P10 Sıçanlarda Yenidoğan İnme Geçici Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Modeli

Özet

Neonatal stroke is a significant cause of early brain injury requiring a translational model with consistent focal injury patterns and high reproducibility in order to enable study. This study describes the detailed surgical procedure for creating a non-hemorrhagic, unilateral focal ischemia-reperfusion injury in full-term-equivalent rodents.

Özet

A number of animal models have been used to study hypoxic-ischemic injury, traumatic injury, global hypoxia, or permanent ischemia in both the immature and mature brain. Stroke occurs commonly in the perinatal period in humans, and transient ischemia-reperfusion is the most common form of stroke in neonates. The reperfusion phase is a critical component of injury progression, which occurs over a period of days to weeks, and of the endogenous response to injury. This postnatal day 10 (p10) rat model of transient middle cerebral artery occlusion (tMCAO) creates a unilateral, non-hemorrhagic focal ischemia-reperfusion injury that can be utilized to study the mechanisms of focal injury and repair in the full-term-equivalent brain. The injury pattern that is produced by tMCAO is consistent and highly reproducible and can be confirmed with MRI or histological analyses. The severity of injury can be manipulated through changes in occlusion time and other methods that will be discussed.

Giriş

Yenidoğan döneminde İnme gibi birçok 2,300 1 olarak canlı doğumda ¹ meydana gelen, ölüm ve sakatlıkların önemli bir nedenidir. Bu değişmiş merkezi sinir sistemi gelişimine yol açar ve epilepsi görülme sıklığındaki artışın, serebral palsi, mental retardasyon ve motor veya bilişsel işlev bozukluğunun diğer türler dahil uzun vadeli morbidite, arttı. Erken felç yaşam boyu etkileri, bu popülasyonda yaralanma ve onarım mekanizmalarını inceleyen yaralı beyni korumak için ya da onarım geliştirmek için stratejiler dahil olmak üzere translasyonel hayvan modelleri esansiyel olun.

Farklı iskemi modelleri yetişkin hayvanlarda, beyin hasarı incelemek için kullanılan ve edilmiştir ² prosedür genel olarak gelişmekte olan beyinde hipoksik-iskemik tahribatın incelemek için kullanılır Pirinç-Vannucci (Modifiye Levine), fokal iskemi-reperfüzyon hasarının bir tat mekanizması ise yaralı bir çekirdek ve penu ile fokal yaralanmaya nedenmbra ve zarar görmemiş uzaktan doku. Koizumi ³ ve Longa ⁴ model, sırasıyla ortak karotid arter (CCA) ve dış karotid arter (ECA) ile geçici orta serebral arter oklüzyonu elde etmek için yetişkin farelerde geliştirilmiştir. Her iki modelde de, kalıcı ligasyonu ve arter dallarının dağlama kanamayı en aza indirmek ve aynı zamanda hayvanın yeteneği beslemeye ve yaralanma aşağıdaki kilo almaya üzerinde olumsuz etkilere neden olmaktadır cerrahi işlem, düzene önemlidir. Bundan başka, olgun olmayan beyin belirgin yaralanma mekanizması ve bunun bir sonucu olarak görülen yaralanma özel desenler vardır.

Daha yakın zamanlarda, Fototrombotik inme (Rose Bengal yöntemi) ⁵ ve kalıcı MCA ligasyonu ⁶ yenidoğan ve yetişkin inme incelemek için kullanılmıştır. Hem Fototrombotik inme ve MCA ligasyon reperfus eksikliği ile sonuçlanabilir serebral kan akışındaki kalıcı değişiklikler oluşturmakiyon. Reperfüzyon artan eksitotoksisite, serbest radikal oluşumu ve işemik fazı ⁷ farklı olan sinyal silsilesini kapsamaktadır gecikmeli hücre ölümüne yol açar nitrik oksit üretimi ile, fokal yaralanma gelişmesi ve ilerlemesi önemli bir bileşenidir. Hipoksi-iskemi de yaralı çekirdek ve daha zorlu penumbra çalışma yapmak, insanlarda hipoksik iskemik yaralanma neden farklıdır ve tutarlı bir fokal yaralanma modeli neden olmayan küresel hipoksi, ardından kalıcı tek taraflı karotid ligasyonu içerir.

Daha önce geçici orta serebral arter oklüzyonu (MCAO) ^{8, 9, 10} kullanılarak olgunlaşmamış sıçan olmayan bir hemorajik inme, iskemi-reperfüzyon modeli tarif edilmiştir. Bu kere ve kalıcı ligati olmaksızın, iç karotid arter yoluyla MCA kapatır daha az invaziv bir yöntemdirveya dağlama. Bu perinatal dönemde ^{11, 12} inme en yaygın nedeni benzer yaralanma bir model sağlamaktadır. aynı taraftaki striatum ve temporoparyetal korteks hasarı yaralanma Bu sonuç, iskemi-reperfüzyon modeli. tMCAO Bu model aynı zamanda oklüzyonu süresini değiştirerek yaralanma şiddetine üzerinde kontrol sağlar. sinyal iletim yolakları ve yaralı çekirdek ve penumbra ve yaralanmamış ipsilateral ve kontralateral dokuda histolojik değişiklikler incelenmesi ayrıca olgunlaşmamış beyinde yaralanma ve onarım mekanizmaları aydınlatmak olabilir. Bu çalışma gelişmekte olan beyinde için bu önemli yaralanma modeli gösterecektir.

Protokol

Tüm hayvan araştırmaları, Hayvan Araştırmaları University of California, San Francisco Komitesi tarafından onaylandı ve Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım (Sağlık ve İnsan Hizmetleri, Yayın No: 85-23, 1985 US Department of Kılavuzu esaslarına göre yapıldı ). Hayvanlar yakından AAALAC tarafından akredite UCSF Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) ait veterinerler tarafından takip edildi. 8 günlük bir çöp bir dişi Sprague-Dawley sıçan (çöp başına 10 yavrular) ürün elde edildi. Yavrular 10 günlükken olana kadar anne ve yavruların, yiyecek ve su ad libitum verilmiştir ve IACUC protokolü başına günlük zenginleşme ile ısıya ve ışık kontrollü hayvan bakım tesisi, yerleştirildiler. Bu prosedürde kullanılan tüm cerrahi aletler sterilizasyonu sağlamak için otoklavlanmış bulundu. enstrüman ipuçları Sterilite ameliyat boyunca korunur.

1. Orta Serebral Arter Tıkanıklığı

1. yavru ve ensur tartınE o uygun ağırlık (19-21 g) 'dir. % 100 _O2 içerisinde% 3 izofluran yavru anestezisi ve bir ayak tutam yanıt olduğundan emin olun. Cerrahi aşamada altında bir ısıtma pedi kullanımı ile 35.5 ° C ve 37 ° C arasında vücut yüzey sıcaklığı muhafaza edin.
2. omuz bölgelerinde boyunca bant ile bir sırt üstü pozisyonda hayvan elde edin. steril pamuk ile, toplam dört çubuklar her çözeltisi arasında değişen, iki kez damıtılmış su içerisinde% 70 etanol çubukla ardından povidon-iyodin çözeltisi ile anterior servikal alan bez.
3. Lokal planlanan kesi sitesine 0.25% bupivakain sızmak. Bir stereoskop kullanarak, ortak karotid arteri (CCA) açığa çıkarmak için bir orta hat 5 ila 7 mm'lik anterior servikal kesi yapmak. Açık ve açıkta arter boşluğunu tutmak için 2-4 Ekartörleri yerleştirin.
4. internal karotis arter (ICA), oksipital arter (OA) ve dış karotid arter (ECA) bulun. net bir görünüm elde etmek için arterleri damat. araba oluneful vagus siniri bozmamaya.
   NOT: yapay olarak ameliyat Yavruların için inicision açık bırakılır ve arterler kesi kapalı dikilir bundan sonra maruz kalmaktadır. genel anestezi süresi oklüzyon cerrahi edilene eşdeğerdir.
5. 6-0 ipek örgülü dikiş ipliğinin 1.5 cm kesilir. tek kollu çekerek, dikiş Unbraid. tek kablolu düzgün değil yıpranmış olduğundan emin olun.
   Not: Gerekirse, steril su içinde tek bir diziyi daldırma ve forsepsle uçları ile iplikçik tımar ile aşınmış uçları düz Im.
6. 45 derecelik forseps ile sütür sarmalını tutarken, forcep ipuçları IKA ve OA arasındaki ortaya böylece ICA altında gitmek için süpürme ark hareket forseps taşıyın.
   NOT: diseksiyon iyi yapılırsa, bu adım nispeten kolay olacaktır. ICA ve OA dokunmadan ise, ICA izole etmek forseps kullanıldığında arterleri parçalamak için dikkat edin. Kanama oluşursa, forseps kadar olan damarına basınç uygulamakKanama durur. steril bir pamuk ile kan emerler.
7. forseps tarafından düzenlenen dikiş ipliğinin ucundan tut ve bitiş erişimi kolay olacak şekilde çekin. Forseps iplikçik bırakın ve aşama 1.5 (Şekil 1A) hareketi tersine, ICA altından forseps geri.
8. baz, bu CCA ayıran yere en yakın en ICA etrafında geçici ligatürün bağlayın.
   NOT: olduğu sağlarken düğüm uzaklaştırmak için çekilmiş olacak sarmalının ucu kolayca forseps ile kavramak için (1 mm'den daha büyüktür, en az 3 mm) yeterince uzun olup, böylece düğüm önemlidir Geri çekme düğüm diğer tarafında dikiş ipliğinin uygun miktarı.
9. Dikkatle yanal ICA geri ve kesi karşı tarafında koltuk altı bölgesine yakın fazla deriye ipliğini sağlamak için bir klip kullanın. Bu geri çekme ipliğine, sonraki adıma geçmeden önce kan akışını durduracak kadar gergin olmasını sağlayınkontrolsüz kanama riskini en aza indirmek. arter düz ve açık olduğu dikkate alınmalıdır.
   NOT: değil aşırı geri çekme, bu ICA kısmi veya tam aşınmaya sebep olabilir gibi yapın. Geri çekme klibi sadece ters yönünde sarmal üzerinde çekerek arteriyotomi yapmadan önce ayarlanabilir.
10. 1.5 adım olarak, altında ve ICA çevresinde başka örgüsüz dikiş ipliği ve ilmek kavramak 45 ° forseps kullanın. Pozisyon, bu şerit geri çekme telin (Şekil 1B) yanal.
    NOT: Bu adım da geri çekme öncesinde yapılabilir. Geri çekme kalitesi hakkında emin değilseniz, bu düğüm çok gevşek bir sonraki adımdan önce bağlı olabilir.
11. bağlı Ligatüre yakın erring, bağlı ve çözülmüş bitişik harfler arasında 0.2 mm'lik bir arteriyotomi yarıda kesilir.
    NOT: Kan arteriotomi yoluyla boşaltababildiği bağladılar-off arterdeki kalan ancak 5 mcL geçmemelidir. hakimse kanama, dikkatlice bir itina ile, geri çekme geliştirmek için geri çekme ipliği çekmehükümsüz aşırı gerilimden arteri zarar.
12. Bir metrik cetvel kullanarak kapatıcı dikiş ölçülmesi ve reperfüzyon esnasında tıkayıcı çıkarılması için 2-3 mm bir ilave ödenek ile dikiş kesti. 45 derecelik forseps ile oklüder tutun ve ilerlemesi için bir durak noktası işaretleme, MCA ulaşmak için uygun uzunlukta bir viraj oluşturmak için düz forseps kullanabilir.
    Not: viraj silikon burun ucundan 10 mm oklüzyon uzunluğu bu ağırlık aralığında P10 Sprague Dawley veya Long Evans sıçan yavrularının için kullanılır.
13. 45 ° forseps kullanılarak, arteriyotomi içine silikon kaplı naylon oklüzyon dikiş yem ve MCA (Şekil 1C) için önceden belirlenmiş bir mesafe işaret viraj sütürü ilerletin. ilerleme pürüzsüz hissediyor emin olun; Direnç hissedilirse derhal ilerleme durdurun. ilerlemesi sırasında, kafasına doğru CC / ECA paralel bir yönde dikiş hedefliyoruz.
    NOT: dikiş gelişmiş dorsal doğru ise,hayvanın omurga, bu pterigopalatin arter (PTA) içine çalıştırabilir. Direnç ilerleme 3-5 mm sonra hissedilirse sütür PTA kavşak vurdu. Silikon kafa ilerleme yönünü ayarlamadan önce arteriotomi yakın olana kadar arterin dışarı oklüder yedekleyin. Tamamen arteriotomi gelen oklüder kaldırmak gerekli değildir.
14. Geçici bitişik harfleri bağlama adımı 1.10 (Şekil 1D) gelen halat kolu kullanılması ile tıkayıcı elde edin.
15. retraktörü klibi çıkarın. düğüm çıkarmak için çekilir düğüm iplik düz forseps ile kavramak kolay ve düğüm sıkıştırmak üzere çekilir telin daha uzun olduğu şekilde geçici ligatür iki ipliklerini kesin.
    NOT: onlar kapanmasından sonra boşluğunda arapsaçı kalmamak ipliklerini kadar kısa olmalıdır.
16. Ekartörleri çıkarın ve üç ila dört tek dikiş oluşturmak için 6-0 örgülü ipek kullanılarak boşluğu kapatın.
17. dan yavru çıkarınAnestezi oda havasında bir ısıtma pedi üzerine yerleştirin ve. sternal yatma korumak ve tamamen baraj dönmeden önce kurtarıldı emin olmak için yeterli kendine geldi kadar yavru izleyin. yavru 35.5 ° C ve 37 ° C arasındaki bir vücut yüzey sıcaklığını muhafaza emin olun.
18. oklüzyon sırasında izofluran anestezi altında difüzyon ağırlıklı manyetik rezonans görüntüleme (-MRG) yaralanma uygun indüksiyon doğrulamak için kullanılabilir. Şekil 2 tMCAO ⁹ esnasında DW-MRI ile tespit edilen süregelen iskemik yaralanma göstermektedir.
    Not: difüzyon ağırlıklı spin eko planar görüntüleme öncesi reperfüzyon 10-15 dakika gerçekleştirilir. tüm beyin Aşağıdaki darbe dizisi ayarları kullanarak seri 2 mm kalınlığındaki taç bölümleri ile görüntülendiği: TR / TE = 5.000 / 60 ms, 4 ortalamaları, görüş alanı = 35 mm, veri matrisi = 128x128, difüzyon gradyan süresi = 20 ms ayrılması = 29.7 ms, genlik = 70mT / m, ve b faktörü = 1.045 s / ^mm2.bu, beyin sapı gibi kortikal ilgisi ya da atipik iskemik yaralanma, bir eksikliği sergileyen hayvanlar hariç tutulur.

2. reperfüzyon

NOT: Oklüzyon striatum ve korteks karıştığı yaralanma orta-şiddetli miktarda neden 3 saat gerçekleştirilir.

1. Yaklaşık 2 saat ve MCA 50 dakika aşağıdaki oklüzyon da% 100 _O2 içerisinde% 3 izofluran yavru anestezi. Cerrahi aşamada altında bir ısıtma pedi kullanımı ile 35.5 ° C ve 37 ° C arasındaki bir vücut yüzey sıcaklığı muhafaza edin.
2. İki bitişik harfler ve kapatıcı dikiş arka ucu ile işaretlenir birleşme, Aşama 1.16 kesintiye sütür çıkarın ve bulun.
   Not: Sahte ameliyat edilen hayvanlar ile indüklenen ve tıkanmış hayvanlara eşdeğer bir süre boyunca anestezi altında kalır. kesi kez daha açıldı ve kapalı dikilir. sham-hayvanlar için 2.11 adıma devam eder.
3. dikkatle çözen dıştaki düğüm daha önce uzun telinin çekilmesi ile adım 1.14 bağladılar.
   NOT: düğüm deponun direnç varsa, düğüm doğru şerit çekti ediliyor sağlamak için durdurun. Direnç devam ederse, daha iyi görebilmek için büyütme artırır. adımı sırasında arteri zarar mümkün olduğu gibi, deponun dikkatli olun.
4. boşluktan dikiş ipliğini çıkarın.
5. MCA tıkanıklığı sonrası tam olarak 3 saat sonra, yavaşça arter dışına kapatıcı dikiş geri. direniş yok olacaktır.
   NOT: Çoğu durumda, herhangi bir kanama olmaz. kanama az miktarda oluşursa, Arteriyotomi yerinde artere basınç uygulayın.
6. Bir sonraki adım reperfüzyon için ICA kan akışını geri yükler gibi arteriotomi baskı uygulamak için forseps kullanın.
7. Dikkatle adım 2.3 ile aynı yöntem kullanılarak orta düğümü çöz.
8. Vücuttan dikiş ipliğini çıkarın ve kanamayı durdurmak için arteriotomi bir hemostatik ajan uygulanır.
9. Kanama durduktan emin olun.
   NOT: atardamarın orijinal şekil ve kırmızı rengin Dönüşü ICA kan akımı restore edilmiştir onaylar.
10. Ekartörleri çıkarın ve 6-0 örgülü ipek üç dört sütürler ile boşluğu kapatın.
11. anesteziden yavru çıkarın ve oda havasında bir ısıtma yastığı yerleştirin. sternal yatma korumak ve baraj dönmeden önce tam bir iyileşme sağlamak için yeterli kendine geldi kadar izleyin. yavru 35.5 ° C ve 37 ° C arasındaki bir vücut yüzey sıcaklığını muhafaza emin olun.
12. 5 gün boyunca her gün yavrular inceleyin. Onların ağırlıklarını Recprd ve uygun iyileşmesi için yakından kesi siteleri inceleyin. 7-14 gün sonra dikiş çıkarın. ⁹ istenirse Sonrası tMCAO hasarı, MRI ile görüntülenebilir.
    NOT: Hayvanlar ilk gününde ağırlığının 1 grama kadar kaybedebilir ancak genellikle tartmak benzer dahilinde müdahalesi olmadan ağırlığı yeniden ve olacakgünlerde 4-5 ile denetimlere t aralık. Nadiren, bir yavru ağızdan sonda gerektiren 2-3 gün için beslenir, aşırı kilo veya zorluk besleme gerekebilir.
13. P21 anda, yaralanma güvenilir böyle totarod veya silindir yetiştirme olarak Sensorimotor davranışsal testler ile değerlendirilebilir. Bilişsel test bu yeni nesne tanıma ya da Morris su labirenti ¹³ olarak değerlendirmeleri kullanarak yaş kadar erken olarak 4-6 hafta uygulanabilir.
14. Beyin hasat ^{11, 12} için Euthasol intraperitoneal enjeksiyonu (50 mg / kg) ile sıçanlar öldürülür.
15. Histolojik analiz müdahalelere yaralanma hacmi veya yanıt krezil moru veya H & E boyama (Şekil 3) ¹⁰ ile yapılabilir değerlendirmek.

Sonuçlar

tMCAO kaynaklanan yaralanma şiddetine tıkanması süresi ve cerrahın tecrübesine hem son derece bağlıdır. 3 saat bir orta-ciddi hasar üretir ise bir 90 dk'lık bir tıkanması, genellikle yaralanma modeli orta hafif üretir. Yaralanma Şiddeti MRI, histoloji, ya kısa ya da uzun vadeli davranışsal analizler de dahil olmak üzere yöntemler çeşitli aracılığıyla değerlendirilebilir. Şekil 2, DW-MR bir örnek aynı taraf yarım küre içeren iskemik hasarın işaret eden bir 90-dakikalık bir oklüzyonundan ve 75. dakikada gerçekleştirilir gösterir. Difüzyon ağırlıklı görüntüleme akut iskemik safhasında, kontralateral değişiklik olmadan, ipsilateral striatum ve ipsilateral korteksin çoğunluğunda difüzyon artışı ortaya koyduğunu. Bu korteks ve derin gri madde hem kapsayan uzun dönemli yaralanma ılımlı bir seviyeye ilişkilidir.

MCA sonuçlarının Oklüzyondaha az şiddetli yaralanma striatumda başlar ve daha uzun tıkanıklığı süreleri ve daha şiddetli yaralanma kortikal ve hipokampal yaralanma kötüleşen geliştirir hücre ölümü. Bu tıkanma ^{14, 15, 16} boyunca düzgün bir dikiş yerleştirme ve ödem ve yaralanma ilerlemesinin görsel doğrulanması için izin verdiği cerrahi teknik optimizasyonu esnasında, bu tür ameliyat dikiş ipliği ekleme uzunluğunu belirlemek olarak, MR, önerilir. MR mevcut değilse, H & E ya da krezil moru boyama yaralanması morfolojisi belirlemek için basit ve güvenilir bir histolojik metotlar ve tMCAO sonra erken ve geç zaman noktalarında hem de kullanılabilir. Şekil 3, aynı taraftaki striatum ve korteks kist oluşumuna ve hacim gösteren, bir 3 saat oklüzyon aşağıdaki histopatolojik incelemede bir orta-ciddi yaralanma modeli gösterir.

Karşı hemisferik hacim ipsilateral oranını hesaplamak için kresil-moru ile boyanmış bölümlerin Unbiased stereolojik ölçümü aynı taraftaki iskemik-reperfüzyon yaralanması teyit etmektedir. Spesifik olarak, Euthasol hayvana anestezi sonra beyin% 4 paraformaldehid ile, 0.1 M PBS içinde transkardiyak perfüzyon ile hasat edilmiştir. % 30 sukroz içinde bir gece boyunca postfiksasyon ve dengelemeden sonra, tüm beyin 50 um aralıklarla bölümlere ayrılmıştır ve her on ikinci bölüm seçildi, monte edilmiş ve kresil moru ¹⁰ ile boyanmıştır.

Hatta hafif hasar, örneğin çizerek ve hemiparezi olarak lokomotor değişiklikleri ile, oklüzyon sürecinin not edilir. daha şiddetli yaralanma, bu değişikliklerin reperfüzyon sonrası devam edecektir. Ek davranış testi sensorimotor fonksiyonu için rotarod veya silindir yetiştirme testi ve Morris su labirent için dahil olmak üzere yaralanma şiddetini değerlendirmek için kullanılabilirkognitif fonksiyon ^13.

Şekil 1: tMCAO Muhakemeleri Canlı Cerrahi Görüntüleri. Adım 1.6 ayrıntılı olarak, (A) ilk dikiş kordon, ICA kısmının etrafında döndürülür. (B) ilk geçici ligatür bağlanır ve ICA geri çekilir. Adım 1.9 ayrıntılı olarak ikinci bir dikiş kolu, birinci dikiş ipliğine yanal ICA kısmının etrafında döndürülür. Adım 1.12 ayrıntılı olarak (C), silikon kaplamalı oklüzyon dikiş, arteriyotomi beslenir. Adım 1.14 ayrıntılı olarak (D) ikinci geçici birleştirme, yerine kapatıcı sabitlemek için bağlıdır. Ölçü bar = 1 mm.

Occl sırasında MR: Şekil 2,usion Uygun Tek Taraflı Yaralanması gösterir. Ön akut fazda devam eden işemik yaralanması ile tutarlıdır ipsilateral hemisferi (oklar), içeren artmış difüzyon göstermektedir, posterior 90 dakika oklüzyon sırasında gerçekleştirilen-MRG koronal görüntü dilimleri için. Stroke ¹¹ izniyle. Bu rakamın büyük halini görmek için buraya tıklayın.

Şekil 3: tMCAO takip eden 4 hafta striatum ve Cortex katılımı tek taraflı Sakatlık. Arka kresil-moru ile boyanan koronal beyin kesitleri S38 hayvanlardan toplanan (her biri 50 um) göstermektedir, oldukça ağır yaralanma (oklar aynı taraftaki kist oluşumuna ve kortikal düşük ve anteriorP10 bir 3 saat tMCAO aşağıdaki striatal hacmi). Sol tarafta yuvarlak delik Kontralateral hemisferde temsilcidir. Ölçü bar = 5 mm olmalıdır. Hastalık ¹² Nörobiyoloji izniyle. Bu rakamın büyük halini görmek için buraya tıklayın.

Tartışmalar

protokol dahilinde Kritik adımlar

Hem olgun ve olgun hayvanlarda yapılan beyin zedelenmesinin ilerlemesi ile ilgili her iki hipotermi ¹⁷ ve hipertermi ¹⁸ etkilerini orada bilinen İlk olarak, tam iyileşme kadar anestezi başlatılmasından normotermi muhafaza etmek önemlidir. hayvan güvence ve nefes izlemek ve trakea sıkıştırma serbest olmasını sağlamak için kesi, optimum konumlandırma geri çekmek ise İkincisi, esastır. Bu vagal stimülasyon ile kalp hızında değişikliklere neden olabileceğinden Üçüncüsü, sıkma veya vagus siniri germe kaçının. ICA geri çekme arteriotomi sırasında kanamayı kontrol etmek gereklidir çünkü Dördüncüsü, dikkatler arteri zarar vermemek için geri çekilme sırasında gerginlik derecesine ödenmelidir. arter retraksiyon gelen gözyaşı yoksa zayıf arteriyotomi kesi varsa veya hayvan nedeniyle riske analize dahil edilmelidirkanama ve kötü reperfüzyon.

Değişiklikler ve sorun giderme

Bir kılavuz olarak MRI kullanılarak, ameliyat dikiş ipliği uzunluğunun silikon ucu doğru fokal iskemi oluşturmak için MCA tıkar sağlamak için optimize edilebilir. MR mevcut değilse diseksiyon dikiş yerleşimini görselleştirmek için, yavruların reperfüzyon öncesi ötenazi olabilir. Gerektiğinde dikiş uzunluğu ayarlayın. yavru ağırlığı yüksek kapatıcı dikiş uzunluğu gereksinimleri ile ilişkilidir. tıkanma süresi yaralanma şiddetine derecesini ayarlamak için değiştirilebilir.

Buna ek olarak, dikiş şekli ve uzunluğu çok önemlidir. 19-21 g ağırlığında P10 Sprague-Dawley ve Long Evans sıçanlarda için, 10 mm 'lik bir deneyim ekleme optimal uzunluğudur. kapatıcı dikiş Ayrıca yerleştirme, MCA delinmesi ile sonuçlanabilir. Ayrıca, her bir cerrahi kapatıcı filament şeklinde tutarlılık yaralanması p artan bir kıvama neden olurattern ^{19, 20.} Bu nedenle, bu özel amaç için profesyonel olarak üretilmiş sütür ile önerilir. Yaralanma desen nedeniyle teknik görünüşte dakika farklılıklara uygulayıcıları arasında farklılık dikkat etmek de önemlidir.

tekniğin Sınırlamalar

Küçük bir de bu tekniği Sahne, kemirgen gelişmekte önemli bir deneyim gerektirir. Doğru şekilde gerçekleştirilmemesi durumunda, cerrah, farklı boyutlarda hayvanlar arasında çok tutarlı bir yaralanma modeline neden% 95 daha yüksek bir hayatta kalma oranına ulaşmak mümkün. Ayrıca, uygun cerrahi aletler gereklidir. Cerrahi aletler de tüm enstrüman ipuçları düzgün yaklaşmasının sağlanması sağlanmalıdır.

mevcut veya alternatif yöntemlere göre bu tekniğin Önemi

Hipoksi, iskemi veya pirinç-Vannucci modeli ² iken , en yaygın olarak gelişmekte olan beyinde hipoksik-iskemik tahribatın incelemek için kullanılır, bir reperfüzyon fazı takip küresel hipoksi olmadan geçici fokal iskemi, orada tMCAO bu model, HI farklı olduğuna dikkat etmek önemlidir zaman tıkanıklığı kaldırılır ve kan akımı geri yüklenir. Bu, daha tutarlı ve tekrarlanabilir bir yaralanmaya neden olur ve klinik olarak daha translasyonel tam dönem neonatal inme görülene benzer bir yaralanma modeli neden gereğidir. Bu odak yaralanma desen ve yaralanmamış dokuda telafi edici tepkiler etüdüne olanak sağlamıştır.

Bu tekniği mastering sonra Gelecekteki uygulamalar

Bu model, insan yenidoğanlarda inme en yaygın nedeni, doğum sonrası ^{11, 21} boyunca meydana gelen bir geçici tıkayan trombozun benzerdir. etiyolojisi tam olarak net değildir ve büyük ihtimalle birden fazla faktöre dayanmaktadır, ancak çoğu durumda t tahmin edilirO plasenta ¹¹ geçen emboli elde edilmektedir. Buna ek olarak, daha sonra nöbet aktivitesi veya ince fokal nörolojik muayene ile sıklıkla kabul perinatal inmeli birçok yenidoğan ²² anormallikler. Bu yaralanma ilerlemesi ve hayati olası terapötik stratejilerin mekanizmalarını tanımlamak için tutarlı, translasyonel yaralanması modelini kullanır.

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Isoflourane	Henry Schein	50033	anesthetic, at 3%
Trinocular Surgioscope	World Precision Instruments	PSMT5N
Heating pad	Sunbeam	000731-500-000	low to medium setting
IR Thermometer	Extech Instruments	72-5270
Retraction kit for small animals	Fine Science Tools	18200-20
CermaCut Scissors	Fine Science Tools	14958-09
Dumont #5SF Forceps	Fine Science Tools	112522-00	2x
Dumont #5/45 Forceps	Fine Science Tools	11251-35	2x
B-2 Micro Clamp	Fine Science Tools	00398-02
Forcepts for Clamp Application	Fine Science Tools	00072-14
Micro Vannas Scissors	Fine Science Tools	15000-03	2mm cutting edge
Occlusion Sutures	Doccol	602123PK10	701712PK5Re
Ruler	Fine Science Tools
Hemostatic Agent	Avitene	DVL1010590
6-0 Perma-Hand Silk Reverse CuttingSuture	Ethicon	769G
Euthasol	Virbac	710101	0.22 mL/kg
Cotton Tipped Applicators	Henry Schein	100-9249
Laboratory Tape	VWR	89097-990