Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.
Method Article
Rabbits are widely used to study the pharmacokinetics of intraocular drugs. We describe a method for conducting pharmacokinetic studies of intraocular drugs using rabbit eyes.
sistemik emilimi en aza indirerek ilaç uygulama içi yolu, tedavi edici ilaçlar, yüksek konsantrasyonlarda aktarılmasını sağlar. Çeşitli ilaçlar ön kamaraya ya da vitreus içine uygulanır ve göz içi enjeksiyon çeşitli göz içi hastalıkları tedavi etkili olmuştur. Hayvan diğer memelilere göre kullanımı kolay ve ekonomik bir şekilde Tavşan gözü yaygın oftalmik araştırma için kullanılmıştır ve bir tavşan göz büyüklüğü, insan gözünün benzerdir. 30 G iğne kullanılarak, uyuşturucu tavşan gözlerin intrakamaral ve intravitreal alanlara enjekte edilebilir. gözbebekleri sonra analize kadar dondurulur ve sulu mizah, vitreus ve retina / koroid ayrılabilir. vitröz ve retina / koroid örnekleri homojenize edildi ve analizden önce çözündürülebilir. Daha sonra, bağışıklık her bölme intraoküler ilaç konsantrasyonlarını ölçmek için gerçekleştirilebilir. Uygun farmakokinetik modelleri olabilirBu tür yarı-ömürlere ve maksimum ilaç konsantrasyonu gibi çeşitli parametreler hesaplamak için kullanılır. Tavşan gözü içi ilaçların farmakokinetik çalışmalar için iyi bir model olabilir.
Göz içi ilaç dağıtım gelişiyle önce, göz içi hastalıkların tıbbi tedavinin ana endişe ilaç göz içine nüfuz olabilir hangi ile etkinlik oldu. Kan-göz bariyer göz içine yayılmasını, ilaçlar dahil pek çok maddeyi önler. Bu nedenle, terapötik seviyelerin üzerinde olan ilaçların konsantrasyonu kolayca elde edilemez. İlaçların tedavi edici konsantrasyonları göz 4,5 elde edilebilir ve böylece intrakamaral ve intravitreal enjeksiyonlar da dahil olmak üzere göz içi ilaç uygulama yöntemi, can doğrudan kan-göz bariyerini 1-3 atlayabilir.
Buna göre, intravitreal ilaç dağıtım birkaç göziçi hastalıkların 5,6 tedavisinde popüler bir yöntem haline gelmiştir. Örneğin, içi enjeksiyon yaygın yaşla ilgili maküler dejenerasyon, diyabetik retinopati, retinal ven tıkanıklığı ve göz içi enfeksiyonlar 7-10 için gerçekleştirilir. Özellikle, çünküAnti-VEGF ilaç tanıtımı, intravitreal enjeksiyonlar sıklığı oldukça retina hastalıklarının tedavisi için artmıştır. Bu nedenle, tıbbi tedavinin etkinliğini ve güvenliğini değerlendirmek için bu ilaçların içi farmakokinetik anlamak önemlidir.
İlaçların içi yönetim küresi içindeki ilaç konsantrasyonunu izleme göz hastalıkları tıbbi tedavide önemli bir atılım olarak kabul edilmesine rağmen, teknik olarak talep ediyor. İnsan gözü, sulu humor (yaklaşık 200 ul) ve camsı (yaklaşık 4.5 mi, Tablo 1), sadece az miktarda için, ilaç konsantrasyonunu ölçmek için, okular akışkan yeterli miktarda elde edilmesi için teknik olarak zordur. Ayrıca, bu tür vitreus dokunarak veya ön kamara parasentez olarak göz sıvısı elde etmek için kullanılan yöntemler, göz dokusuna zarar ve bu tür katarakt endoftalmi, ya da ciddi komplikasyonlara yol açabilirretina dekolmanı 11,12. Bu duruma göre, hayvan modelleri yaygın olarak kullanılan göz içi ilaç 13 farmakokinetik çalışmalarda kullanılmıştır. Bu hayvan modellerinde arasında, tavşan veya maymun en sık kullanılan hayvanlardır.
Aile Leporidae sırayla Lagomorpha küçük memeli tavşan, dünyanın çeşitli yerlerinde bulunmaktadır. tavşan agresif olmadığından, bunlar ele bir deneyde kullanmak ve gözlemlemek kolaydır. Düşük maliyet, insanlara hayvan, benzer göz büyüklüğü hazır durumu ve karşılaştırma iyilik tavşan gözlerini kullanarak farmakokinetik çalışmaları gerçekleştirmek için bilgi büyük bir veritabanı. Bu yazıda, tavşan göziçi ilaçların farmakokinetik çalışmalar için bir protokol tanımlanmıştır.
Bizim protokol Bu protokolde yer alan hayvan usul ve hayvan bakım yöntemleri tüm onaylı Seul Ulusal Üniversitesi Bundang Hastanesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC), kuralları takip eder. IACUC Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım (2011) için Kılavuz sekizinci sürümü ile tam bir uyum içindedir. Bütün işlemler hayvanlarda Oftalmik ve Vision Research Hayvanların Kullanım Vizyon ve Oftalmoloji Tablosunda Araştırma Derneği kurallarına bağlılık ile yapıldı. Ayrı ayrı kafeslerde tavşan konut kullanılmıştır. Ek cerrahi veya hazırlık bu deneyi yapmadan önce (yani, sterilizasyon) gerekmeyebilir.
Tavşan Gözlerinde içine İlaç 1. Göz içi enjeksiyon
2. Numune Hazırlama
3. İmmunoassay
NOT: Birkaç analitik yöntemler protein konsantrasyonu ölçümü için kullanılabilir. d Uygun bir nicel bir yöntem seçinalgılama mesafesine epending. LC-MS / MS, sırasıyla, MRM / PRM modu ile profil için protein nanogram ve pikogram düzeyini algılar ise Kısaca, HPLC seçilmiş iyon izleme modu molekülün pikogram düzeyini algılar. ELİSA'nın tespit limiti pikogram düzeyinde olduğu düşünülmektedir.
4. Farmakokinetik Analiz Yöntemleri
NOT: PK analizi için, bir kompartman veya non-kompartman analizini kullanabilirsiniz. kompartman analizde, moleküllerin eğilim davranışı bir denklem (model) ile açıklanabilir. kompartmanlı olmayan modeli görselleştirmek veya diğer doz rejimleri için konsantrasyon-zaman profilleri tahmin edemez ise Böylece, kompartman PK analizi, herhangi bir t anındaki konsantrasyonu tahmin edebilirsiniz. Ancak, kompartman modelleri uydurma karmaşık ve uzun bir süreç olabilir. Buna karşılık, varsayımlar olmayan kompartman modelde daha az kısıtlayıcı bulunmaktadır. kompartmanlı olmayan basit bir uygulama ve bu yarı ömür, temizliği ve dağılım hacmi farmakokinetik parametreleri hesaplamak için yaygın olarak kullanılır.Biz anti-VEGF ajanlar farmakokinetik çalışmalar için bölmeli model seçti.
Steril teknikleri ile Tavşan gözlerinde bir ilgi ilacın intravitreal enjeksiyonlar yapmak için kullanılan prosedür Şekil 1'de gösterilmiştir. Işlenmiş gözler planlanmış bir zamanda çıkartılmış ve -80 ° C'de saklanır. Şekil 2'de gösterildiği gibi, analiz üç bölmeli, sulu salgı, vitröz, ve retina / koroid için, dondurulmuş tavşan gözler ayrılır. Bölmeleri numuneleri ELISA için hazırlanır. Bir ikincil antik...
With the increasing use of intraocular drugs, such as anti-vascular endothelial growth factor (VEGF) agents, for the treatment of diverse ocular diseases, knowledge of the tissue distribution and clearance of the drug after the intraocular injection is important. Understanding the pharmacokinetics of intraocular drugs is important for understanding the efficacy and safety of drugs, determining the optimal dosage of the drugs, and minimizing systemic or intraocular complications. However, detailed pharmacokinetic studies ...
The authors have no conflicts of interest to disclose.
We would like to thank Ms. Ji Hyun Park and Ji Yeon Park for their technical assistance in the animal experiments. This work was supported by a grant from the Seoul National University Bundang Hospital Research Fund (grant number: Grant No. 14-2014-022) and from a grant (CCP-13-02-KIST) from the Convergence Commercialization Project of the National Research Council of Science and Technology, Seoul, Korea.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Zoletil | Virbac Laboratories, Carros Cedex, France | ||
Xylazine hydrochloride | Fort Dodge Laboratories, Fort Dodge, IA | ||
Proparacaine hydrochloride (Alcaine) | Alcon laboratories, Fort Worth, TX | ||
Phenylephrine hydrochloride and tropicamide | Santen Pharmaceutical, Co., Osaka, Japan | ||
Recombinant Human VEGF 165 | R&D systems | 293-VE-050 | |
Carbobate-Bicarbonate buffer | SIGMA | C3041-50CAP | |
Nunc Microwell 96F w/lid Nunclon D Si | Thermo SCIENTIFIC | 167008 | 96 well plate |
Bovine Serum Albumin (BSA) 25 g(Net) | BOVOGEN | BSA025 | |
Phosphate Buffered Saline (PBS) pH 7.4 (1x), 500 ml | gibco | 10010-023 | |
Sheep anti-Human IgG Secondary Antibody, HRP conjugate | Thermo SCIENTIFIC | PA1-28652 | |
Goat Anti-Human IgG Fc(HRP) | abcam | ab97225 | |
Goat anti-Human IgG, Fab'2 Secondary Antibody, HRP conjugate | Thermo SCIENTIFIC | PA1-85183 | |
CelLytic MT Cell Lysis Reagent | SIGMA | C3228-50ML | lysis buffer |
100 Scalpel Blades | nopa instruments | BLADE #15 | |
100 Scalpel Blades | nopa instruments | BLADE #10 | |
Feather surgical blade stainless steel | FEATHER | 11 | |
1-StepTM TMB-Blotting substrate solution, 250 ml | Thermo SCIENTIFIC | 34018 | |
Stable Peroxide Substrate Buffer (10x), 100 ml | Thermo SCIENTIFIC | 34062 | |
Softmax Pro | Molecular Devices | v.5.4.1 | software for generating standard curve |
SAAM II | Saam Institute, Seattle, WA | software for pharmacokinetic modeling | |
Phoenix WinNonlin | Pharsight, Cary, NC | v. 6.3 | software for pharmacokinetic modeling |
Avastin (bevacizumab) | Genentech |
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır