Sosyal Etkileşim Davranışları Değerlendirme

Özet

Burada Crawley sosyallik ve sosyal yenilik testi için tercih kullanarak farelerde sosyallik incelenmesi için ayrıntılı bir protokol açıklar. Biz sonuçların doğru yorumlanması için önemli kritik ayrıntılar da dahil olmak üzere bu işlem için avantaj ve olası uygulamalar açıklanmaktadır.

Özet

Sosyal etkileşimler sayısız türlerin biyoloji ve adaptif temel bir bileşenidir. Sosyal tanıma, toplumların tanımlamak ağlar ve ilişkiler yapısını ve istikrar için kritik öneme sahiptir. Örneğin, fare gibi hayvanların, conspecifics tanınması ve eş seçimi ¹ sosyal hiyerarşinin korunması için önemli olabilir.

Çeşitli nöropsikiyatrik bozuklukları, depresyon, otizm spektrum bozuklukları, bipolar bozukluklar, obsesif-kompulsif bozukluklar ve şizofreni dahil olmak üzere, sosyal davranış ve sosyal tanıma kesintileri ile karakterizedir. Insanlar gibi hayvan modellerinde (örneğin, Drosophila melanogaster, Caenorhabditis elegans, Mus musculus, Rattus norvegicus) çalışmaları, sosyal ^davranış 2 yönetmelikle ilgili genler tespit ettik . Hayvan modellerinde sosyallik, birçok davranışsal testler geliştirilmiştir ⁽³⁾ değerlendirmek için. Bütünleştirici araştırma, hayvan modelleri ve sosyal davranış için uygun testler kullanarak, sosyal psikopatolojiler için geliştirilmiş tedaviler gelişimine yol açabilir.

Crawley sosyallik ve sosyal yenilik protokol için tercih olarak bilinen üç odacıklı paradigma testi başarıyla birkaç kendilenmiş ve mutant fare hatları (örneğin ^4-7), sosyal bağlı ve toplumsal hafıza çalışması için istihdam edilmiştir . Bu testin ana prensip, alışılmadık olan bir ya da iki fare ile dolaylı temas da dahil olmak üzere iki deneysel oturumları sırasında üç kutusunun bölmelerin herhangi bir vakit geçirmek için bir konu fare ile özgür seçim dayanmaktadır. Deneysel fare sosyal eğilimlerini ölçmek için, ana görevleri, bir conspecific roman ve b) tercih tanıdık bir conspecific vs bir roman ile harcanan a) zamanı ölçmek için. Bu nedenle, bu test, deney tasarımı gibi sosyal ilişkisi / motivasyon, toplumsal hafıza ve yenilik yanı sıra sosyal davranışı, iki kritik ama ayırt yönlerini değerlendirme sağlar. Bu durumda "Girişkenlik" aynı ama boş bir ^odasına 7 yalnız geçirdim ile karşılaştırıldığında, başka bir fare ile zaman harcamak eğilimi olarak tanımlanır . "Sosyal yenilik tercihi" tanıdık bir fare ⁷ ile daha önce unencountered bir fare ile zaman harcamak yerine eğilimi olarak tanımlanır . Bu test, sonra dikkatlice analiz edilip yorumlanır ve desteklenen / alternatif sosyallik testleri ile teyit edilmelidir sağlam sonuçlar sağlar. Crawley sosyallik testi özel uygulamalara ek olarak, mutant farelerin genel davranış ekran önemli bir bileşeni olarak dahil edilebilir.

Protokol

1. Ekipman ve Oda Set Up:

1. Crawley sosyallik ve sosyal yenilik testi için tercih aygıtı bir dikdörtgen, üç odacıklı kutusu oluşur. Her odası 19 x 45 cm ve her iki mecliste de ücretsiz erişim sağlayan bir açık orta bölümü, bölme duvarları ile açık Pleksiglas yapılır.
2. Iki özdeş, telli fincan gibi çıkarılabilir kapaklı kaplar yeterince büyük, tek bir fare tutmak için kullanın. Bu cihaz, her iki tarafında odasında içinde dikey olarak yerleştirilir ve naif / alışılmadık bir fare içerecektir. Her konteyner, ama önlemek için yeterince küçük silindir dışında biri ile içinde bir hayvan arasında doğrudan fiziksel etkileşimleri iç ve dış arasındaki hava değişimi için izin metal teller oluşur.
3. Davranışsal test saat 09:00 arasında yapılır ve 6:00 pm olmalıdır.
4. Genel oda aydınlatma 650 lüks.
5. Bölüm 4.3 'de belirtilen gözlem ve izleme ve kayıt parametrelerini takip etmek Observer 6.0 (Noldus) programı (veya uygun bir alternatif), çalıştırmak.
6. Her bir yargılama sonucunda,% 70 etanol (fareler arasında) ile tüm odaları temiz ve daha sonra Clidox 01:05:01 (kafesler arasında) ile koku alma işaret önyargı önlemek için ise, uygun dezenfeksiyon sağlamak için.
7. Gözlemi yapan kişi, cihazın en az 2 metre uzakta olması gerekir.

2. Hayvan Hazırlanışı:

1. Yerel Hayvan Bakım Komitesi rehberlik ve protokoller standartlarına ve ihtiyaçlarına göre yiyecek ve su ad libitum erişimi ile 12 saat ışık / karanlık döngüsü (7:00 am ışıklar) bir oda, kafesli başına House 04:57 fareler,.
2. Ilk deneme başlamadan 30 dakika önce davranışsal odasına fareler içeren tüm kafesleri aktarın.
3. Bu deney için gerekli fare iki sınıf, bir kontrol, naif ya da "unfamiliarized" hayvan ve test konu gibi davranır vardır. Kontrol fare konu fare (littermates) ile önceden temas olmadan, aynı arka plan (genellikle C57BL6), yaş (genellikle 8-12 hafta eski), cinsiyet ve kilo bir fare kullanmak için. İki kontrol farelerinden Deneme başına, bir oturumda oturum II ve başka bir için kullanılır. Aynı kontrol fareler denemeler arasında kullanılıyor olabilir.

3. Alışma (adaptasyon):

1. Pleksiglas duvarlar bölme ile sağ ve sol bölme izole edin.
2. Sağ ve sol odası (her site için bir) ortasında boş tel çevreleme bardak yerleştirin.
3. Adaptasyon için orta odasının merkezinde konu fare yerleştirin.
4. 5 dakika için alıştırarak.

4. Test Sosyal Affiliate-Boy (oturum):

1. Yan odalarının birinde bulunan bir tel çevreleme fincan içinde kontrol farelerinden biri ("Stranger 1") yerleştirin. Stranger odasının sağ ya da sol tarafında 1 yerleştirme sistematik çalışmalarda arasında değişir.
2. Bölmeleri arasındaki duvarları konu fare için ücretsiz erişim her üç odaları keşfetmek için izin çıkarın.
3. Hemen aşağıdaki parametrelerin izlenmesi ve kayıt başlar:
   1. süresi ve
   2. her odası için ayrı ayrı konu fare ve çevreleme fincan konut ya da konut Stranger 1 fare (aktif) arasında doğrudan temas, sayısı. Konu fare ve çevreleme bardak, fincan yaklaşık 3-5 cm, aktif bir kişi olarak sayılır bir alanda konu fare vücudun gerilmesi arasında doğrudan temas;
   3. süresi ve
   4. yürüme 5 saniyeden fazla ("donma") için herhangi bir vücut hareketleri, kendi kendine bakım eksikliği yanı sıra, atlama, tekrarlayan davranış, vb gibi alışılmadık davranışlar da dahil olmak üzere her bölmesi konu fare ile diğer davranışları, sayısı;
   5. süresi ve
   6. her bölme girişlerin sayısı. Merkez ve dört pençeleri odasına girdikten sonra fare odasında kabul edilir.
4. Oturumun süresi 10 dakikadır.

5. Testi Sosyal Yenilik / tercih Session (Oturum II):

1. Özdeş bir tel çevreleme fincan içinde karşı tarafa odasında ikinci bir kontrolü fare ("Stranger 2") (I. Oturum sırasında boş olmuştu o) yerleştirin. Stranger 2 ile karşılaştırıldığında 1 Stranger varlığı konu fare arasında davranışları ayırt 4.3 'te açıklanan aynı parametreler izleyin.
2. Oturumda II süresi 10 dakikadır.

6. İstatistiksel Analiz:

1. Kökeni 6.0 programını kullanarak (ya da uygun bir alternatif) kaydedilen verileri kullanarak, aşağıdaki parametreleri analiz:
   1. kişilerin toplam sayısı ve
   2. deneysel mous arasındaki temasların toplam süresie ve boş çevreleme vs fincan ya da bardak konut Stranger 1 (oturumda Ben), ya da deneysel fare ve fincan konut Stranger 1 vs Stranger 2 (II) oturumda arasındaki;
   3. kişi başına ortalama süresi;
   4. diğer davranışların toplam sayısı ve süresi (yürüyüş, kişisel bakım, dondurma)
   5. toplam süre her bölmesi konu fare ile geçirdi.
2. Önemli farklılıklar söz konusu parametrelerin her biri için gruplar karşılaştırarak analiz:
   1. Vahşi tip için "Boş" çevreleme bardak vs "Stranger 1" (WT) konu
   2. Deneysel fare (örneğin bir afet ya da ilaç ile tedavi edilen transgenik fare, vb) için "Boş" çevreleme bardak vs "Stranger 1".
   3. WT bir konu için "Stranger 1" vs "Stranger 2"
   4. Deneysel fare için "Stranger 1" vs "Stranger 2" (nakavt, transgenik, ya da ilaç ile tedavi edilen, vb).
3. Oturum olarak söz konusu parametrelerin her bir veri kümesi Şimdiki: WT ve deneysel konuları; Oturum II: Şekil 1'de gösterildiği gibi WT ve deneysel konularda, (A ve B) ve 2 (A ve B), sırasıyla.

Aynı zamanda, koklama, tımar, sürtünme, mücadele, montaj gibi öznel kişisel gözlem büyük ölçüde bağımlı olabilir belirli bir fare davranış kalıpları, tanımak önceden deneyim olarak bu test standartlaştırarak yardımcı göz, diğer parametreler dikkate alınması tavsiye edilir . Davranış parametreleri test sırasında kaydedici gibi davranan kişi, genotip ya da tedavi koşulları ve bu bilgileri daha sonra çözümlenmiş kör olmalıdır.

7. Temsilcisi Sonuçlar:

Sosyal etkileşim testi iki adım bir örneği Şekil 1 ve 2'de gösterilmiştir. Testin ilk oturumunda, sosyal bağlılık ve konu fare motivasyon tahmini sağlar. Testin bu bölümünde, yabancı fare burun temas izin dairesel bir tel fincan içine, ama fareler arasındaki mücadele engelledi. Bu koşullar, sosyal yaklaşımlar konu fare tarafından başlatılan ve direkt fiziksel temas olmadan, sadece soruşturma olduğunu emin olun. Fare yabancı fare içeren çevreleme fincan etrafında daha fazla zaman geçirmek ya da boş bardak bölmesi hareket ederek herhangi bir teması önlemek için seçim vardır. Bireysel temaslar sayısı gibi diğer parametreler, yabancı fare yakın geçirdi süresine ek olarak kullanılabilir.

Genellikle, vahşi bir hayvan normal sosyallik, sosyal motivasyon ve bağlılık gösteren, boş bir kap (Şekil 1A) bölmesine göre Stranger 1 ile bölmeye önemli ölçüde daha fazla zaman geçireceksiniz. GSK-3α knockout farelerde, örneğin, bu hayvan modelinde ⁶ bozulmuş sosyallik gösteren yabancı 1 fincan (Şekil 1B) ile karşılaştırıldığında boş bir kap ile harcanan zaman arasındaki önemli farklılıklar vardır.

Testin ikinci oturumunda, sosyal yenilik ve toplumsal hafıza tahmin etmek için tasarlanmıştır. Bu bölümde, konu fare ilk, zaten araştırıldı, yabancı fare (Stranger 1) arasında bir seçim ve bir roman alışılmadık fare (Stranger 2) vardır. Genellikle, bir WT hayvan önceki iletişim Stranger 1 ile hatırlıyor ve bu oturumda, roman deneyimleri (Şekil 2A) bozulmamış toplumsal hafıza ve yeğleme gösteren, yeni karşılaşılan fare (Stranger 2) ile daha fazla zaman harcamak eğilimi.

Wild-tip farelerden farklı olarak, GSK-3α mutant hayvanlar oturumda II (Şekil 2B) artık tanıdık bir fare (Stranger 1) içeren bir oda üzerinden yeni tanıtılan fare (Stranger 2) içeren odası için tercih görünmüyor. Bu test KO farelerde azalmış sosyal motivasyon ve yenilik İlgisiz davranış göstergesidir.

Şekil 1. Oturum: Sosyal bağlılık ve sosyallik. Ters odası ("boş tarafı") ile karşılaştırıldığında yabancı ("yabancı tarafına") ile odasında zaman uzunluğu ortalama (± SEM). WT erkeklerin aksine (A), KO (B) Hayvanların her iki mecliste de aynı zamanda harcama sosyal yakınlık için bir tercih göstermek için başarısız oldu. *** WT grup p ≤ 0.0001.

Şekil 2: Oturum II. Sosyal bellek ve yenilik. Sosyallik faz ("Stranger 1") alışılmadık fare ile oda ve yeni alışılmadık bir fare ("Stranger 2") ile ters odasında zaman süresi (± SEM) anlamına gelir. WT erkeklerin aksine (A), KO (B) Hayvanların her iki mecliste de aynı zamanda harcama sosyal yenilik için bir tercih göstermek için başarısız oldu. *** WT grup p ≤ 0.0001.

Tartışmalar

Mus musculus karşılıklı sosyal etkileşimler, toplumsal yuvalama, cinsel ve ebeveynlik davranışları toprak kokusu, işaretleme ve agresif davranışlar ^8-10 yüksek seviyede yürütmektedir sosyal bir türdür. ^(3), farelerde sosyal davranış incelemek için çeşitli testler geliştirilmiştir . Burada, farelerde sosyallik değerlendirmek için yaygın olarak istihdam edilen bir test sunuyoruz. Crawley sosyallik ve sosyal yenilik testi için tercih başlangıçta Crawley ve arkadaşları, ^{7, 11} tarafından geliştirilmiştir. Benzer prosedürleri kullanarak sosyallik incelenmesi için veri güvenilirliği, sosyal köken, toplumsal hafıza ve tercihi, geliştirmek üç odacıklı paradigması, çeşitli avantajları vardır. Bu testin ana özgüllüğü bir tel fincan altına yerleştirilen ve serbestçe hareket edemiyor, daha önce söz konusu hayvanın bir fare unencountered bir tasarıma sahiptir. Bu mücadele ve / veya saldırgan davranışlar ortadan kaldırarak, doğrudan fiziksel temas engeller, ancak duyusal etkileşimler (koku, görüntü, ses, tat) sağlar. Bu koşullar altında, her zaman alışılmadık fare vs boş konteyner (1 oturumu) arasında, ya da tanıdık roman fare (Stranger 2) vs fare (Stranger 1) arasında bir seçim olan deneysel fare, herhangi bir etkileşimleri başlatır ve sonlandırır. Örneğin, tek meclisli bir sosyal etkileşim testleri, konu fare aynı odasında bir yabancıya maruz kalan ve iki fareler serbestçe hareket edebilmek yılından bu yana söz konusu aktif fiziksel temas egemen olma eğilimindedir ve ortadan kaldırılamaz. Üç odacıklı aparat konu fare yakınlık kalır ya da uzak Stranger fare taşımak için tipik bir tek odasının cihazı, çok daha büyük. Böylece, Crawley sosyallik test stres düzeyi düşük ve çoğunlukla bir roman çevre, örneğin farklı yaşlarda aynı fare kohort, zaman içinde bu testin tekrarlanması sağlar deneysel fare koyarak neden: Balıkların vs yetişkin. Genç bir grup hayvan aynı ama büyük bir kohort ile karşılaştırarak, onu takip etmek ve sosyal tanıma vs toplumsal hafıza ve / veya bilişsel bozukluklar, 2. Oturum görülebilir bozukluğu arasında ayrımcılık mümkün, ve ilgili yaş bağımlı fizyolojisi.

Bu test, göreceli olarak bir dezavantaj olduğu, zaman alıcı (~ 40 dakika fare başına düşen). Ancak, belirli parametreler birden fazla repertuarları sağlam analiz izin, (manuel ve / veya video) izlenmeli ve recoded olabilir. Örneğin, bazı dondurma ve / veya kendi kendine bakım davranışı gibi ek parametreler, anksiyete artışı gösterebilir ve sosyal davranış için motivasyon azalmıştır. Fareler aynı protokolü kullanarak, sosyal anksiyete bir etkisi ekarte etmek için ertesi gün aynı Stranger 1 fare ile yeniden test edilebilir. Ek parametreler (kuyruk rattling gibi, ısırma Stranger 1 bulunan tel fincan), karşı saldırgan karşı sıradışı roman hayvan dostu davranışları ayırt yardımcı olabilir. Gözlenen anksiyete deney odası, aşırı oda aydınlatması, yoksul fare sağlık, ya da genetik modifikasyon ve / veya neophobia (bazı KO modellerde) sonucunda farelerin uygunsuz adaptasyon nedeniyle olabilir. Ayrıca, engelli alışkanlık kognitif bozukluk olarak yorumlanır ve ikinci seans sonuçlarını etkileyebilir. Bunu test etmek için farelere tabi önce, vücut ısısı ve ağırlığı, kat muayene ve refleks muayeneleri aşağıdaki serisi de dahil olmak üzere, genel sağlık ve nörolojik tarama tabi hayvanlar, önemli: Whisker, düzeltilmesi, Kulak-Twitch, ulaşmak ve Anahtar Jangling ( açıklanan) ^12-15. Ek davranışsal testler ayrımcı spesifik tepkiler almak yararlı olabilir. Kişileri ve / veya belki de bir açık alan testi (lokomotor aktivitesini ölçmek için) kullanarak teyit edilebilir özel fare lekeleri, hiperaktif davranışları ile ilişkili aktif kişilerin toplam süresi bir artış sayısında artış. Kişi azalmış süresi ve / veya numara depresif ve / veya anksiyete gibi davranış, ^{(6, 13,} sırasıyla FST, TST veya EPM, sıfır labirent, açık / koyu testler kullanarak değerlendirilebilir ile ilişkili olabilir ^{, 15).}

Bir kez uygun koşullar uygulanır ve gözlenen önemli farklılıklar, bulguları teyit etmek amacıyla, testler takip gerçekleştirmek için bir gereklilik yoktur. Koku tanıma ^{16, 17} bireysel vomeronasal organ blokları kimyasal indüklenen anosmi veya kaldırma ya da bu yana, kemirgenler sosyal tanınması önemli bir rol oynar . Fare, bir roman koku sniff ve daha sonra hızlı bir şekilde, yenilik alışmakta eğilimindedir. Koku alma ampul test ^{(6, 7} açıklanan) bu amaç için kullanılabilir.

Zaman inceleyerek anne davranış tahmini gibi üç bölmesi odası sosyallik test uyarlamaları ve alternatif kullanımı, aynı zamanda vardırtest edilmiş bir kadın / erkek fincan altında bir oturumda yerine Stranger 1 erkek / kadın ¹ 7 yanıtı değerlendirmek, onun yavrular (anne motivasyon yansıtan), hem de cinsel motivasyon içeren bir fincan proksimal bir konu kadın tarafından ^harcanan , ^11.

Ayrıca testleri gibi ev kafesi ve / veya bir roman bir ortamda sosyal etkileşim (tek meclisli bir sosyal etkileşim testi) gibi alternatif yaklaşımlar / paradigmalar kullanarak farelerde sosyallik incelemek için kullanılabilir, ikamet eden saldırgan, bölüm testi, sosyal bir yaklaşım testi karşılıklı sosyal etkileşim, vb ^{(3, 18} yılında açıklanan). Sonik ve ultrasonik aralıkları, görsel ipuçları, tat ve dokunma yöntemleri seslenmelere bilgi iletişim ve sosyal bağlar ⁽¹⁹ gözden) de katkıda bulunabilir.

Engelli sosyallik ve düzensiz sosyal davranış birçok psikiyatrik bozukluklar için ayırt edici niteliği olarak suçlanmıştır. Örneğin, otizm spektrum bozukluğu ve şizofreni, sosyal biliş ve sosyal ^davranış 20 işaretli açıkları, ve sosyal ilişkiler ^sonucu 21 depresyon riski kesintileri ile karakterize her ikisi de . Bu nedenle, burada açıklanan test, söz konusu koşulların hayvan modellerinde kullanılabilir. Ayrıca, bu test sosyallik farmakolojik bileşikler ^{(3, 22-24)} potansiyel etkilerini değerlendirmek için geçerli.

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Ethanol 70% (commercial Alcohols)	MSH	19901
Clidox 1:5:1 Base Activator	Pharmacal	96130F 95130F	1 part Base to 5 parts water to 1 part Activator