11.24 : Afinite Kromatografisi

Afinite kromatografisi, karmaşık karışımlardan belirli biyomolekülleri ayırmak ve saflaştırmak için yaygın olarak kullanılan güçlü bir tekniktir. Bu yöntem, analit ile eşleniği arasındaki son derece seçici bağlanmadan yararlanır, örneğin antikor-antijen etkileşimleri gibi. Eşlenik, sabit fazda immobilize edilir ve bir afinitesel kolon oluşturur. Sabit faz genellikle agaroz veya gözenekli cam boncuklar gibi katı desteklerden oluşur ve afinitesel ligand bu destek üzerine immobilize edilir. Mobil faz, analit ve ligand arasındaki güçlü bağlanmayı desteklemenin yanı sıra, etkileşimi zayıflatıp analiti elüe etmek için de çift amaçlı kullanılır. Karışım, istenilen analiti içerecek şekilde kolondan geçirilirken sadece analizör bağlanır, diğer maddeler ise yıkanarak geçer. Bağlanmış analit, pH veya iyonik güç gibi koşullar değiştirilerek, bağlanma zayıflatılarak elüe edilebilir.

Bu yöntem, proteinleri, enzimleri, substratları, antikorları, antijenleri, reseptörleri ve hormonları izole etmedeki özgüllüğü ve uygulaması nedeniyle biyokimyada özellikle değerlidir. Afinite kromatografisi, farklı terapötik etkiler gösterebilen ilaçların bireysel optik izomerlerini izole etmek için de kullanılabilir. Bu işlem, her stereoizomere özgü monoklonal antikorların kullanılmasını içerir.

Afinite kromatografisinin en önemli avantajı, onu preparatif çalışmalarda biyomoleküllerin hızlı izolasyonu için ideal kılan olağanüstü özgüllüğüdür.