Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.
Method Article
Bu kağıt ve öğretim videonun amacı ortaya çıkarmak ve daha sonraki makroskopik ve histolojik analiz için uygun bozulmamış bir halde, domuz beyin ve hipofiz bezi otopsi nasıl kaldırılacağı tanımlamaktır.
Domuzlar insan olmayan primatlar için ekonomik ve etik açıdan uygun yerine büyük hayvan translasyonel sinirbilim araştırmalarında giderek daha popüler hale gelmiştir. domuzun büyük beyin boyutu geleneksel klinik beyin kameralar ve insan klinikten doğrudan kullanımı ve beyin cerrahisi prosedürleri ve ekipmanın test kullanımına izin verir. Daha fazla makroskopik ve histolojik analizi, ancak, domuz, merkezi sinir sistemi (CNS) ve daha sonra beyin çıkarılması postmortem maruz kalmayı gerektirir. Bu merkezi sinir sistemi kalın, kemik kafatası ve omurga ile kapsül olup domuz gibi kolay bir iş değildir. Bu kağıt ve öğretim videonun amacı açığa ve postmortem domuz beyni ve sonraki makroskopik ve histolojik analiz için uygun bozulmamış bir halde hipofiz bezini, nasıl kaldırılacağı tanımlamaktır.
domuzlarda Translasyonal nörobilim çalışmaları son yirmi yılda giderek popüler hale gelmiştir. Domuz beyin büyük boyutlu klasik klinik beyin görüntüleyiciler ve doğrudan kullanımı ve insan klinik 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 den nörocerrahi usul ve ekipman test kullanımını mümkün kılmaktadır. Son 20 yıl içinde, domuz, özellikle küçük domuzu (örneğin, Göttingen Minipig gibi), kök hücre transplantasyonu, nöromodülatör tedavi yöntemleri incelemek için kullanılmıştır; Viral vektör transfeksiyon; ve Parkinson hastalığı, obezite, depresyon ve Alzheimer hastalığı 2, 6 yönelik derin beyin uyarımı,= "xref"> 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17. Bu MiniPig MSS 3, 18, 19, 20, 21 işlemek için stereotaksik ve cerrahi yaklaşımların geliştirilmesi takip edilmiştir. Tesis MSS değişiklikleri (PET 10, 13, 22, 24 ve MR 23), sistometrisi 11, 12, 25, beyin görüntüleme kullanılarak canlı hayvanlarda değerlendirilmiştir, yürüme analizi17, nörolojik değerlendirme 9, 17 ve histoloji ve stereolojik analizi 14, 15, 17, 26, 27, 31 temel ölüm sonrası inceleme. Bununla birlikte, ölüm sonrası analizi kalın, kemik kafatası ve domuz beyin çevreleyen kapsayan lifli bir dural olarak maruz kalma ve kolay bir iş değildir domuz beyin, kaldırılmasını gerektirir.
Bu kağıt ve öğretim videonun amacı postmortem domuz beyin ve hipofiz motorsuz cerrahi aletler kullanılarak 15-20 dakika içinde bozulmamış bir halde maruz ve kaldırılabilir nasıl tarif etmektir. MiniPig hipofiz bezi üzerinde anatomik bir çalışma için kullanılan öğretim video ve fotoğraf çizimler erkek domuzu (20-25 kg: 6 ay, vücut ağırlığı yaş) göstermektedir.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Hayvan anestezi ve euthanesia (NIH yayın sayılı 86-23, 1985 revize) ve Hayvan Araştırmaları Etik Danimarka Konseyi tarafından onaylanan "laboratuvar hayvan bakımı İlkeleri" uyarınca gerçekleştirilmiştir.
1. Araçlar
2. Decapitation
Not: Anestezi midazolam 5 mL (5 mg / mL) ve ketamin 5 ml (25 mg / ml) içeren bir intramüsküler enjeksiyon ile oluşturuldu. Hayvan derin sedasyon zaman 5-10 dakika sonra, bir kulak toplar damarına kanül takıldı ve sodyum pentobarbitalin letal doz (vücut ağırlığı 100 mg / kg) (200 mg / ml) damardan verilmiştir. Ettrup ve arkadaşları tarafından gösterildiği gibi hayvan tamamen ötenazi emin olmak için, interdijital ağrı refleks test edilmiştir. (2011) 20. açıklandığı gibi Komple euthanization sağlanmıştırEttrup ve arkadaşları tarafından gösterildiği gibi ve, izotonik tuzlu su, 5 L bir transcardial perfüzyon ile takip edilen etik bildirimi. (2011) 20. Bütün gösterilen işlemler, uzun süreli anestezi ve işlem sonrası hayatta kalması için gerekli olan sosyal önlemler ihtiyacını ortadan kaldırarak, otopsi yapılır.
Şekil 1: MiniPig dekapitasyon. (A), boynu insizyonu (ok, mandibular açı). (OC, oksipital kondil C1 atlas ön kavis) atlantooksipital bağ ve kafatası-boyun birleşme yerinde dura çevrili omurilik (SC) ila (B) bir kesik. (C) atlantooksipital mafsal arka kısmı kesit düzeyinde güçlü bir uzantı (oklar) tarafından serbest bırakılır. Bu rakamın büyük halini görmek için buraya tıklayın.
3. Kafa Açma
Şekil 2: MiniPig kafatası açma. (A) 'dorsoposterio maruz kalmasıoksipital ve temporal kas çıkarılması dahil olmak üzere R kafatası yüzeyi. Oksipital kemiğin (B) çıkarılması (CB dura kaplı serebellum; OB, oksipital kemik OC, oksipital kondil ve SC, omurilik). (C) Bir çekiç ve bir kemik keski öne kafatası nüfuz ve göz hizasında ön sinüse girmek için kullanılır. (D) Frontal sinüs (FS) derecesi, bir ince iç kemik tabaka (2) serebrum kaplama açığa (1) dış kalın kafatası kemiği kaldırmak için kullanılır. Dura kaplı Serebrumu (ok) maruz bırakılması, ince kemik tabakanın (E) çıkarılması. (F) Son olarak, bir çekiç ve keski kemik yanal olarak ön ve arka kafa açıklıkları bağlamak için kullanılır. Bu rakamın büyük halini görmek için buraya tıklayın.
4. Beyin Removark
Şekil 3: MiniPig beyin çıkarılması. Cerrahi forseps ve dura bıçakla (A) Dural açılışı. (B) Bakım tamamen beyin ve beyincik arasında yer alan dura yaprak (ok), kesilirken alınmalıdır. (C), domuz kafası kafa tabanı yapıları daha iyi görülebilmesi için ve yerçekimi beyin amaçlanan yer değiştirmesine yardımcı olmak için sırayla dikey olarak konumlandırılmıştır. (D), bir ayırıcı kesici veya bir kemik keski Dura-covere künt bölümü tarafından koku ampul rahatlatmak için kullanılırd kafa tabanı. (E) diseksiyon kiyazmanın (ok), infundibulum sap Okülomotor sinirlerin maruz kalma ve bölümlere ayırma için kafa tabanı boyunca bir posterior yönde devam edilir. Beyin sapı ventral yüzeyi yola gibi (F), beyin salma alt kranyal sinirlerinin bölümü ile tamamlandı (eden IV troklear sinir, III, Okülomotor sinir V, üçlü sinir ve VI, abdusens). Bu rakamın büyük halini görmek için buraya tıklayın.
5. Hipofiz Kaldırma
Şekil 4: MiniPig hipofiz çıkarılması. (A), hipofiz fossa (*) kafatası kat tanımlanır (1, koku ampul, 2, optik kiazma ve PF posterior fossa). (B), dura örtü (Sellar diagphragm, (ok)) yanal olarak kesilir. (C), hipofiz (ok) bir dissektör ile serbest bırakılır ve hipofiz fossa dışına çıkar. Ölçek çubuğu (AC), 10 mm =. Bu rakamın büyük halini görmek için buraya tıklayın.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
kurumasını doku malzeme önlemek için, sabitleştirici veya makroskopik analizi yapılmıştır hemen sonra izotonik tuzlu su ile dolu bir kavanoz içinde ayrılmıştır beyin ve hipofiz saklanması tavsiye edilir. doku materyali, izotonik tuzlu su depolama oysa yıl süreyle tespit sıvısı içerisinde depolanabilir da bir buzdolabı içinde zamanla doku çürümesine neden olur.
Sağlam domuzu beyin doğrudan dondurma <...
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
En çok deneysel nörolojik çalışmalar, CNS'ye erişim ince skull- ve dural-kalınlığıyla kolaylaştırılmaktadır fareler ve sıçanlar gibi küçük hayvan türleri, gerçekleştirilir. Bununla birlikte, domuz, 1, 4, 8, koyun 32 ve insan olmayan primatlar gibi daha büyük bir deney hayvanlarında, bu yapıların önemli kalınlığı kafatası kemik çıkarılması için güçlü bir araçl...
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.
Yazarlar minnettarlıkla Bayan Trine W. Mikkelsen ve usta yardımı, Montaj Bayan Lise M. ve Påskehøjgaard personeli kabul. Danimarkalı Tıbbi Araştırma Konseyi, Lundbeck Vakfı ve Novo Nordisk Vakfı maddi çalışmayı desteklemiştir.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Heavy Scalpel Handle #4 | FST (Fine Science Tools) | 10008-13 | Good for skin incision and soft tissue removal |
Non-Sterile Scalpel Blades #23 | FST | 10023-00 | |
Scalpel Handle #7 | FST | 10007-12 | Optimal for dural incision and precision work |
Non-Sterile Scalpel Blades #11 | FST | 10011-00 | |
Surgical Forceps | FST | 11024-18 | The tip of the surgical forceps ensure a firm grip |
Kerrison Bone Punch | Aesculap Neurosurgery | FF713R | Must be robust, bite size 3-5 mm |
Bone Rongeur | Aesculap Neurosurgery | MD615 | Must be robust, bite size 15 x 5 mm |
Bone Rongeur | Aesculap Neurosurgery | FO551R | Must be robust, bite size 25 x 15 mm |
Bone Chisel | Lawton | 67-0335 | The size of the chisel head should not exceed 20 mm |
Mallet (Hammer) | Millarco | 5624108 | Weigth 300 g, length 30 cm, head hit area size 2 x 2 cm |
Micro-Scissor | FST | 14002-14 | |
Dissector | Aesculap Neurosurgery | OL165R | |
Göttingen minipigs | Ellegaard Göttingen Minipigs A/S, Denmark | ||
Euthanimal | pentobarbital | ||
Ketamine | Pfizer | ||
Midazolam | Hameln Pharmaceuticals |
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır