Fareler üzerinde deneysel üreme araştırmalarda Ultrasonografi

Özet

Bu el yazması üreme ve jinekolojik soruşturma için deneysel modelleri tasarlamak için dişi fareler üzerinde yapılan ultrason, yardımcı programı açıklanır. Ultrasonografik değerlendirme gerçekleştirmek nasıl adım adım bir açıklama gösterilir.

Özet

Yardımlı üreme teknolojisi gelişimi ve insanlar üzerinde araştırma etik sınırlamalar ile sıçan hayvan modelleri üreme tıpta yaygın olarak kullanılmıştır. Geçmişte, üreme sistemi geliştirme Rodents çalışmanın tek seferlik histolojik çıkarılan doku muayenede dayalı olmuştur. Son zamanlarda, yüksek çözünürlüklü transabdominal ultrason gelişmesiyle birlikte, yüksek kaliteli ultrason şimdi fareler, üreme sistemi eğitim için yeni bir yöntem sağlayan üreme organlarının değerlendirmek için gerçekleştirilebilir. Görüntüleri yüksek çözünürlüklü bir Ultrasonografik sistemi kullanılarak elde. Jinekolojik Ultrasonografi 28 sekiz haftalık gebe olmayan fareler ve 5 hamile Sprague-Dawley fareler üzerinde gerçekleştirildi. Biz nasıl üreme sistemi organlarının tanımak tarif ve ilişkili yapıları farklı aşamaları estrus tipik görünümlerinde döngüsü. Akış Doppler uterin arter kan akımını ölçmek ve uterin kan akışı desen değişiklikler gebelik farklı aşamalarında değerlendirmek için kullanılan renk. Ultrason keşif iç üreme organları değişimler değerlendirmek için yararlı bir yöntem olduğunu göstermiştir. Kullanımı tıbbi veya cerrahi prosedürleri dahil olmak üzere ek deneyler olasılığını yükseltir ve hayvanlar ödün vermeden iç organlarına Ultrasonografik değişiklikleri izleme olanağı sağlar.

Giriş

Sıçan hayvan modelleri embriyo ve yumurtalık nakli^1,2' de dahil olmak üzere üreme tıpta yaygın olarak kullanılmaktadır. Ancak, geçmişte, üreme sistemi geliştirme Rodents çalışmanın tek seferlik histolojik çıkarılan doku muayenede dayalı ve gün-gün üreme organı değişiklikleri boyuna incelenmesi fareler³' te mümkün olmamıştır. Ultrason yaygın insanlarda yardımlı üreme teknolojisi 30 yıldır kullanılmıştır, ancak bu değerli teknoloji sadece fareler için son zamanlarda uygulanmış.

Hedefimiz Sprague-Dawley Rat için üreme ve kadın hastalıkları araştırma deneysel modelleri tasarlamak için ve çünkü yordamı göstermek için üreme organların değerlendirilmesinde Ultrasonografik bir yaklaşım kurmak oldu bizim bilgi için Bu yordamı ile ilgili hiçbir geçerli görüntülenmeyecektir yayın vardır. Biz kadın sıçan üreme sistemi ve mevcut Ultrasonografik bulgular Ultrasonografik muayene anatomi ve uterin arter kan akımı yüksek çözünürlüklü ultrason kullanarak açıklayınız. Rahim kalınlığı, yumurtalık morfoloji ve uterin kan akışında önemli farklılıkları değerlendirmek için estrus döngüsünün farklı aşamalarında endometrium, yumurtalıklar ve uterin arter kan akımı gebe olmayan hayvanlarda özellikleri takip kadınlara benzer estrus döngüsünün farklı aşamalarında. Biz 70 MHz frekans ve 30 µm. bir çözünürlük seviyesi ile yüksek kaliteli ultrason cihazları used Direnç gebe rats uterin kan akımı değişiklikleri değerlendirmek için diğer hedefimiz oldu. Hayvanlar ödün vermeden günlük değişimleri üreme organlarında çalışma için bu tekniği sağlar.

Ultrason fareler üzerinde kullanan birkaç teknik zorlukları vardır. Bu zorluklar içerir: fare endometrium çok bir insan kadın⁴daha incedir. Fareler yumurtalık Imaging zorluk daha kalın deri ve karın duvarı kas Sıçanlarda ultrason⁵zayıflama tamamlamak sonuçlanan atfedilen ve uterin arter gebe olmayan bulmak çok daha zor olduğunu fareler. Biz yordamı ile birçok teknik sorunlar çözüldü ve kalır bu sorunlar için biz bunları en aza indirmek nasıl göstereceğim.

Sıçan hayvan kurban gerek olmadan üreme organlarında Ultrasonografik değişiklikler başarılı izlenmesi diğer cerrahi ve üreme tıbbı gelecekteki hayvan modelleri oluşturma olasılığı açılır.

Protokol

Bu çalışma önerileri Kılavuzu'nda bakım ve kullanım laboratuvar hayvanları için Ulusal Sağlık enstitüleri ve uygun olarak varış ile sıkı uygun olarak gerçekleştirilmiştir (hayvan araştırma: Raporlama In Vivo deneyler) yönergeleri. Protokol hayvan deney yönergesi 2010/63/AB ile yetki numarası A13170404 ile (Anexo 1) uymak için lisans aldı. Tüm deneylerin hayvanlar (RD 53/2013, AB direktifi 63/2010) etik bakımı için ulusal yönergeleri izleyerek bir Avrupa Birliği sertifikalı laboratuvar yapıldı. Protokol Murcia Üniversitesi hayvan deneyleri Etik Komitesi tarafından kabul edildi.

1. hayvan hazırlık

Not: Tüm deneylerin Murcia University of hayvan deneme bölümü ve kadın doğum ve jinekoloji bölümü Murcia Üniversitesi tarafından desteklenen edildi.

1. Tüm deneyler 200-250 g ağırlığındaki 8 haftalık Sprague-Dawley Rat (28 dişi rats) kullanın.
   Not: Burada, ayrıca 5 gebe rats kullanılır.
2. Gebe rats elde etmek için kafes sekiz-hafta-yaşlı kadın ve verimli erkek rats ve dostum 17:00 -23:00 h. vajinal bir fiş tanımlaması ertesi sabah üzerinde başarı. çiftleşme olarak yorumlanır 1. gün gebelik, onlar şeklindeki sonra ertesi gün düşünün.
3. Deneyler gebeliğin 9, 15 ve 18 gün devam.
4. Ev fareleri gruplar halinde iki ile yiyecek ve su ücretsiz ve düzenli 12 h açık/koyu döngüleri korumak.
5. İki hafta en az tesis koşulları için acclimating sonra günlük sabah vajinal Sitoloji estrus frekans ve düzenlilik için değerlendirmek için kullanın.
   Not: Normal 4-5 gün estrus faz farelerle yirmi sekiz çalışma eklenmesi için seçildi.

2. görüntüleme için fareler hazırlanması

Not: Yüksek çözünürlüklü transabdominal Ultrasonografi kullanarak görüntüleri elde edildi. Estrous döngüsü aşamaları vajinal smear Sitoloji tarafından belirlenmiştir.

1. Görüntüleme çalışma önce Barajı % 2-3 isoflurane gaz ile indüksiyon odasında anestezi.
2. Hayvan kaldırmak ve hemen burun içinde anestezi sisteme bağlı bir burun konisi yerleştirin ve Ultrasonografik muayene sırasında % 1.5-2 isoflurane hayvan korumak.
3. Kürk makasları ve depilatory krem ile Kaudal karın için nodern kenar boşluğundan kaldırın.
4. İmzalat fare fare güvenli ve optimum konfor ve fizyolojik parametreler bakımından görüntüleme oturum süresi için emin olmak için ısıtmalı bir tabloda sırtüstü pozisyonda yerleştirin. Tüm fizyolojik parametreler görüntüleri ile entegre edilmiş ve yakalanan verileri ultrason uygulaması aracılığıyla gerçek zamanlı.
5. Yavaşça bir rektal sonda (yağlama sonra) vücut ısısı (37,5 ° C ± 0,5 ° C) izlemek için ekleyin.
6. Dönüştürücü (30 Hz) sabit bir tutucuya yerleştirin ve yatay eksen (ön arka ve yan yana) ve dikey eksen hareket el ile çalıştırılan bir joystick kullanarak veya el ile.
7. İşlem sırasında kurutma önlemek için fareyi gözünde petrol bazlı oftalmik merhem uygulamak.

3. sınav prosedürü

Not: Anatomy of rats´ üreme organları: vajina idrar kesesi dorsal yatıyor ve böbrekler doğru genişletmek iki rahim korna böler. Yumurtalık oviducts (şekil 1) ile rahim boynuzları bağlanır. Rahim böbrekler için posterior bölgede yer alır.

1. Rahim tanımlaması
   1. Mesane yer iþareti olarak serviks bulmak için kullanarak, sol ve sağ rahim boynuzları dalı bulmak için serviks izleyin.
   2. İki boyutlu görüntüleme/video için "B-mode" seçerek geçin. Sagittal orta hat görüntü '-isthmic bölgesinde rahim her boynuzun antero-posterior çapını ölçün. Ultrasonografik sistem yazılımı kullanarak ölçüleri tespit.
   3. Echogenic sınırından rahim kalınlığı echogenic sınırına sagittal orta hat image "B-Mode" rahim boşluğuna genelinde ölçmek.
   4. Renkli Doppler moduna "Renkli Doppler" seçerek değiştirin. Renkli Doppler endometrium kan kaynağı tanımlamak ve endometrium kan akışının ölçmek için kullanın. Renkli Doppler modunda aşağıdaki parametreleri seçin: yüksek geçiren filtre ayarlamak 4 Hz değerinde, darbe tekrarlama frekans kümesi arasında 4 ve 48 kHz ve Pulse Doppler kapısı 0,2-0,5 mm arasında ayarla.
2. Uterin arter kan akımı tanımlaması
   1. Doppler dalga biçimleri uterin arter iliyak arter her iki tarafında yakın rahim rahim ağzı kavşak lateral-alt kenar boşluğuna yakın elde edilir.
   2. Doppler modunda aşağıdaki parametreleri kullanın: yüksek geçiren filtre ayarlamak 6 Hz değerinde, darbe tekrarlama frekans kümesi arasında 4 ve 48 kHz ve Pulse Doppler kapısı 0,2-0,5 mm arasında ayarla.
   3. Kan akışı ve Doppler açı en aza indirmek için Doppler ışın hizalamak için dikkat ediniz. Doppler kiriş ve gemi arasındaki açı kaydedin. 60 ° açı alınan değerler yanlış ve kaçınılması⁶olmalıdır.
   4. Pik sistolik hız (PSV) ve end-diastolik hız (EDV) üç ardışık döngüleri üzerinden ölçmek. Sonra sistolik diyastolik (S/D) oranı (PSV/EDV) ve direnç dizine (RI) hesaplamak ([PSV-EDV] / PSV) rahim her boynuzun değerleridir.
   5. 5 gebe rats uterin arter kan akışını ölçmek 9^th, 15^inci, 18^inci gün gebelik sırasında.
3. Yumurtalık ve yumurtalık arter kan akımı
   Not: Dişi sıçan yumurtalıklar bulunur hayvan her iki tarafında böbrekler için lateral ve yağ yastıkları rahim boynuz (şekil 1) sonunda bulunan yer alır.
   1. Yumurtalık görüntüye, transvers düzlemde bir sonda ile başlayın ve hayvan biraz aşağıda kaburga yanal yönü üzerinde yerleştirin. Böbrek ve yağ yastığı yumurtalık için karşılaştırıldığında bir hyperechoic görünüme sahip.
   2. Yumurtalık ve köklerinin dış kenarlığını ölçmek. Rakamlar her görüntü için ölçekte 0,1 mm artışlarla milimetre.
      Not: Renkli Doppler ve güç Doppler modları görüntüleme yumurtalık yoğunluğu ve yön akış tanımlaması ile yardımcı olur.

4. tasarım çalışma

1. Vajinal smear Sitoloji tarafından estrus döngüsü kontrol edin.
2. Bütün fareler iki gruplar halinde bölün. Grup 1 veya önceden verimli (veya periovulatory), proestrus ve estrus döngüsü aşamada idi fareler içerir. Grup 2 veya sonrası verimli, erken diestrus ve geç diestrus döngüsü aşamada idi fareler içerir.
3. İzlemek ve rahim her boynuzun-isthmic bölgesi grupları 1 ve 2 antero-posterior çapını karşılaştırın.
4. İzlemek ve rahim kalınlığı ve endometrium grupları 1 ve 2 özellikleri karşılaştırın.
5. İzlemek ve boyutu (maksimum çapı) ve yumurtalık özelliklerini karşılaştırır ve herhangi bir periovulatory köklerinin her iki yumurtalık grupları 1 ve 2 yerelleştirilmesine.
6. Sınıf başkanı ve grupları 1 ve 2 uterin arter kan akışında karşılaştırır.
7. İzlemek ve gebe rats uterin arter kan akışını gebelik farklı aşamalarında karşılaştırın (gün 9, 15 ve 18 gebelik).
8. Gerçekleştirmek istatistiksel analizi SPSS kullanımı. Verileri ortalama ± standart sapma (SD) veya medyan olarak interquartile aralıkları ile mevcut. Öğrenci t-Testi farklı gruplar arasında kullanarak sonuçları çözümleyebilirsiniz. P-değeri az 0,05 istatistiksel olarak anlamlı bir fark olarak kabul edildi.

Sonuçlar

Rahim boynuz (Tablo 1) iki taraf arasında antero-posterior rahim boru çapları veya endometrium kalınlığı önemli hiçbir farkı vardı. Grup 2 ile karşılaştırıldığında, ortalama rahim kalınlığı 1 grubunda kalın ama Hayır önemli farklar yapıldı (P > 0,05) (şekil 3) iki grup arasında bulundu. Yine de, endometrium Morfoloji (Şekil 2) değişiklikleri ile ilişkili estrus döngüsü yakın (8 dışarı-in 28 fareler) sıv?...

Tartışmalar

Yordam değişiklikler ve bu çalışmada amacımız tüm ultrason, kullanarak fareler içinde estrus aşamalarını döngüsü tanımlama rağmen gerektiren sorun giderme nedeniyle biz herhangi bir önemli farklar bulamadık. Biz estrus döngüsü yalnızca Sıçanlarda kadınlar döngüsünde farklı olarak bir kaç gün sürer çünkü bu zorluklar olabileceğini öngörmekteyiz. Eminiz tüm ölçümler farklılıklarını belirlemek için tam olarak doğru zamanda yapılmıştır. Bu nedenle, biz döngüsü aşamalar...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Vevo3100 high-resolution in vivo micro-imaging system*	Visual Sonics, inc.		www.visualsonics.com/products
Vevo integrated rail system including physiological monitoring unit.	Visual Sonics, inc.		www.visualsonics.com/products
MX400 Transducter	Visual Sonics, inc.		www.visualsonics.com/products
Vevo Lab Software	Visual Sonics, inc.		www.visualsonics.com/products
HSD: Sprague Dawley SD	Envigo, inc.		Rat strain
Lubricating Gel	General Supply
CIBERTEC CA-EAC20 Anesthesia Trolley System	Cibertec S.A		Anesthesia Machine
Ecogel 100 ultrasound gel	Eco-Med Pharmaceuticals Inc.
Hair removal lotion (Nair)	General Supply
Isoflurane	Esteve Veterinaria		Inhalatory anesthesia
* Required software is Vevo software including B-Mode application, pulse wave Doppler application, and vascular strain analysis tools package.