corpo cellulare non sono ben compresi. Qui, abbiamo usato phosphoproteomics e microarrays per implicare circa 900 fosfoproteine retrograda lesioni segnalazione in circa 4500 trascrizioni nella risposta in vivo a lesioni nei gangli spinali e assoni di nervo sciatico di ratto in vivo. Analisi computazionale di questi insiemi di dati identificati circa 400 ridondante assonale segnalazione reti collegate al 39 fattori di trascrizione implicati nella risposta al danno assonale neurone sensoriale. Perturbazione sperimentale di singoli sovrarappresentati segnalazione hub proteine, tra cui Abl, AKT e p38 chinasi di proteina C, colpite escrescenza dei neuriti in neuroni sensoriali. Paradossalmente, tuttavia, perturbazione combinato di Abl insieme ad altre proteine hub ha avuto un effetto ridotto rispetto alla perturbazione delle singole proteine. I nostri dati indicano che risposte lesioni nervose sono controllate da pi&ugrave; componenti di regolamentazione e suggeriscono che licenziamenti rete forniscano robustezza alla risposta lesioni.

Segnalazione alle reti di trascrizione nella risposta lesione neuronale retrograda.

&#x8EF8;&#x7D22;&#x304B;&#x3089;&#x7D30;&#x80DE;&#x4F53;&#x3078;&#x306E;&#x9006;&#x884C;&#x6027;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306F;&#x3001;&#x75C5;&#x5909;&#x672B;&#x68A2;&#x611F;&#x899A;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x518D;&#x751F;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x8EF8;&#x7D22;&#x640D;&#x50B7;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x4F53;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x306F;&#x3001;&#x3088;&#x304F;&#x7406;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x5750;&#x9AA8;&#x795E;&#x7D4C;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E;&#x9006;&#x884C;&#x6027;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3051;&#x304C;&#x3067;&#x7D04;900&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x5DFB;&#x304D;&#x8FBC;&#x3080;&#x3068;&#x5F8C;&#x6839;&#x795E;&#x7D4C;&#x7BC0;&#x306E;&#x640D;&#x50B7;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x751F;&#x4F53;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x7D04;4500&#x8EE2;&#x5199;&#x3059;&#x308B;phosphoproteomics&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x8A08;&#x7B97;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x8EF8;&#x7D22;&#x640D;&#x50B7;&#x306E;&#x611F;&#x899A;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;39&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306B;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x7D04;400&#x5197;&#x9577;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#xB7;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x3092;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x6442;&#x52D5;&#x306F;&#x3001;ABL&#x3001;AKT&#x3001;P38&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;C&#x3001;&#x611F;&#x899A;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x305F;&#x795E;&#x7D4C;&#x7A81;&#x8D77;&#x4F38;&#x9577;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x30CF;&#x30D6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x3001;&#x4EE3;&#x8868;&#x8005;&#x306E;&#x591A;&#x904E;&#x304E;&#x308B;&#x3002;&#x9006;&#x8AAC;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x30CF;&#x30D6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;Abl&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x6442;&#x52D5;&#x306F;&#x3001;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6442;&#x52D5;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x6E1B;&#x5C11;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x640D;&#x50B7;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306F;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x6210;&#x5206;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x5197;&#x9577;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x50B7;&#x5BB3;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x5805;&#x7262;&#x6027;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x795E;&#x7D4C;&#x9006;&#x884C;&#x6027;&#x50B7;&#x5BB3;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x3078;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;

Lesioned &#xC8FC;&#xBCC0; &#xAC10;&#xAC01; &#xB274;&#xB7F0;;&#xC5D0; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC7AC;&#xC0DD; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC18C;&#xB9C8;&#xB97C; &#xCD95; &#xC0AD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD1F4;&#xD589; &#xC131; &#xC2E0;&#xD638; &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, axonal &#xBD80;&#xC0C1; &#xC2E0;&#xD638; &#xBC0F; &#xC140; &#xBC14;&#xB514; &#xC751;&#xB2F5; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xB9C1;&#xD06C;&#xB294; &#xC798; &#xC774;&#xD574; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD1F4;&#xD589; &#xC131; &#xBD80;&#xC0C1; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC950; &#xC88C; &#xACE8; &#xC2E0;&#xACBD; &#xCD95; &#xC0AD;&#xACFC; &#xB290; &#xB8E8;&#xD2B8; &#xC911;&#xCD94;&#xC5D0; &#xBD80;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC57D; 4500 &#xB179;&#xCDE8; &#xB85D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC57D; 900 phosphoproteins &#xC5F0;&#xB8E8;&#xB97C; phosphoproteomics &#xBC0F; microarrays &#xC0AC;&#xC6A9;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC138;&#xD2B8;&#xC758; &#xC804;&#xC0B0; &#xBD84;&#xC11D; &#xC57D; 400 &#xC911;&#xBCF5; axonal &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; axonal &#xBD80;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC10;&#xAC01; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5F0;&#xB8E8; 39 &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778; &#xD655;&#xC778;. &#xAC1C;&#xBCC4; overrepresented &#xC2E0;&#xD638; &#xD5C8;&#xBE0C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, Abl, AKT, p38, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; C, &#xB4F1;&#xC758; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC801;&#xC778; &#xC12D; &#xB3D9; neurite &#xD30C;&#xC0DD;&#xBB3C; &#xAC10;&#xAC01; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xC5ED;&#xC124;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;,, &#xB2E4;&#xB978; &#xD5C8;&#xBE0C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD568;&#xAED8; Abl&#xC758; &#xACB0;&#xD569; &#xB41C; &#xC12D; &#xB3D9; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC12D; &#xB3D9;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC778; &#xAC10;&#xC18C; &#xD6A8;&#xACFC;&#xAC00; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBD80;&#xC0C1; &#xC751;&#xB2F5; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xADDC;&#xC81C; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xC5B4; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xC911;&#xBCF5; &#xACAC;&#xACE0;&#xC131; &#xBD80;&#xC0C1; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2E0;&#xACBD; &#xD1F4;&#xD589; &#xC131; &#xBD80;&#xC0C1; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xC0AC; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xC2E0;&#xD638;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Se&#xF1;alizaci&#xF3;n retr&#xF3;grada del ax&#xF3;n hasta el soma activa los mecanismos intr&#xED;nsecos de regeneraci&#xF3;n en las neuronas sensoriales perif&#xE9;ricas lesionadas, sin embargo, los v&#xED;nculos entre la se&#xF1;alizaci&#xF3;n de lesi&#xF3;n axonal y la respuesta de las c&#xE9;lulas del cuerpo no son bien entendidos. En este caso, hemos utilizado fosfoprote&#xF3;mica y microarrays para implicar a unos 900 fosfoprote&#xED;nas en la lesi&#xF3;n retr&#xF3;grada de se&#xF1;alizaci&#xF3;n en los axones del nervio ci&#xE1;tico de ratas in vivo y de cerca de 4.500 expedientes en la respuesta in vivo a una lesi&#xF3;n en los ganglios de la ra&#xED;z dorsal. An&#xE1;lisis computacional de estos conjuntos de datos identificado aproximadamente 400 redes redundantes de se&#xF1;alizaci&#xF3;n axonal conectados a 39 factores de transcripci&#xF3;n implicados en la respuesta de las neuronas sensoriales a la lesi&#xF3;n axonal. Perturbaci&#xF3;n experimental del individuo excesivamente representados prote&#xED;nas de se&#xF1;alizaci&#xF3;n del cubo, incluyendo Abl, AKT, p38 y la prote&#xED;na quinasa C, fruto afectado neuritas en las neuronas sensoriales. Parad&#xF3;jicamente, sin embargo, perturbaci&#xF3;n combinada de Abl junto con las prote&#xED;nas otro cubo ten&#xED;a un efecto reducido en relaci&#xF3;n a la perturbaci&#xF3;n de las prote&#xED;nas individuales. Nuestros datos indican que las respuestas nerviosas de lesiones son controlados por m&#xFA;ltiples elementos de regulaci&#xF3;n, y sugieren que los despidos de red proporcionan robustez a la respuesta de la lesi&#xF3;n.

Meir Rozenbaum

Department of Biological Chemistry

Weizmann Institute of Science

Axoplasm Isolation from Rat Sciatic Nerve

Meir Rozenbaum

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Biological Chemistry

Weizmann Institute of Science

Axoplasm Isolation from Rat Sciatic Nerve

Department of Biological Chemistry