Ozmotik kullanarak Subkutan Anjiotensin II İnfüzyon Farelerde İndükler Aort anevrizmaları Pompalar

Özet

Ozmotik pompalar deri altından implantasyonu bileşiklerinin uzun süreli ve tutarlı bir teslimat için uygun bir yaklaşım sağlar. Bu yaklaşım, farelerde abdominal ve torakal aort anevrizması, hem incelemek için yaygın olarak kullanılmaktadır.

Özet

Osmotic pumps continuously deliver compounds at a constant rate into small animals. This article introduces a standard protocol used to induce aortic aneurysms via subcutaneous infusion of angiotensin II (AngII) from implanted osmotic pumps. This protocol includes calculation of AngII amount and dissolution, osmotic pump filling, implantation of osmotic pumps subcutaneously, observation after pump implantation, and harvest of aortas to visualize aortic aneurysms in mice. Subcutaneous infusion of AngII through osmotic pumps following this protocol is a reliable and reproducible technique to induce both abdominal and thoracic aortic aneurysms in mice. Infusion durations range from a few days to several months based on the purpose of the study. AngII 1,000 ng/kg/min is sufficient to provide maximal effects on abdominal aortic aneurysmal formation in male hypercholesterolemic mouse models such as apolipoprotein E deficient or low-density lipoprotein receptor deficient mice. Incidence of abdominal aortic aneurysms induced by AngII infusion via osmotic pumps is 5 - 10 times lower in female hypercholesterolemic mice and also lower in both genders of normocholesterolemic mice. In contrast, AngII-induced thoracic aortic aneurysms in mice are not hypercholesterolemia or gender-dependent. Importantly, multiple features of this mouse model recapitulate those of human aortic aneurysms.

Giriş

Aort anevrizmaları ölüme yol açan genellikle rüptür portends ve aort kalıcı luminal genişleme gösterirler. Bu hastalık sırasıyla Abdominal aort anevrizmalarının (AAAs) ve torakal aort anevrizmalarının (TAA'lar) olarak adlandırılır abdominal ve torakal aort bölgelerde, hem de oluşur. Nedeniyle moleküler mekanizmaları ve patofizyolojik süreçlerin eksik anlayış, aort anevrizmalarının iki tip genişleme veya delinmesine engel olabilir kanıtlanmış tıbbi tedavi yoktur. Hasta örneklerini edinme ve AAA mekanizmalarının tanımlanması odaklanarak, doğrudan insanlarda araştırma deneyleri yapmak zor olduğundan sık sık hayvan modellerinde yola çıkılarak olmuştur. Yaygın olarak kullanılan bir hayvan modeli, farelere anjiyotensin II (AngII) subkutan infüzyondur. Bu tür intra-aortik elastaz perfüzyon veya laparotomi ^1,2 gerektiren kalsiyum klorür peri-aort uygulama, bu metho olarak farelerde, AAAS başlatılması için, diğer cerrahi yöntemlere göred vücut boşluğuna giriş gerektiren ve minimal cerrahi uzmanlık gerektiren ^3,4 vermez.

AAAS indüklemek için ozmotik pompalar aracılığıyla AngII deri altından infüzyon başlangıçta düşük yoğunluk lipoprotein (LDL) reseptörünün bildirilmiştir - / - fareler apoE daha sonra bir doymuş yağ bakımından zengin bir diyet ³ beslenen ve - / - fareler normal laboratuar diyetiyle ⁴ beslenir. Pek çok yeni çalışma AngII normolipidemik farelerde ^5-7 AAAS indüklediğini göstermiştir. Beslerken AngII yaklaşımı AAAS neden ve bu model insan AAA gözlenen birçok özellik özetlediği bu yana moleküler mekanizmaları yanı sıra (örneğin, ^5-15) potansiyel tedavi stratejileri geliştirilmesini araştırmak için uygulanmıştır. Örneğin, sigara, yaşlanma ve erkek cinsiyet gibi insan AAA risk faktörleri de farelerde ^16,17 yılında AngII kaynaklı AAAS çoğaltmak. İnsanlarda AAA'ların ile hiperkolesterolemi dernek açıklama gerektirir. Ancak, olmak vartutarlı en hiperkolesterolemi farelerde ¹⁸ AAAS AngII kaynaklı yükselmeye yol açtığını ortaya. Farelerde AngII kaynaklı AAA patolojileri ölçüde heterojen ve bunun sonucunda makrofaj infiltrasyonu, kolajen degradasyonu, trombotik oluşumu ve çözünürlük ve neovaskülarizasyon ^19-21 ile karakterize edilir. İnsanlarda en sık AAA infrarenal aort konumu tersine, farelerde AAAs suprarenal aort bölgesinde meydana AngII kaynaklı. AngII kaynaklı AAA başka yerde özelliği transmural tromboz yol açan, transmural medial molası veriliyor. İnsanlarda AAA patolojik gelişim münhasıran nedeniyle erken evrelerde gelen anevrizmal dokuların eksikliği çalışılmamıştır çünkü transmural elastin kopma insanlarda meydana belirsizdir.

Farelere AngII infüzyon da ağırlıklı olarak en yaygın bölge insanlarda taas için çıkan aorta ile sınırlıdır torakal aort bölgenin derin genişlemesine yol açar 19,22-26 kadar. AngII kaynaklı AAA benzer TAA'lar insan taas ²⁵ birçok özellik özetlemek AngII infüzyon sırasında uyarılan. Bununla birlikte, AngII kaynaklı AAA aksine, AngII kaynaklı TAA'lar hiperkolesterolemi ile bağlantılı değildir ve cinsiyet farkları yoktur.

Farelere deri altı AngII infüzyon genel amacı patolojik özellikleri ve AAA ve taas moleküler mekanizmaları incelemektir.

Protokol

Etik Beyanı: Fare çalışmaları Kentucky Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (: 2006-0009 IACUC protokol numarası) Üniversitesi onayı ile yapılır. Fareler ketamin (~ 210 mg / kg) ve ksilazin aşırı dozda kokteyl (~ 30 mg / kg) ile sona ermesi de ötenazi.

AngII Tutarının Hesaplanması 1.

NOT: Bu protokol, 4 erkek LDL reseptörü 4 hafta süreyle AngII (1000 ng / kg / dak) infüzyonu örneğini kullanarak, - / - fareler doymuş yağ bakımından zengin bir diyet ile beslenen.

1. Infüzyon için gerekli AngII miktarını hesaplamadan önce fareler çalışma tartılır.
2. Deney için gerekli olan AngII kitle hesaplamak için şablonu (Tablo 1) kullanın. Şablonun adım 4'te "Pompa oranı" olarak pompaların Öğretim belirtilen "Terfi ortalama Rate" kullanın. Manuel 5 ve 6 Adımlar - - şablonda, rekor Adımlar 1. 10 otomatik olarak hesaplanır.
   1. Şablonda olarak, varsayalımFareler 4 hafta içinde AngII 1000 ng / kg / dak enfüzyon boyunca vücut ağırlığının 1 g kazanacaktır.
      NOT: Her fare, fare zorlanma ve diyet gibi birçok değişkene bağlı olacaktır çok farklı vücut ağırlık artışı olabilir. Biz rutin önceki çalışmalardan kendi deneyimlerine dayanarak "0" veya "1 gr" kullanın.
   2. Her pompa yaklaşık 250 ul gerektirdiğinden her fare için AngII çözümün bir 300 ul toplam hacmi hesaplayın.

AngII 2. Çözünme

1. -20 ° C'de de AngII şişeleri liyofilize edildi. Açmadan önce oda sıcaklığına AngII şişeleri dengelenmesi.
2. Steril plastik bir tüp içerisine hesaplanan AngII kitle (Tablo 1 'de gösterildiği gibi 7,3 mg) tartılır.
   Not: AngII bir sulu çözelti, cama bağlanmak için güçlü bir afiniteye sahip olduğu başına The Merck Index, çözünme için cam tüpler kullanmayın.
3. (1200 mikron steril tuzlu su hesaplanan hacim eklemeLiyofilize AngII, kap içeren plastik bir tüp içerisine l) ve çözelti berrak hale gelinceye kadar inversiyon yolu ile iyice karıştırın.
4. Etiket fare numaraları # 1, # 2, # 3 ve kapaklar bireysel steril plastik tüpler üzerine 4. (0,5-1,5 ml). Aşama 1.2 ve Tablo 1 hesaplanan vücut ağırlığına göre her bir fare için bir laminer başlık altında AngII çözeltisi hazırlayın.
   1. Örneğin, tüp 1., daha sonra 296,4 ul AngII çözeltisi içine pipet 3.6 ul steril tuzlu ve yavaşça yukarı pipetleme ile iyice karıştırın.
5. (Steril 4 mi) kapakları plastik borular üzerindeki etiket fare numaraları. Bu adım 3,13 tarif edildiği gibi pompalar kuluçka için kullanılacaktır.

3. Osmotik Pompa Dolum

1. Pompanın ana gövdesine ve akış moderatörü (Şekil 1): iki ayrı bölümden pompaları edinin. Her kutu ayrı ayrı sarılır 10 pompa gövdeleri ve akış moderatörler vardır. Lot numarasını kaydedin.
   NOT: Her zaman giymekeldiven pompaların dış muhafazasına elinden aktarılan yağlar olumsuz işlevi pompalama etkileyecektir çünkü. İmplantın enfeksiyon riskini önlemek için, steril eldiven, gazlı bez, tüpler, dolum iğne kullanın ve pompalar hazırlamak için tekne tartın.
2. Bu kez açıldı saklanan edilemez, çalışma için gerekli olan pompa gövdeleri ve akış moderatörleri sadece numarasını açın. 10'dan fazla pompa gerekiyorsa, farklı lot numaralı pompaları farklı ortalama Dolgu Hacmi ve Pompa Oranı beri pompa lot numaraları, bir çalışmada aynı olduğundan emin olun.
3. (Ana gövde ve moderatör akış hem de dahil olmak üzere) her pompanın tartılır ve 4 ondalık basamağa kadar ağırlık not (örneğin, fare no 1,1443 g 1). Şablonda (Tablo 1) "Pompa Ağırlık boş" olarak adlandırılan bu ağırlık, dolu oranını hesaplamak için kullanılır.
4. 1 cc steril şırınga pompa dolum iğne takın ve dikkatlice uygun gelen AngII çözümü ile şırınga doldurmaknumaralı plastik tüp. Bu enjektör içine hava çekme önlemek için önemlidir.
5. İğne aşağı konumlandırılmış ise şırınga dikkatle tüm hava kabarcıklarını çıkarın. Pompanın içine kabarcıklarının girişini önlemek için bu pozisyonda iğne / şırınga tutun.
6. Yavaşça pompa gövdesine doldurma iğne takın. Pompanın içine iğne ucu Advance. Sıkıca pompanın altındaki iğne ucu koymayın.
7. AngII çözümü ile pompayı doldurmak için yavaş yavaş şırınga pistonu itin. Pompa içindeki karanlık gölge dolum seviyesini gösterir. Doldurma hacmi Talimatları başına yaklaşık 246 ul.
8. Pompayı dolum durdurun ve sıvı boncuk pompa dışarı yükselir dikkatle kısa sürede iğne çıkarılır.
9. Hiçbir boşluk akış moderatör başkanı ve pompa gövdesinin üst (Şekil 1) arasında görülen kadar pompa gövdesinin üstündeki delikten pompanın içine akış moderatör yerleştirin.
10. Moderat yerleştirilmesiveya pompa vücuda akış moderatör açılması bazı sıvı sızıntı yol açar. Dikkatle moderatörler yerleştirilmesi sırasında sızan olabilir tüm ekstra sıvıyı kurulayın.
11. Dolu pompa tartılır. Şablonda "Dolu Pompa Ağırlık" altında kilo kaydedin.
12. Dolum Oranı (%) = ("dolu" Pompa Ağırlık - "boş") hesaplayın 1000 / hacim x 100 doldurmak demek x.
    1. Oranı doldurma eşit veya% 100 daha fazla olmalıdır, Tablo 1. İdeal gösterildiği gibi Oranı Dolum hesaplayın. Doldurma oranı ise, dolum pompası <% 95 (hava kabarcıkları pompa mevcut olabilir karıştığı).
13. Moderatör kafası yukarı bakacak şekilde etiketlenmiş 4 ml tüp (Adım 2.5) doldurulur pompayı yerleştirin. Pompayı kapatmak için steril serum fizyolojik yeterli hacim ekleyin. Takılıncaya kadar tuzlu su tüp içinde pompa tutun.
14. 37 ºC inkübatör Yeri tüpleri. Inkübe kısmi astar izin ve sonra farelere implante O / N (en az 12 saat) pompalar. PompaAngII of ing fareler cerrahi öncesi AngII infüzyon sırasında ortaya çıkan herhangi bir potansiyel stres geri verir implantasyon sonrası yaklaşık 24 saat, başlar.

Pompa İmplantasyonu 4. Hazırlık

1. Otoklav (yerçekimi modu, kuru döngüsü, 15 dk) gazlı bez, pamuk bezlerden ve makas, hemostat, forseps, zımba dahil cerrahi aletler ve zımba en az 1 gün ameliyattan önce.
2. Bir prosedür odasında izofluran kullanarak anestezi buharlaştırıcı hazırlar. Laminer akış kaputu steril örtüler açın ve izofluran anestezisi için burun konisi yerleştirin. Laminar kaput betadin,% 70 etanol, steril su, boncuk sterilizatör, antiseptik ovucusu, bezlerden, gazlı bez ve dolu pompaları yerleştirin.
3. Don maske ve önlük, daha sonra temiz ellerle laminar kaput içinde bir dış örtü açın. Steril eldiven giyin ve steril iç paketini açın.

Pompa İmplantasyonu 5. Cerrahi Prosedür

1. Bir indüksiyon cham yerleştirin fare% 2 - 1.5 arasında bir akış hızında izofluran akışı ile ber. Yatma sonra 3 dakika - ek 2 için fare izleyin. Sol veya sağ omzunun üzerinden, bir çeyrek boyutu hakkında bir alan tıraş.
2. Izofluran çıkışı (Şekil 2A) bağlı bir koni ile aynı hizada olan burun, laminar kaput fare yerleştirin. Cerrahın dominant elin doğru farenin kafasını yerleştirin. Anestezi altında iken kuruluğunu önlemek için farenin gözleri veteriner merhem kullanın. Fare ameliyat öncesi ağrı uyarısına yanıt olduğundan emin olun. Örneğin, pedal tepkisi ağrısı için iyi bir göstergedir.
3. Sürüntü ve% 70 etanol ile üç mendil ardından betadin traş bölgeyi silin. Don veya steril eldiven değiştirmek.
4. Ön bacak, omuz bıçak üzerinde kulağın arkasında ~ 1 cm'lik kesi yapmak için bir cerrahi neşter kullanın. Bu kesi kuyruk dik olmalıdır. Sadece deri değil altta yatan dokuları kesmek için dikkatli olun.
5. Tut forcBir yandan eps kesi açın ve bir hemostat (Şekil 2B) kullanılarak derinin altında cilt altı tüneli yapmak için diğer elinizi kullanın.
6. Kuyruk doğru hemostat ucu Advance ve pompa için bir cep oluşturmak. Bu dikkatle bir kese açmak için deri altına hemostat çeneleri açarak gerçekleştirilir. Kesiden hemostat çekin.
7. Fare (Şekil 2C) arkasına yerleştirilmiş moderatör kafa ile kesi içine pompayı yerleştirin. Yavaşça cebine tamamen pompayı itin. Hiçbir gerginlik ya da derinin gerilmesi ile yarayı kapatmak için yeterli boş alan olmalıdır.
8. Bir pompa takıldıktan sonra, sıkı bir şekilde, kenarları karşılamak düzleştime, kesi her iki tarafı da tutam (Şekil 2D) kapatmak için 1 ya da 2, yara klipsleri yerleştirin. Yaranın tam kapanma olmasını sağlamak için Kesi sitesini inceleyin ve pompa sitesinde doğrudan basmak olmadığını.
9. Topikal lidokain krem ​​sürünBurun konisi temiz bir pamuk swab.Remove fare ile (% 4 ağırlık / ağırlık) ve bilinci yerine kadar bir ısıtma pedi üzerine yerleştirin. Kurtardıktan sonra, fare kafesine geri döner.
10. Fareler arasında 10 saniye boyunca bir kordon sterilize etme birimi içine cerrahi aletleri yerleştirin. Araçlar kullanılmadan önce soğumasını bekleyin. Fareler arasında antiseptik sıvı ile temizleyin eldivenler. Tam iyileşme sağlanana kadar tüm fareler izleyin.
11. Yakından ameliyat sonrası fareler izleyin. Fare sıkıntı, veya dehidrasyon kilo kaybı belirtileri gösteriyorsa - (0.3 ml 0.2) subkütan steril serum fizyolojik bir bolus enjekte edilir. Ilk 10 gün içinde en az günde iki kez fareler gözlemleyin ve daha sonra en az bir kez her gün. Herhangi fareler AngII infüzyon sırasında ölürseniz hemen nekropsi gerçekleştirin. Ameliyattan sonra 14 gün - 7 arası yara klipleri çıkarın.

6. Hasat, Tespit, Temizleme ve aortalarının Görüntüleme

1. Ope kesti, ventral fare toraks ve batın boşluklar açmak kesmekn sağ atrium, aort kan kaldırmak için kalbin sol ventrikül ile tuzlu su ile serpmek ve aort ²⁷ hasat.
2. 48 saat ^27-24 süreyle% 4'lük paraformaldehit veya% 10 nötr tamponlu formalin içinde en az 3 ml içeren plastik tüplere hasat aorta yerleştirin.
3. Dikkatlice adventisyal dokuları çıkarın. Iğnelerle siyah mum pin aorta. Aynı büyütme ile aort görüntüler elde. Şekil 3 'de gösterildiği gibi, kalibrasyon her görüntüde bir cetvel içerir.

Aorta 7. Tu yüz Görüntüleme

1. Arkus aorta dış ve iç eğrilik uzunlamasına açık aort kesin ve innominate, sol karotis arter ve sol subklavyen arter dahil olmak üzere açık büyük dalları kesmek. Dış adventisyal siyah mum bitişik döşeme düz pim aorta.
2. Aynı büyütmede aortun intimal yüzeyinin yüz resmi tr edinin. Gösterisi olarak, kalibrasyon için her görüntüde bir cetvel ekleyinŞekil 4 n.

Sonuçlar

4 erkek LDL reseptörü - / - Protokol bölümünde açıklanan farenin AngII infüzyonu 4 hafta sonra kurban edilmiştir. Aort, hasat temizlenmiş ve aort dilatas- görselleştirmek için görüntülenmiştir. (Şekil 3A AAAs), artan bölgenin genişleme (TAA'lar Şekil 3B) veya her iki bölgenin genişleme (AAA ve TAA'lar hem varlığı, Şekil 3'te gösterildiği gibi, aort böbreküstü bölgenin genişleme dahil olmak üzere birçok farklı özelliklere sahip Şekil 3C), morfoloji ise tek fare) Şekil 3D (fena halde normaldi. Şekil 3A'da kırmızı çizgi ile gösterildiği gibi abdominal aorta dilatasyonu, böbrek üstü bölgede ex vivo maksimum genişliği ölçülerek belirlenir. Şekil 4 'de gösterildiği gibi aort dilatasyonu artan ölçmek için, aort kesilerek açılır ve tutturulmuş edildi. Intimal yüzey alanı th çevrili çıkan aort bölgesinde (alanında ölçülmüştürŞekil 4A) e kırmızı çizgileri taas ölçmek için. Cetvel iki Şekiller 3 ve 4 'de gösterildiği gibi, ölçümleri standardize etmek için her resim dahil edilmiştir.

. Bir ana gövde ve bir akış moderatör: doldurulmuş osmotik pompa Şekil 1. Temsilcisi görüntü Her pompa iki ayrı bölümden oluşmaktadır. AngII Pompa gövdesini doldurduktan sonra, akış moderatör pompası mühür eklenir.

Pompa implantasyon cerrahi Şekil 2. İşlem (A) Fare izofluran ve oksijen salan sürekli olarak, bir burun hunisi olan bir laminer başlık yerleştirilir.; (B) düz bir hemostat subkutan tünel yapmak için cilt kesisi içine yerleştirilir; (C) Pompa sokulur cilt kesisi nazikçe; (D) cilt kesi pompa yerleştirilmesinden sonra zımbalanır.

Ile aşılanmış farelerden alınan Şekil 3. Aort görüntü (ex vivo) AngII AngII 1000 ng / kg / dak bir erkek LDL reseptörü infüze edildi -. / - 28 gün süre ile farelerin. (A) AAAs trombozu eşliğinde; Kırmızı çizgi (2.05 mm) böbreküstü bölgede maksimal aort genişliği ölçüsünü gösterir. Fena halde normal bir abdominal aort ile aort dilatasyon (TAA) Artan (B); (C) Artan ve böbreküstü aort bölgelerinde (TAA'lar ve AAAs) hem de derin dilatasyon; (D) artan veya böbrek üstü aort bölge ya hiçbir belirgin dilatasyon ile fena halde normal bir aort.

4.jpg "/>
Şekil AngII AngII 1000 ng / kg / dk erkek LDL reseptörü infüze edildi ile aşılanmış farelerin torakal aort bölgelerin 4. Tu yüz görüntüleri - 28 gün boyunca farelerin -. /. Kırmızı çizgi ile belirtilen yüzey alanı aortik arkın kısmı dahil asendan aort bölgeyi temsil eder.

1	Doz gerekli			1000	ng / kg / dakika
2	Vücut ağırlığını (büyük fare) Başlangıç			24.8	g
3	Toplam tahmini vücut ağırlık kazancı			1	g
4	Pompalama hızı			0.25	ul / saat
5	NuFarelerin mber			4
6	Hayvan için doz saatte			1518	ng
7	Kons gerekli			6072	ng / | il
8	300 ul çözüm için			1.82	mg / 300 ul
	ÇÖZÜM GEREKLİ
9	Toplam AngII (mg)			7.3	mg
10	Tuzlu su içinde çözülmüş ve# 160;			1200	ul
Mouse	Vücut ağırlığı	Seyreltme faktörü	Hacim (ul)		Pompa Ağırlık (g)		Dolgulu Oran
#	(g)		AngII	Tuzlu	Boş	Dolu	(%)
1	24.5	1.0	296,4	3.6	1,1443	1,3877	99
2	23.0	0.9	278,2	21.8	1,1677	1,4145	100
3	24.8	1.0	300.0	0.0	1,1438	1,3904	100
4	21.8	0.9	263,7	36.3	1,1438	1,3904	100
Seyreltme faktörü = en büyük fare fare / vücut ağırlığı, vücut ağırlığı

Mouse	Vücut ağırlığı	Seyreltme faktörü	Hacim (ul)		Pompa Ağırlık (g)		Dolgulu Oran
#	(g)		AngII	Tuzlu	Boş	Dolu	(%)
1	24.5	1.0	296,4	3.6	1,1443	1,3877	99
2	23.0	0.9	278,2	21.8	1,1677	1,4145	100
3	24.8	1.0	300.0	0.0	1,1438	1,3904	100
4	21.8	0.9	263,7	36.3	1,1438	1,3904	100

Tablo 1: osmotik pompalar aracılığıyla 28 günlük infüzyon için hesaplama.

Tartışmalar

AngII subkutan teslim ozmotik pompalar farelerde aort anevrizması uyarılması için rutin bir yaklaşımdır. Birçok laboratuvarlarda elde edilen verilere dayanarak, bu AAAS ^3,4 ve farelerde taas ^22-26 hem çalışmak için güvenilir ve tekrarlanabilir bir yöntem olduğunu tutarlı bulgular olmuştur. Bu nedenle, bu fare modeli, insan aort anevrizması çeşitli özellikler özetlediği ve bu yıkıcı hastalıklar içine mekanistik anlayışlar sağlayan bir modeli olarak kabul edilir.

Yaşlanma insanlarda AAA için bir risk faktörü olduğu da, sistematik olarak farelerde AngII kaynaklı AAA için çalışılmamıştır. 48 hafta ^4,5,7 - Ancak, insidans ve AngII kaynaklı AAA şiddeti 8 yaşındayken farelerde benzer görünür. TAA oluşumunda belirgin yaşa bağlı farklılıklar gösterir yoktu 24 hafta ^22-26, - Halen 8 yaşındayken farelerde AngII kaynaklı taas rapor sadece bir kaç çalışma vardır.

Dişi fareler AngII ^4,28 ile aşılanmış erkek farelere göre AAA çok daha düşük bir oranda bulunur. Bu AngII kaynaklı AAA sıklığı sırasıyla% 30'dan daha az karşılık% 50'den fazla olduğu normo-hiperkolesterolemik farelerde daha hiper çok daha yüksek olduğunu fazlalaştı. AngII infüzyonu sırasında hem normo ve hiperkolesterolemik farelerde - (% 30 yaklaşık 10) Ayrıca, aort rüptürü sıktır. 1000 ng / kg bir oranda AngII infüzyonu / dakika LDL reseptörü gibi hiperkolesterolemik fareler içine - / - fareler Batı diyet ya da apoliprotein (apoE) beslenen - / - fareler normal ya da Batı diyet ile beslenen, AAA maksimal etkiye sahiptir geliştirme ^3,4,29. Bu infüzyon hızı Hiperkolesterolemik farelerde ilgi bir geni manipüle AAAS azaltmak için beklenen bir çalışma için en uygunudur. Hiperkolesterolemik farelerde bir manipülasyon AAAS artırmak için beklenen ise, 500 ng / kg / dakika ^veya 30 altında bir oranda AngII demlenmeye önerilir. AAA aksine, herhangi bir demo oradaerkek cinsiyet veya hiperkolesterolemi ve AngII kaynaklı taas ²⁵ arasında nstrated ilişki. Ilgi konusu bir gen manipülasyonu TAA'lar artırmak için beklenen, ancak, benzer şekilde AAA için biz AngII enfüzyon için 1000 ng / kg / dak daha düşük bir infüzyon hızı önerilir.

Bu AngII kaynaklı aort anevrizmalarının bu insidans ve şiddeti bireysel farelerin arasında ve çalışmalar arasında farklılık bilmek de önemlidir. Fareler aort anevrizması geliştirmek yoksa, potansiyel bir ihtimal AngII başarıyla farelere teslim edilmemiş olabilir olmasıdır. AngII yüksek bir infüzyon hızının geçerli olabilmesi için, örneğin, 1000 ng / kg / dakika, kan basıncı ölçümü invaziv olmayan bir kuyruk ağzı yöntemi ³¹ kullanmadan önce ve AngII infüzyonla yapılması tavsiye edilmektedir. 1000 ng / kg bir oranda AngII infüzyon / dakika farelerinde sistolik kan basıncı artar. Ayrıca, plazma renin konsantrasyonları AngII r üzerinde olumsuz geribildirim beri AngII infüzyon sırasında veya fesih ölçülen olabilirenin salgı. Bu nedenle, AngII infüzyon plazma renin konsantrasyonlarında azalmalar yol açar. AngII ile aşılanmış bir fare hiçbir belirgin aort patolojileri, kan basıncı hiçbir artış ve plazma renin konsantrasyonuna hiçbir azalma varsa, AngII implante osmotik mini pompa sayesinde verimli bir şekilde teslim edilmediğini işaret eder. Biz çalışmamızda bu fareyi çıkarmadan öneriyoruz. Bazı fareler artmış sistolik kan baskılara rağmen aort anevrizması geliştirmek ve plazma renin konsantrasyonlarını azalma olmadığını dikkat etmek de önemlidir. Bu fareler kalmalıdır.

Özet olarak, AngII infüzyon farelerde aort anevrizması uyarılması için ozmotik pompalar kullanılarak deri altından implantasyonu ile elde edilir. Bu yöntem, AAAS ve TAA'lar hem incelemek için kullanılır belirlenen süreler için tanımlanmış bir oranda sürekli olarak AngII sunar.

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Angiotensin II	Bachem	H-1705	compound used to induce aortic aneurysms
Alzet Osmotic Pumps	DURECT Corporation	Alzet Model 2004	feasible for 28-day infusion in mice weighed > 20 g
Saturated fat-enriched diet	Harlan Teklad	TD.88137	42% calories/calories to stimulate hypercholesterolemia in LDL receptor -/- mice