JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Bulaşıcı hastalık bulaşmasını önlemek için el yıkama yaygın olarak önerilir. Bununla birlikte, bulaşıcı hastalık patojenlerinin çıkarılmasında hangi yıkama yöntemlerinin en etkili olduğuna dair çok az kanıt bulunmaktadır. Mikroorganizmaların yok edilmesinde el yıkama yöntemlerinin etkinliğini değerlendiren bir yöntem geliştirdik.

Özet

Bulaşıcı hastalık bulaşmasını önlemek için el yıkama yaygın olarak önerilir. Bununla birlikte, el yıkama yöntemlerinin genel olarak etkililiği hakkında az kıyaslanabilir kanıt bulunmaktadır. Ek olarak bulaşıcı patojenlerden hangisinin daha etkili olduğunu belirlemek için el yıkama yöntemlerini karşılaştıran çok az kanıt bulunmaktadır. Bulaşıcı hastalık salgınlarında istihdam edilebilir el yıkama için farklı yaklaşımlar için kanıt sağlamak için araştırma gerekmektedir. Burada, el yıkama yöntemlerinin ellerdeki mikroorganizmaların yok edilmesinde etkinliğini ve durulama suyundaki ısrarını değerlendirmek için bir laboratuar yöntemi anlatılmıştır. Gönüllülerin elleri ilk olarak test organizması ile çakıştırılır ve sonra her bir el yıkama yöntemiyle yıkanır. Genellikle, vekil mikroorganizmalar, insanları hastalıktan korumak için kullanılır. Yıkadıktan sonra gönüllülerin elinde kalan organizmaların sayısı değiştirilmiş bir "eldiven suyu" yöntemi kullanılarak test edilir: eller elu ile eldivenlere yerleştirilirMikroorganizmaları süspansiyon haline getirmek ve zar filtreleme (bakteri) veya plak tahlili (virüs / bakteriyofaj) ile analiz için kullanılabilir hale getirmek üzere yıkanır. Elde yıkamadan üretilen durulama suyu analiz için doğrudan toplanır. El yıkama etkinliği, elle yıkamadan sonra alınan numuneler arasındaki günlük azaltma değerinin, el yıkama yapılmayan numuneler ile karşılaştırılması ile nicelleştirilir. Durulama suyu persistansı, çeşitli elle yıkama yöntemlerinden elde edilen durulama suyu örneklerini, sadece su ile el yıkama işleminden sonra toplanan örneklerle karşılaştırarak nicelleştirilir. Bu yöntem insan gönüllülerinin güvenliğini korumak için yedek organizmaları kullanma ihtiyacı ile sınırlı olmakla birlikte, bir in vitro çalışmada çoğaltılması zor olan el yıkama yönlerini yakalar ve yıkama etkinliğinde araştırma boşluklarını ve bulaşık organizmalarının yıkamadaki ısrarını doldurur. Su.

Giriş

El yıkama, hastalığın yayılmasını önlemek için yaygın olarak önerilir, özellikle diyare ve solunum yolu hastalıkları da dahil olmak üzere dışkı-oral veya hava yolundan bulaşan hastalıklar 1 . Şaşırtıcı bir şekilde, sabun ve suyla (HWWS) el yıkama ve alkollü el temizleyicisi (ABHS) gibi el yıkama yöntemlerinin etkinlikleri hakkında, organizmaların ellerden uzaklaştırılmasına ilişkin çok az kanıt bulunmaktadır. İlk araştırmalar, el yıkama yönteminin aksine, el yıkamasının mekanik etkisinin çoğu organizmanın giderilmesini 2 , 3 hesaba kattığını bulmuştur. Buna ek olarak, el yıkama yönteminin en etkili olduğuna dair çok az kanıt bulunmaktadır. Gayrı resmi bir literatür taramasında, sabun ve el dezenfektörünün organizmaların çıkarılması üzerindeki etkinliğini karşılaştıran 14 çalışma tespit edilmiştir. Bu çalışmaların beşinde ABHS'nin daha etkili olduğu bulunmuştur4 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 , 14 , 15 ve daha fazla olmak üzere HWWS'nin , 16 , 17 numaralı yöntemler arasında anlamlı bir fark bulamadığını bulmuşlardır. Bu bulgular tutarsızdır ve el yıkama sonrasında durulama suyunda organizmaların sürdüğü sürecin hastalık riskini ele almamaktadır. Genel olarak, bulaşıcı hastalıklara neden olan patojenlerden arındırma için el yıkama yöntemlerinin karşılaştırmalı etkinliği hakkında kanıt sınırlıdır.

Bu kısıtlı kanıt salgın ayarlarında hangi yöntemlerin en uygun olduğuna ilişkin belirsizliğe neden olmuştur. Örneğin, Batı Afrika'daki 2013'ten 2016'ya kadar olan Ebola Virüs Hastalığı (EVD) salgını sırasında, birkaç büyük uluslararası müdahale uzmanı, HWWS, ABHS veya% 0.05 klorlu solüsyonlar için çelişkili tavsiyeler verdi. Dünya Sağlık Örgütü (WHO), HWWS veya ABHS (eğer eller görünür şekilde kirli değilse) tavsiye ederken, Médecins Sans Frontieres (MSF), el yıkama için% 0.05 klor solüsyonu kullanılmasını önerir. DSÖ, başka seçenek mevcut olmadığı sürece klorun kullanılmaması gerektiğini ileri sürmektedir; zira cildin uyguladığı klor talebi nedeniyle diğer yöntemlerden daha az etkili 18 , 19 , 20 , 21 , 22 . Buna ek olarak, klor çözeltileri, yaygın olarak, yüksek test hipoklorit (HTH), yerel olarak üretilen ve stabilize edilmiş sodyum hipoklorit (NaOCl) ve çimDikloroizosiyanürat (NaDCC). Dünya Sağlık Örgütü'nün Batı Afrika'daki EVD salgınına tepki olarak sistemli bir inceleme yapan elle yıkamanın klor ile karşılaştırma etkinliğini araştıran sadece dört çalışma 23 bulundu . Bu çalışmalar aynı zamanda çelişkili sonuçlar vermiştir ve bu çalışmaların hiçbirinde el yıkama veya% 10 , 24 , 25 , 26 , 27 Ebola virüsüne benzer mikroorganizmalar için önerilen% 0.05 klor konsantrasyonu kullanılmamıştır. Bu nedenle, tavsiyeler kanıta dayalı olarak bulunmadı ve hangi önerilerin en etkili olduğu belirsizdi.

Bulaşıcı patojenlerin yayılmasını önlemek için el yıkama yaklaşımlarını karşılaştırmak için ek araştırmalara ihtiyaç vardır çünkü el yıkama müdahaleleri salgın hastalık bulaşmasını önlemede önemli bir araçtır. Bu hVe yıkama tavsiyeleri kanıtlara dayanmalıdır. Böylece, 2 , 28 , 29 , vekil veya bulaşıcı olmayan patojenlerle yapılan el yıkama etkinliğini ve durulama suyu devamlılığını test etmek için bir yöntem geliştirildi. Phi6'yı Ebola virüsü için vekil olarak kullanan ve Escherichia coli'yi ortak bir indikatör organizma olarak kullanan örnek sonuçlar burada sunulmuştur. Bu protokolde el yıkama etkinliği ve durulama suyu devamlılık testleri sunulmaktadır.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protokol

Etik Beyanı: Burada açıklanan çalışma (Phi6 ve E. coli , Ebola'nın vekilleri olarak), Tufts Tıp Merkezi ve Tufts Üniversitesi Sağlık Bilimleri Kampüsü'ndeki Kurumsal İnceleme Kurulu (# 12018) tarafından onaylandı; Harvard Üniversitesi Tufts Kurumsal İnceleme Kurulu'na inceleme yaptı.

NOT: Bu protokolü başlatmadan önce iki adımın tamamlanması gerekir. İlk olarak, insan deneklerinde güvenle kullanılabilecek, araştırılacak patojenin bir başka Biyogüvenlik Seviyesi 1 (BSL-1) vekili veya enfeksiyoz olmayan versiyonu tanımlanmalı ve seçilmelidir. Organizma insan gönüllülerinin çıplak ellerini inoküle etmek için kullanılacağı için bu protokol için bir BSL-1 vasirtatı veya bulaşıcı olmayan patojen gereklidir. İkincisi, gönüllüleri işe almadan veya deneye başlamadan önce, insan Kaynakları ile araştırma yapmak için Yerel Kurumsal Değerlendirme Kurulu'ndan onay alınmalıdır. Bu protokolün pek çok yönü,İlgi konusu araştırma sorularının özel ihtiyaçları.

1. Hak Kazanan İnsan Konularını İşe Alın

  1. Halka açık duyuru panolarına kağıt el ilanları göndererek ve katılımcılarla ilgilenebilecek üyelerle birlikte gruplara e-posta göndermek suretiyle gönüllüleri toplama. Bu duyurular, çalışma amacını, iletişim bilgilerini ve uygunluk kriterlerini içermelidir.
  2. Uygunluğu değerlendirmek için gönüllülerle görüşün. Gönüllülerin, 18-65 yaşları arasında sağlıklı olduklarını ve halen hamile kalmamakta veya antibiyotik kullanmadığını ve cilt hasarları / bozuklukları, el yıkama maddeleriyle ilgili alerjenler veya hijyene ilişkin akıl sağlığı sorunları hikayesi olmadığını onaylayın.
  3. Uygun gönüllülere onay formlarını okutun. Sundukları her soruyu yanıtlayın ve gönüllü ile araştırmacı formun iki kopyasını imzalamalarını sağlayın. Bir formu muhafaza edip gönüllülere sağlayın.
  4. Demografik bilgiler, kişi hakkındaki sorular da dahil olmak üzere temel bir anket uygulayın.Cilt koşullarının geçmişi ve son el yıkama davranışı hakkında bilgi. Dermatit, cilt yaralanmaları veya temel cilt anormallikleri belirtileri için elleri inceleyin 31 .
  5. Gönüllüleri, ilgilenilen her organizma için iki test oturumu için zamanlayınız (bir tanesi toprak yükü ile ve diğeri ise test edilmek üzere test edilmiştir). Gönüllülere, kişisel ürün kullanımından kaynaklanan karışıklığı önlemek için, testten önce yedi günlük bir boşaltma süresi için antimikrobiyal ürünlerden kaçınmalarını söyleyin.
    1. Her zamanki ürünlerinizin yerine kullanmak üzere gönüllülere antimikrobik ürünler (şampuan, saç kremi ve sabun) sağlayın. Ağır vazgeçilmez vinil eldivenler sağlayın ve ev temizleme ürünleri gibi ürünleri kullanırken nesnelere onları giymelerini söyleyin.

2. Acil Müdahalede Sıkça Kullanılan El Yıkama Çözümleri Hazırlayın (Sabun, ABHS,% 0.05 HTH, NaDCC ve NaOCl Çözümleri)

NOT: Klor çözeltileri hazırlanabilir Denemeden önce 12 saate kadar artı, ancak> 12 saat depolandığında bozunur.

  1. Testin yapıldığı bağlamla ilgili bir sabun seçin ve satın alın.
    NOT: Çoğu durumda, gelişmekte olan ülkelerdeki bulaşıcı hastalık acil durumlarında bu sabun için bir bar olacaktır.
  2. Testin yapıldığı bağlama ilişkin bir ABHS çözümü seçin ve satın alın.
    NOT: Etkinliği sağlamak için seçilen ABHS'nin etil alkol içeriği% 70 veya daha fazla olmalıdır.
  3. Granül Ca (C10) 2 tozu ultra saf suya ilave ederek% 0.05 kalsiyum hipoklorit (Ca (C10) 2 ) solüsyonu hazırlayın. Test edilecek konuların sayısına bağlı olarak gereken çözelti miktarını belirleyin.
    1. Aşağıdaki denklemi kullanarak, belirli bir miktarda suda istenen miktarda çözeltiyi hazırlamak için gerekli olan toz miktarını, verilen klor yüzdesini kullanarak belirleyin:
      /files/ftp_upload/55604/55604eq1.jpg "/>
      NOT: Ca (C10) 2 tozu tipik olarak% 60-80 kullanılabilir klor içerir.
  4. Ultra saf suya granüler NaDCC tozu ilave ederek% 0.05 lik sodyum dikloroizosiyanürat (NaDCC) solüsyonu hazırlayın.
    1. Aşağıdaki denklemi kullanarak, belirli bir miktarda suda istenen miktarda çözeltiyi hazırlamak için gerekli olan toz miktarını, verilen klor yüzdesini kullanarak belirleyin:
      figure-protocol-4427
      NOT: NaDCC tozu tipik olarak yaklaşık% 50 kullanılabilir klor içerir.
  5. Ultra saf suya stok sodyum hipoklorit solüsyonu ilave ederek stabilize edilmiş% 0.05 NaOCl solüsyonu hazırlayın.
    1. Üreticinin talimatlarına ( ör. Iyodometrik titrasyona göre titrasyon testi yöntemi kullanarak NaOCl stok solüsyonunun konsantrasyonunu (muhtemelen% 5-8 olacak şekilde) teyit edin, su için Malzeme Listesine bakınGgested kit).
    2. Test yönteminin sonuçlarını kullanarak, aşağıdaki denklemi kullanarak suya ilave edilecek çözelti miktarını hesaplayın:
      figure-protocol-5097
  6. Bir elektroklorinatör, ultra saf su ve laboratuar dereceli sodyum klorür (NaCl) kullanılarak üretilen sodyum hipoklorit çözeltisini ultra saf suya ilave ederek stabilize edilmiş% 0.05 NaOCl solüsyonu hazırlayın.
    1. Üreticinin talimatlarına uygun olarak bir elektroklorinatör kullanarak% 1'lik klorlu ultrafure su ve NaCl çözeltisi hazırlayın.
    2. NaOCl stok solüsyonunun konsantrasyonunu teyit etmek için bir titrasyon testi yöntemi ( örn. Iyodometrik titrasyon) kullanın 32 .
    3. Testin sonuçlarını kullanarak, aşağıdaki denklemi kullanarak suya ilave edilecek çözelti miktarını hesaplayın:
      figure-protocol-5851
  7. C'yi teyit etKlor el yıkama solüsyonlarının her birinin bir titrasyon yöntemi ( örn. Iyodometrik titrasyon) kullanarak konsantre hale getirilmesi ve çözeltilerin, hedef konsantrasyonun% 10'u oranında bir hata (% 0.045-0.055) içinde bulunana kadar su veya klor kaynağı toz / solüsyonu eklenerek ayarlanması.

3. Organizmaları Hazırlayın ve Toprak Yükleyin ve İnoküle Üretmek için Birleştirin

NOT: Aşağıdaki alt bölümlerde, yöntemlerin açıklaması için örnek bakteri ve viral organizmalar olarak E. coli ve Phi6 kullanılır.

  1. Test için kullanılacak organizmayı bakteriler için 10 x 108 CFU / mL'den büyük ve virüsler için 10 x 107 PFU / mL'den yüksek konsantrasyonda hazırlayın.
    1. E. coli'yi hazırlamak için, patojen olmayan bir E. coli suşunu Luria-Bertani (LB) agar plakalarına çizin ve tek koloniler elde etmek için 37 ° C'de 24 saat inkübe edin. 4 ° C'de saklayın.
      NOT: Bu, kesme işlemiyle yapılabilirDeneyden önceki günler.
      1. Deneyin başlangıcından bir gün önce plakadan tek bir koloni alın ve steril bir halka kullanarak 10 mL LB sosunu inoküle edin. Gece boyunca 37 ° C'de çalkalayarak inkübe edin.
      2. Deney sabahında, 20 mL taze LB suyu için gece kültürü 1 mL ekleyerek taze bir kültür başlatın. 10 8 CFU / mL'den daha yüksek bir hücre yoğunluğunu elde etmek için yaklaşık 2.5 saat inkübe edin.
      3. Kültür konsantrasyonunu hesaplamak için bir spektrofotometre kullanın.
        NOT: Kullanılan E. coli suşu için bir standart eğrisinden önceden oluşturulmuş bir dönüştürme faktörü kullanın, bu da konsantrasyonun 10 8 CFU / mL 33'den yüksek olmasını sağlayın. Hücre yoğunluğu yeterince yüksek değilse, kültürü inkübatöre döndürün ve hazır oluncaya kadar tekrar test edin.
    2. Zar filtreleme kullanarak konsantrasyonu teyit edin 34 .
      NOT: Seri seyreltmeler yapın oF kültürü fosfat tamponlu salin (PBS) içinde filtre edilen solüsyon plaka üzerinde sayılabilir bir sayıda koloni üretecek şekilde (kesin sayı kullanılan ortamına bağlıdır).
      1. Steril filtrasyon hunileriyle ve vakum bağlantısı ile alev ve filtrasyon manifoldu oluşturun. Forsepsi etanol ile alevlendirerek sterilize edin. Bunları, ızgara yukarı bakacak şekilde filtrasyon manifolduna 0.45-μm'lik bir filtre yerleştirmek için kullanın. Filtreyi steril PBS ile az miktarda ıslatın.
      2. Huniyi tabanın üzerine yerleştirin ve pipetleme veya doğrudan filtre üzerine dökerek işlenecek numune solüsyonu ilave edin. Numunenin tamamı zarı geçene kadar vakumu çalıştırın. Huninin yanlarını steril PBS ile durulayın ve vakumla tekrar takın.
        NOT: Numuneler en az 100 μL ve 100 mL'ye kadar olmalıdır. Bir numune 10 mL'den düşükse, sampanın düzgün filtrasyonunu sağlamak için filtrelemeden önce filtrasyon hunisine yaklaşık 20 mL PBS ekleyinle.
      3. Huniyi çıkarın, forsepsleri alevsizce sterilize edin ve filtreyi tabandan kaldırın. Filtreyi bir Petri kabındaki LB agarına, ızgara yukarı bakacak şekilde nazikçe yerleştirin, böylece filtrenin yüzeye hizalandığından emin olun. Plakaları ters çevirin ve 24 saat boyunca 37 ° C'de inkübe edin.
      4. 24 saat sonra plakaları inkübatörden çıkarın ve E. coli kolonilerini sayın. CFU / mL'de filtrelenmiş çözeltinin konsantrasyonunu hesaplamak için bu verileri ve bilinen seyreltme faktörünü ve çözeltinin hacmini kullanın.
    3. Çift agar kaplama yöntemi 35 kullanarak Pseudomonas syringae konakçı Phi6 yaymak.
      1. Phi6 stok süspansiyon 100 mcL ve 100 ml p. syringae geceleme kültürü doğrudan 6 ml Nutrient Broth Yeast (NBY) yumuşak agar (% 0.3) ekleyin. NBY sert agar (% 1.5) ile tabaklar üzerine dökün ve gece boyunca 26 ° C'de inkübe edin. Tecrübe için yeterli inokül oluşturmak için yeterli plakayı hazırlayınTabaka başına yaklaşık 4 mL virüs süspansiyonu verimi tahmini.
      2. Ertesi gün, yumuşak agar tabaka üzerine 5 mL PBS ekleyin. Oda sıcaklığında 4 saat bırakın, bir pipetle alın ve 0.45 μm filtre kullanarak filtreleyin. 4 ° C'de saklayın.
        NOT: Bu çözüm viral inokülasyon görevi görecektir.
    4. Konsantrasyonun 10 7 PFU / mL 35'ten daha büyük olduğunu teyit etmek için plak analizi kullanın. PBS'de viral süspansiyonun seri seyreltmelerini uygulayın, böylece 100 μL plakada sayılabilir plak sayısı üretir.
      1. Uygun bir seyreltilmiş numune ve 100 mL gece konakçı kültürü için 100 μL pipetle doğrudan 6 mL NBY yumuşak agarı içeren bir tüp içine pipetleyin. Yumuşak agarı NBY sert agar üzerine dökün ve 24 saat boyunca 26 ° C'de inkübe edin.
      2. Ertesi gün inkübatörlerden plakaları çıkarın ve plaka başına plak sayısını hesaplayın. Bu verileri ve bilinen seyreltme faFiltrenin konsantrasyonunu PFU / mL cinsinden hesaplamak için çözeltinin hacmi ve hacmi.
  2. İnsan serumu taklit etmeyi amaçlayan üçlü toprak yükünü hazırlayın.
    1. 7.80 mg / mL sığır serum albümini, 10.92 mg / mL tripton ve 2.52 mg / mL sığır musini, istenen hacimdeki toprağın yükünü üretmek için birleştirin. Toprak yükünü karıştırdıktan sonra, sterilize etmek için 0.22 μm'lik bir filtreye süzün. Kullanana kadar 4 ° C'de saklayın. Isı ile sterilize etmeyin, proteinler denatürecektir.
  3. İnokülasyonu toprak yükü olmaksızın koşullar için karıştırmak için% 0.9 NaCl solüsyonu hazırlayın.
  4. Testten hemen önce,% 68 bakteri veya viral süspansiyon ve% 32 toprak yükünden oluşan bir inokül hazırlayın. Örneğin, adımlar 3.1.1.2 veya 3.1.3.2'den 1.02 mL bakteri veya virüs süspansiyonu veya toprak yükünden (adım 3.2.1) veya% 0.9 NaCl solüsyonundan (adım 3.3) 0.48 mL kullanın. Karıştırmak için yavaşça girdap veya vorteks uygulayın.
    NOT: bunun 1.5 mL'ıHer koşulda her bir gönüllü için aşılama yapılacaktır, bu nedenle hazırlanan toplam inokulum hacminin, istenilen sayıda test için yeterli olduğundan emin olun.

4. Deney için Gönüllülerin Hazırlanması

NOT: O günde test edilecek organizma ve zemin yük koşulunu belirleyin. Aynı gönüllüler birden fazla koşulları test etmek için kullanılabilir, ancak her gönüllü 48 saatlik bir süre içinde yalnızca bir tur test yapılmalıdır.

  1. Teste başlamadan önce gönüllülerin sözlü olarak 7 günlük antimikrobik yıkama periyoduna bağlı olduklarını doğruladıklarını ve cildinde herhangi bir bozulma veya anormallik gelişmediğini görsel olarak onaylayarak uygun olduklarını doğrulayın.
  2. Rasgele sayı üreteci kullanarak, her gönüllüyü, testin bu gününde örnek alınması için sağ veya sol elini kullanacak şekilde atayın. El yıkama koşullarının yerine getirileceği bir emir atayın.
    NOT:Örneğin, ABHS # 3 atanabilir ve üçüncü olarak uygulanır.
  3. Kir ve yağ derisini soymak için testin başlangıcında bir kez "temizleme yıkama" yapın, böylece sonraki her test eşdeğer koşullar altında yürütülür.
    1. Temizleme yıkaması yapmak için, deneyin her adımında (aşağıdaki bölüm 5) boş bir inokülasyon (yalnızca LB suyu veya PBS) kullanarak ve el yıkama yapmadan bir numune alın.

5. Deneysel İşlem

  1. Her bir gönüllü cildinin pH'sını test etmek için (varyasyon kontrolü için) palmar yüzey cildi üzerine düz uçlu bir cilt pH probu ve işaretçi ile orta parmaklar arasındaki ağ boşluğu yerleştirin. Elektrotun cilde karşı düz olduğundan emin olun. PH okumasını kaydedin.
  2. Ellerini kaldır.
    1. Gönüllülere iki elini de birlikte elden geçirin. 1.5 mL'lik inokül ile elleri her hurma içine yavaş yavaş 750 mcL'lik bir pipetle hafifçe pipetle sıkın.
    2. Gönüllüler, ellerini mümkün olduğunca az sürtünmeye maruz bırakırken elin tüm yüzeyleri aşı ile kaplanana kadar hafifçe ellerini ovun.
    3. Gönüllülerin inokülasyonun kurumasına izin vermek için ellerini elinde tutup 30 saniye daha vücudundan uzak tutun. İnokülasyon tamamen kurumamış olabilir.
  3. Ellerinizi yıkayın.
    1. Aşağıdaki yıkama adımlarının hepsinde, durulama suyunu büyük bir numune toplama torbasında ellerden alın. 2 saat içinde temas ve işleme sırasında kloru nötralize etmek için torbaya 4.5 mL% 12 sodyum tiyosülfat solüsyonu ekleyin.
      NOT: Organizmada oluşabilecek herhangi bir etkiyi kontrol etmek için tüm örneklere (klor içermese bile) sodyum tiyosülfat eklenmelidir.
    2. İnokülasyondan sonra (bölüm 5.2), elleri bir sonraki yöntemle belirtilen sırada yıkayın.
      1. Kontrol A için, el yıkama adımını gerçekleştirmeyin ve doğrudan adım5.5.
      2. Kontrol B için, eldeki suyu, oda sıcaklığında (yaklaşık 21 ° C) yalnızca yüksek saf suyla yıkayın ve bilinen hızda bir huni ile yıkayın.
        NOT: Burada, 1,5 L / m'lik bir akış hızı ve 500 mL su kullanılmıştır.
      3. Sabunla el yıkama için elleri 10 mL ultra saf suyla ıslatın. Gönüllülerin ellerini sabunla püskürtmelerine ve daha sonra 20 sn daha birlikte ellerini ovmasına izin verin. 1,5 L / m'lik bir akış oranında bir huniden oda sıcaklığında 500 mL ultra saf su dökerek ellerini yıkayın.
      4. Tüm klor çözeltileri ( örn., ABHS, HTH, NaDCC ve NaOCl) için 200 mL klor solüsyonunu 1.5 L / m'lik bir akış oranında bir huniden boşaltın ve gönüllü ellerini iyice ovın.
  4. Elle değiştirilmiş bir eldiven suyu işlemi kullanarak durulayın.
    1. El yıkama işleminden sonra hemen her gönüllü kişinin elini ( yani, testi için seçilen eli (sağa veya sola) yerleştirinAdım 4.2'de) 75 mL'lik eluent ( örn., PBS) içeren bil그ene kadar bir numune çantasına yerleştirin. Çantanın üst kısmını bilek etrafında sıkıca tutun.
      NOT: El yıkama için kullanılan klorları nötralize etmek için yeterli sodyum tiyosülfat içeren örnekleme için bir eluent kullanın. PBS, birçok organizma için uygun olan yaygın olarak kullanılan bir eluenttir.
    2. Gönüllüler parmakların arasına ve tırnakların altına dikkat etmeye özen göstererek 30 saniye süreyle elleriyle çözeltiyi ovun. Eli, eluentte tamamen bilek kısmına kadar çalkalandığından emin olmak için, eli torbanın dışından 30 saniye hafifçe masaj yapın.
    3. Çantayı sızdırmaz hale getirin ve 6 numaralı bölümde tarif edilen uygun tahlile göre 2 saat içinde işleyin.
  5. Dezenfekte.
    1. İşlemi her elle yıkama yöntemiyle tekrarlamadan önce, gönüllülerin ellerini sabun ve ılık su ile bir lavaboda iyice yıkamalarını sağlayın. Kanalizasyona püskürterekRs 'ellerini her iki yüzü kaplayana kadar% 70 etanolle elle tutun. Kurumalarını bekleyin.
    2. Her el yıkama koşulu için 5. adımdaki tüm adımları, sadece 4.2 adımında rasgele seçilen eli kullanarak tekrarlayın ( Şekil 1 ).

6. Nicelleştirme

  1. Seçilen organizma için uygun tahliller yapın ( örn. Bakteriler için zar filtrasyonu veya virüsler için plak analizi, sırasıyla bölüm 3.1.2 ve 3.1.4'te açıklanmıştır).
  2. Plakaları saydıktan sonra, analizler için her test için tahmini CFU / mL veya PFU / mL'yi kaydedin (bölüm 3.1.2 ve 3.1.4).

7. Analiz

  1. Adım 6.2'deki sonuçları kullanarak, organizmalarda, her bir organizma ve zemin yük durumu için ve her bir denek ve el yıkama yöntemi için günlük azaltma değerini hesaplayın.
    1. El yıkama etkinliği için her birinde bakteri / virüs konsantrasyonunu karşılaştırın El yıkama örneği A'ya kontrol (el yıkama yok). Durulama suyu kalıcılığı için, durulama suyu numunesini kontrol B'ye kıyasla (sadece su ile yıkayın). Aşağıdaki standart formülü kullanın:
      Kütük Giderme (el yıkama ) = figure-protocol-18008figure-protocol-18072
      Kütük Azaltma (durulama suyu ) = figure-protocol-18185figure-protocol-18249
      NOT: Kütük azaltma log 10 (el yıkama olmadan) olarak da ifade edilebilir - log 10 (el yıkama ile)
  2. Elde yıkama yöntemleri arasındaki hesaplanan günlük azaltma değerlerinde önemli farklılıkları değerlendirmek için tek yönlü tekrarlanan ölçüm varyans analizi (ANOVA) ve anlamlı farklılıkları belirlemek için önemli modeller için post-hoc Tukey's HSD testi (p <0.05)Ef "> 36.
    1. ANOVA'yı çalıştırmadan önce, küresellik için her veri kümesini değerlendirin ( örneğin, Bartlett'in testini kullanarak). Test sferiklığın ihlal edildiğini gösterdiğinde bir düzeltme uygulayın ( örn . Sera-Geisser düzeltmesi) 37 .

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Sonuçlar

Burada, protokol ( Şekil 1 ) hem E. coli hem de Phi6 kullanılarak test edilen 18 gönüllü ile tamamlandı. Elde yıkama sonuçları arasında hem toprak yüklü hem de topraksız E. coli ile Phi6 toprak yükü arasında anlamlı fark bulundu ( Şekil 2 ve Şekil 3 ). Toprak yükü olmayan E. coli için, HTH, NaDCC ve stabilize NaOCl ile yapılan el yıkama işlemi, sad...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

The method described here provides an approach for testing handwashing efficacy in a controlled laboratory setting. This method highlights the use of human volunteers and surrogate, non-infectious organisms. Using the method, it was possible to demonstrate differences in: 1) the efficacy of handwashing methods and 2) organism persistence in rinse water. The purpose of presenting this protocol is to provide a general framework that can be adapted to test a wide range of surrogate organisms and handwashing methods relevant...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Açıklamalar

Yazarlar, rekabet eden mali çıkarlarının olmadığını beyan ettiler.

Teşekkürler

Bu çalışma, Birleşik Devletler Uluslararası Kalkınma Ajansı, Dış Afet Yardım Ofisi (AID-OFDA-A-15-00026) tarafından desteklenmiştir. Marlene Wolfe, Ulusal Bilim Vakfı tarafından desteklendi (hibe 0966093).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
Soap barDoveWhite Beauty Bar soap
Alcohol-based hand sanitizerPurellAdvanced Instant Hand Sanitizer with 70% Ethyl Alcohol
HTH PowderAcros Organics300340010
NaDCC PowderMedentechKlorsept granules
NaOCl SolutionAcros Organics419550010
ElectrochlorinatorAquaChlor
Iodometric titratorHach1690001
Bovine serum albuminMP BiomedicalsNC0117242
TryptoneFisherBP1421-100
Bovine MucinEMD Milipore49-964-3500MG
0.22 µm FilterEMD MiliporeGVWP04700
NaClFisherBP358-1
Skin pH probeHanna InstrumentsH199181
Large Whirlpak Sample BagNascoB01447WA
Small Whirlpak Sample BagNascoB01323WA
Funnel bottleThermo Scientific3120850001You may drill an appropriately sized hole in the lid of a bottle to form a funnel that will dispense water at the appropriate flow rate
EthanolThermoScientific615090010Mix with water to produce 70% ethanol
Spray bottleQorpakPLC06934
E. coliATCC25922
LB BrothFisher BioReagentsBP1426-2
LB AgarFisher BioReagentsBP1425-500
Sterile loopGlobe Scientific22-170-204
Phi6HER102
Nutrient brothBD DifcoBD 247110
GeneQuant 100 SpectrophotometerGeneral Electric28-9182-04
Sodium thiosulfateFisher ChemicalS445-3
Membrane filter (47 mm, 0.45 µm)EMD MilliporeHAWP04700
m-ColiBlue24 broth mediaEMD MilliporeM00PMCB24
Petri dish with pad (47 mm)Fisherbrand09-720-500
Vacuum ManifoldThermo Scientific/Nalgene09-752-5
Filter funnelsThermo Scientific/Nalgene09-747
Pseudomonas syringaeHER1102
Phosphate Buffered SalineThermo Scientific10010031Solution may also be mixed from source compounds according to any basic recipe

Referanslar

  1. Kampf, G., Kramer, A. Epidemiologic Background of Hand Hygiene and Evaluation of the Most Important Agents for Scrubs and Rubs. Clin Microbiol Rev. 17 (4), 863-893 (2004).
  2. Miller, T., Patrick, D., Ormrod, D. Hand decontamination: influence of common variables on hand-washing efficiency. Healthc Infect. 16 (1), 18(2013).
  3. Jensen, D. A., Danyluk, M. D., Harris, L. J., Schaffner, D. W. Quantifying the effect of hand wash duration, soap use, ground beef debris, and drying methods on the removal of Enterobacter aerogenes on hands. J Food Prot. 78 (4), 685-690 (2015).
  4. Girou, E., Loyeau, S., Legrand, P., Oppein, F., Brun-Buisson, C. Efficacy of handrubbing with alcohol based solution versus standard handwashing with antiseptic soap: randomised clinical trial. BMJ. 325 (7360), 362(2002).
  5. Kac, G., Podglajen, I., Gueneret, M., Vaupré, S., Bissery, A., Meyer, G. Microbiological evaluation of two hand hygiene procedures achieved by healthcare workers during routine patient care: a randomized study. J Hosp Infect. 60 (1), 32-39 (2005).
  6. Lages, S. L. S., Ramakrishnan, M. A., Goyal, S. M. In-vivo efficacy of hand sanitisers against feline calicivirus: a surrogate for norovirus. J Hosp Infect. 68 (2), 159-163 (2008).
  7. Holton, R. H., Huber, M. A., Terezhalmy, G. T. Antimicrobial efficacy of soap and water hand washing versus an alcohol-based hand cleanser. Tex Dent J. 126 (12), Retrieved from: http://www.tda.org/Publications/Texas-Dental-Journal 1175-1180 (2009).
  8. Salmon, S., Truong, A. T., Nguyen, V. H., Pittet, D., McLaws, M. -L. Health care workers' hand contamination levels and antibacterial efficacy of different hand hygiene methods used in a Vietnamese hospital. Am J Infect Control. 42 (2), 178-181 (2014).
  9. Steinmann, J., Nehrkorn, R., Meyer, A., Becker, K. Two in-vivo protocols for testing virucidal efficacy of handwashing and hand disinfection. Int J Hyg Environ Health. 196 (5), Retrieved from: https://www.journals.elsevier.com/international-journal-of-hygiene-and-environmental-health 425-436 (1995).
  10. Weber, D. J., Sickbert-Bennett, E., Gergen, M. F., Rutala, W. A. Efficacy of selected hand hygiene agents used to remove Bacillus atrophaeus (a surrogate of Bacillus anthracis) from contaminated hands. JAMA. 289 (10), 1274-1277 (2003).
  11. Grayson, M. L., Melvani, S., et al. Efficacy of Soap and Water and Alcohol-Based Hand-Rub Preparations against Live H1N1 Influenza Virus on the Hands of Human Volunteers. Clin Infect Dis. 48 (3), 285-291 (2009).
  12. Oughton, M. T., Loo, V. G., Dendukuri, N., Fenn, S., Libman, M. D. Hand hygiene with soap and water is superior to alcohol rub and antiseptic wipes for removal of Clostridium difficile. Infect Control Hosp Epidemiol. 30 (10), 939-944 (2009).
  13. Liu, P., Yuen, Y., Hsiao, H. -M., Jaykus, L. -A., Moe, C. Effectiveness of liquid soap and hand sanitizer against Norwalk virus on contaminated hands. Appl Environ Micro. 76 (2), 394-399 (2010).
  14. Savolainen-Kopra, C., Korpela, T., et al. Single treatment with ethanol hand rub is ineffective against human rhinovirus--hand washing with soap and water removes the virus efficiently. J Med Virol. 84 (3), 543-547 (2012).
  15. Tuladhar, E., Hazeleger, W. C., Koopmans, M., Zwietering, M. H., Duizer, E., Beumer, R. R. Reducing viral contamination from finger pads: handwashing is more effective than alcohol-based hand disinfectants. J Hosp Infect. 90 (3), 226-234 (2015).
  16. Steinmann, J., Paulmann, D., Becker, B., Bischoff, B., Steinmann, E., Steinmann, J. Comparison of virucidal activity of alcohol-based hand sanitizers versus antimicrobial hand soaps in vitro and in vivo. J Hosp Infect. 82 (4), 277-280 (2012).
  17. de Aceituno, A. F., Bartz, F. E., et al. Ability of Hand Hygiene Interventions Using Alcohol-Based Hand Sanitizers and Soap To Reduce Microbial Load on Farmworker Hands Soiled during Harvest. J Food Protect. 78 (11), 2024-2032 (2015).
  18. Sterk, E. Médecins Sans Frontières - Filovirus Haemorrhagic Fever Guideline. , Available from: http://jid.oxfordjournals.org/content/204/suppl_3/S791.full (2008).
  19. World Health Organization. WHO Report. Ebola Virus Disease ( EVD ) Key questions and answers concerning water, sanitation and hygiene. , Available from: http://www.who.int/water_sanitation_health/WASH_and_Ebola.pdf 1-5 (2014).
  20. World Health Organization. Guidelines on Hand Hygiene in Health Care. First Global Patient Safety Challenge, Clean Care is Safer Care. , Available from: http://whqlibdoc.who.int/publications/2009/9789241597906_eng.pdf (2009).
  21. Boyce, J. M., Pittet, D. Guideline for Hand Hygiene in Health-Care Settings Recommendations of the Healthcare Infection Control Practices Advisory Committee and the HICPAC/SHEA/APIC/IDSA Hand Hygiene Task Force. Infect Control Hosp Epidemiol. 23 (12 Suppl), Society for Healthcare Epidemiology of America. S3-S40 (2002).
  22. Emmanuel, J., Ndoye, B. UNDP Medical Waste Experts Assessment and Recommendations Regarding Management of Ebola-Contaminated Waste. , United Nations Development Programme. Available from: https://noharm-global.org/sites/default/files/documents-files/3127/Report%20to%20WHO%20WASH%20and%20Geneva%20on%20Ebola%20final.pdf (2015).
  23. Hopman, J., Kubilay, Z., Allen, T., Edrees, H., Pittet, D., Allegranzi, B. Efficacy of chlorine solutions used for hand hygiene and gloves disinfection in Ebola settings: a systematic review. Antimicrob Resist Infect Control. 4 (1), 1(2015).
  24. Lowbury, E. J. L., Lilly, H. A., Bull, J. P. Disinfection of hands: removal of transient organisms. BMJ. 2 (5403), 230-233 (1964).
  25. Edmonds, S. L., Zapka, C., et al. Effectiveness of Hand Hygiene for Removal of Clostridium difficile Spores from Hands. Infect Control Hosp Epidemiol. 34 (3), 302-305 (2013).
  26. Rotter, M. L. 150 years of hand disinfection-Semmelweis' heritage. Hyg Med. (22), 332-339 (1997).
  27. Hitomi, S., Baba, S., Yano, H., Morisawa, Y., Kimura, S. Antimicrobial effects of electrolytic products of sodium chloride--comparative evaluation with sodium hypochlorite solution and efficacy in handwashing. Kansenshōgaku Zasshi. 72 (11), 1176-1181 (1998).
  28. ASTM International. Standard E1174-13. Standard Test Method for Evaluation of the Effectiveness of Health Care Personnel Handwash Formulations. , Available from: https://www.astm.org/ (2013).
  29. Casanova, L. M., Weaver, S. R. Evaluation of eluents for the recovery of an enveloped virus from hands by whole-hand sampling. J Appl Microbiol. 118 (5), 1210-1216 (2015).
  30. Sinclair, R. G., Rose, J. B., Hashsham, S. A., Gerba, C. P., Haas, C. N. Criteria for Selection of Surrogates Used To Study the Fate and Control of Pathogens in the Environment. Appl Environ Microbiol. 78 (6), 1969-1977 (2012).
  31. Held, E., Skoet, R., Johansen, J. D., Agner, T. The hand eczema severity index (HECSI): A scoring system for clinical assessment of hand eczema. A study of inter- and intraobserver reliability. Br J Dermatol. 152 (2), 302-307 (2005).
  32. Chlorine Total, Iodometric Method Using Sodium Thiosulfate, Method 8209 Digital Titrator. , Available from: http://www.hach.com/asset-get.download-en.jsa?id=7639983937 (2016).
  33. GeneQuant 100 User Manual. , Available from: http://biochromspectros.com/media/wysiwyg/support_page/support-genequant-100/Genequant-100-UM.pdf (2016).
  34. United States Environmental Protection Agency. Method 1604: Total Coliforms and Escherichia coli in Water by Membrane Filtration Using a Simultaneous Detection Technique (MI Medium). , Available from: https://www.epa.gov/sites/production/files/2015-08/documents/method_1604_2002.pdf (2002).
  35. Adams, M. H., Anderson, E. S. Bacteriophages. , Interscience Publishers. New York. (1959).
  36. Kao, L. S., Green, C. E. Analysis of Variance: Is There a Difference in Means and What Does It Mean? The Journal of surgical research. 144 (1), 158-170 (2008).
  37. Schutz, R. W., Gessaroli, M. E. The Analysis of Repeated Measures Designs Involving Multiple Dependent Variables. Research Quarterly for Exercise and Sport. 58 (2), 132-149 (1987).
  38. Woolwine, J. D., Gerberding, J. L. Effect of testing method on apparent activities of antiviral disinfectants and antiseptics. Antimicrob Agents Chemother. 39 (4), 921-923 (1995).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

mm nolojiSay 124Kloretkinlikel y kamael temizleyicibula c hastal ksabun ve suvekiller

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır