Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.
Method Article
Mikroakışkan bir adacık perifusion cihazı, çok sayıda adacık ve kalsiyum girişini ve mitokondriyal potansiyel değişiklikleri eş zamanlı olarak floresan görüntüleme dinamik insülin salgılanması değerlendirilmesi için geliştirilmiştir.
Mikroakışkan bir adacık perifusion cihazı, çok sayıda adacık ve kalsiyum girişini ve mitokondriyal potansiyel değişiklikleri eş zamanlı olarak floresan görüntüleme dinamik insülin salgılanması değerlendirilmesi için geliştirilmiştir. Cihaz üç tabakadan oluşur: İlk katman maruz kaldığında, maruz kalan yüzey alanını adacıklar akışı ve en üst düzeye çıkarmak için adacıklar hareketsiz yardımcı microscale kuyular (500 mikron çapında ve 150 mikron derinliğinde) bir dizi içerir; ikinci kat bir genelge içerir perifusion odası (3 mm derinliğinde, 7 mm çapında) ve üçüncü katman bir giriş karıştırma kanal içerdiğini fanlar önce optimize etmek için perifusion odasına enjeksiyon (genişliği 2 mm, 19 mm uzunluğunda, ve yüksekliği 500 mm) karıştırma verimlilik perifusion odasına girmeden önce. Doğrusal bir çan şekli de dahil olmak üzere çeşitli glukoz degradeler, ve kare şekiller oluşturma mikroakışkan perifusion ağı oluşturulacak ve gösterilmiştir.
3-katmanlı mikroakışkan perifusion cihazın A. mikroimalat
Alt Eh Master Protokolü (150 mm derin kuyu)
Mikrokanal Yüksek Lisans Protokolü (500 mm derin kuyu)
PDMS çözüm hazırlığı
B. deney düzeneği
Temsilcisi Sonuçlar
Fare adacıklar 2-25 mM glukoz doğrusal bir degrade ile perifused. Şekil 1'de gösterildiği gibi, kalsiyum akını ve insülin salgılanması 6 mM glukoz ilgili perifusion yaklaşık 13 dakika sonra tetiklenir. Mitokondrial potansiyelleri değişiklikler, yaklaşık 11 dakika beklendiği gibi daha erken görülür. Bu veri, adacık fizyoloji karakterize etmek için bu mikroakışkan ağını kullanarak avantaj göstermektedir.
Şekil 1: Adacık hücre stimülasyonu için fizyolojik tepkiler .
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Geleneksel adacık perifusion sistemleri (macroscale ve microscale), kurulum ve tasarım, yüksek teknik gereklilikler ve sistem kullanıcı öngörülen kimyasal degradeler oluşturmak için zorluk karmaşık dahil olmak üzere, bazı kısıtlamalar var. Burada açıklanan mikroakışkan perifusion sistemi basit tasarım ve imalat geometri ile bu sınırlamaların üstesinden gelir. Daha da önemlisi, bu sistem adacık fizyoloji çalışmak için benzersiz bir araç olarak sağlayan floresan görüntüleme yaklaşımı...
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Bu çalışma, Adeola Adewola, NIH / NCRR (U42RR023245) Jose Oberholzer ve Chicago Diyabet Proje AAUW uluslararası burs tarafından desteklenmiştir.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
60ml Syringes | BD Biosciences | ||
Fura-2 fluorescence dye | Molecular Probes, Life Technologies | ||
Rhodamine123 Fluorescence dye | Molecular Probes, Life Technologies | ||
Glucose | Sigma-Aldrich | ||
Bovine Serum Albumin | Sigma-Aldrich | ||
30" Silicone tubings | Cole-Parmer | 1/16 x 1/8in | |
1.5ml Eppendorf tubes | Fisher Scientific | ||
Y-connectors | Cole-Parmer | 1/16” & 4mm | |
Syringe connectors | Cole-Parmer | female luer plug 1/16” | |
Straight connectors | Cole-Parmer | 1/16” | |
Elbow connector | Cole-Parmer | 1/16” | |
Havard syringe pump | Harvard Apparatus | ||
Perifusion device | |||
Hot plate | PMC | ||
Thermometer | Omega Engineering, Inc. | ||
Fraction collector | Gibson | ||
Pippettor | Fisher Scientific | ||
Inverted epiflorescence microscope | Olympus Corporation | IX71 | |
Charge-coupled device | QImaging | Retiga-SRV, Fast 1394 |
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır