Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.
Görselleştirilmesi ve fare hepatik ven veya intrahepatik safra kanalı 3-boyutlu yapısının nicel bir yöntem tarif edilmektedir. Bu reçine döküm yöntemiyle aynı zamanda diğer duktal ya da damar sistemlerine uygulanabilir ve olanak edilebilir In situ Bir sistemin sağlam iletişim mimarisinin görselleştirme veya miktar.
Organlarda, vasküler ve duktal yapıların doğru mimarisi düzgün fizyolojik fonksiyonu için vazgeçilmez olduğunu ve bu yapıların oluşumu ve bakımı son derece düzenlenir süreçtir. Bu kompleks, 3-boyutlu yapıların analiz çok bölüm halinde ya da enjeksiyon boya çalışmalar, hem 2-boyutlu inceleme bağlı gelmiştir. Bu teknikler, ancak onlar aydınlatmak amaçlanmıştır duktal veya vasküler yapıların tam ve ölçülebilir temsilini sağlamak mümkün değildir. Alternatif olarak, 3-boyutlu plastik reçine kalıplara doğası sisteminin bir sürekli anlık oluşturur ve 3-boyutlu yapı ve ağ görselleştirilmesi ve hesaplamak için bir yeni ve çok kullanışlı bir yöntemdir.
Reçine döküm sisteminin çok önemli bir avantajı bir kan damarı ya da kanal intakt ve bağlı veya iletişim, yapısını belirlemek için yeteneğidir. Damar ve duc yapısıtal ağlar organ fonksiyonları için çok önemlidir ve bu tekniğin çeşitli şekillerde vasküler ve duktal ağların çalışma yardımcı olma potansiyeline sahiptir. Reçine döküm, bir lümen yapı normal morfoloji ve fonksiyonel mimari analiz gelişimsel morfogenetik değişiklikleri tespit etmek ve normal ve hastalık durumları arasında doku mimari içinde morfolojik farklılıklar ortaya çıkarmak için de kullanılabilir. Önceki çalışmalar, örneğin çalışma döküm reçine kullanmıştır, yapının 1,2 2 boyutlu analiz yansıtılmamıştır fare intrahepatik safra sistemi içerisinde mimari ve işlevsel kusurları, bir Alzheimer hastalığı fare modelinde 3 beyin damarlarında değişiklikler , portal hipertansif ve sirotik fare 4, olgunlaşmamış ve yetişkin akciğerler arasındaki sıçan lenf olgunlaşma gelişim basamaklarına 5, kimyasal yaralanma için yanıt sıçan karaciğer, pankreas, böbrek ve hemen mikrovasküler değişiklikler portal ven anormallikleri6.
Burada portal ven ve intrahepatik safra odaklanıyor, bir fare vasküler veya duktal ağının bir 3 boyutlu reçine döküm üreten bir yöntem sunmaktır. Bu yayınları doku temizleyerek veya macerating ile görülmesi ve daha sonra analiz edilebilir. Bu teknik hemen her vasküler veya duktal sistemin uygulanabilir ve 3 boyutlu duktal veya vasküler yapısının gelişimi, fonksiyonu, bakım, ya da yaralanma sorguladıktan herhangi bir çalışmaya doğrudan uygulanabilir olacaktır.
1. Kanül hazırlayın
2. PBS ile Şırınga hazırlayın
3. Diğer Set-up
4. Fare hazırlayın
5. Ekstrahepatik Portal ven veya Koledok kanüle
6. Reçine Portal Ven veya intrahepatik safra Cast
7. In situ Görselleştirme için Clear Karaciğer
8. Karaciğer Doku ıslatarak yumuşatmak
9. Temsilcisi Sonuçlar
Portal ven ve safra kanalının başarılı bir döküm hilusu gelen karaciğer perifere uzanan giderek küçük şube sürekli ağ gösterecektir.
Şekil 1 bir portal ven Babb takas. Şekil 1A tüm karaciğer sol lob döküm ve döküm şeklini ve boyutunu gösterir sonra da in situ görüntülenmiştir olarak döküm. Şekil 1B aynı döküm bir yakın görünümünü gösterir gösteren göstermektedir Karaciğer periferinde küçük portal ven dalları içine reçine penetrasyonu.
Şekil 2 KOH ma geçirmiş olan bir portal ven dökme gösterirceration. Şekil 2A tüm sol karaciğer lob ve Şekil 2B küçük periferik dallarının kadar yakın olduğunu gösterir.
Bu teknik aynı zamanda başarılı bir intrahepatik safra uygulanan ve Babb takas ve KOH maserasyon teknikleri 1,2,7 kullanarak hem yayımlanmıştır.
Genel sorunlar dolgular eksik içerir, çevreleyen sistemleri ya da doku içine reçine, ve taşma halinde kabarcıklar. Şekil 3 için portal damar arasından, tamamlanmamış bir dolgu (Şekil 3A), kabarcıklar (Şekil 3A), ve reçine bir taşma tanımak için gösterilmiştir santral ven (Şekil 3B).
Tüm resimler Leica MZ 16 FA stereoskop kullanarak ve RETIGA 4000R kamera QImaging alınır.
Şekil 1Hepatik. Babb-temizlenmiş reçine döküm lob portal ven bıraktı. A. Reçine döküm hilusu dan karaciğer çevresine kadar uzanan bir dallanma hiyerarşik yapısını göstermektedir. Reçine döküm mavi renkli karaciğer lob içinde sarı renkte görünür. B. kadar yakın reçine dolgu karaciğer periferinde küçük dallar uzanır göstermektedir. Reçine temizlenir karaciğer yoluyla beyazımsı. Ölçek bar = 1 mm.
Şekil 2. Hepatik doku-macerated reçine döküm lob portal ven bıraktı. Bütün karaciğerin ise dökme A. Reçine büyüklü küçüklü birçok dalları gösterir. B. Close-up karaciğer periferinde küçük dalları gösterir. Küçük şube görünümünü Feathering sinüzoidal boşluk doldurma reçine temsil ve veya reçine görünür olmayabilir atmalarını ve eğer varsa görünür şube yoğunluğu artacaktır. Reçine beyaz renklidir. Ölçek bar = 1 mm.
Şekil 3. Reçine atmalarını ile ortak sorunlar. A. sol lob portal ven Tamamlanmamış bir dolgu karaciğer çevre genişletmek için başarısız bazı veya tüm döküm dalları ile belirgindir. Bu döküm, aynı zamanda sürekli döküm (ok) molaları gibi görünür, kabarcıklar görüntüler. Bazı yerlerde portal ven ve santral ven dallarının yakınlığı nedeniyle B., portal ven reçine genellikle girin ve santral ven dolduracaktır. Iki ayrı hiler dalları (oklar) ve farklı desen ve örtüşme sahip iki dallanma yapıları olduğunda bu kabul edilebilir. Teknik hatalar ve gerçek morfolojik değişiklikler arasında ayrım iki şekilde yapılabilir. İlk olarak, döküm yapı 2-boyutlu analiz ya da diğer metotlara göre beklenen yapı ile karşılaştırılması gerekmektedir. İkincisi, birkaç çoğaltır gerçekleştirmek için önemlidir ve mümkün olduğunda, struct ölçmekure ve uyarlık belirlemek için istatistiksel analizler gerçekleştirmek ve arasında ve farklı deney ve kontrol kolları içinde istatistiksel olarak anlamlı bir morfolojik değişiklik varsa.
Biz, portal damar ve karaciğer intrahepatik safra kanalı sistemlerinde döküm nasıl için belirli örnekler tarif, ancak bu teknik hafif adaptasyonlar ile hemen hemen herhangi bir başka duktal ya da damar sistemine uygulanabilir. Önceki iş 10,11 yavrusu fare 1,2,7-9 dahil çoklu türler, tavşan 12,13, köpek 14, ve domuz 15, ve burun bezi 14 dahil olmak üzere birçok organ, bu tekniğin fizibilite göstermiştir Kalp 16, mesane 12...
Çıkar çatışması ilan etti.
Bu çalışma tjw Moleküler Tıp HHMI / Vanderbilt Üniversitesi Sertifika Programı aracılığıyla Howard Hughes Tıp Enstitüsü (HHMI) (GRDOT56006779), gelen SSH Sağlık (NIH) National Institutes hibe (R01-DK078640) tarafından desteklenmiştir Vanderbilt Diyabet Araştırma ve Eğitim Merkezi (P30-DK020593) ve Vanderbilt Sindirim Hastalıkları Araştırma Merkezi (P30-DK058404) Çekirdek Hizmetleri sağlamak.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Reaktif Adı | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
PE10 polietilen boru | Fisher Scientific | 1417012P | |
5-0 cerrahi siyah örgülü ipek | Roboz Cerrahi | SUT-15-1 | |
Steriject 32 G x 13 mm iğne | Hava-tite | TSK3213 | |
Bahar makas | Güzel Bilim Araçları | 15000-08 | |
Sayı 5 forseps | Güzel Bilim Araçları | 91150-20 | |
Mercox II kiti | Ladd Araştırma | 21247 | |
Benzil alkol | Fisher Scientific | 1816-1804 | Only Babb temizleme için gerekli |
Benzil benzoat | MP Biomedicals, LLC | 154839 | Sadece Babb temizleme için gerekli |
Fosfat tamponlu tuz (PBS) | |||
Modelleme kil | |||
Ölçek | |||
Laboratuvar makası | |||
15 ml kap polipropilen tüpler | |||
% 4 paraformaldahyde | |||
% 15 potasyum hidroksit (KOH) | Sadece maserasyon için gereken | ||
Jilet | |||
% 100 metanol | |||
3 ml luer lock şırınga |
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiDaha Fazla Makale Keşfet
This article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır