Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.
Method Article
Bu iletişim kuralı peptid ve amino asit çözümler kendi kendine montaj bileşimlerini kullanarak bir sulu ortamda hidrofobik bileşikler eriterek klinik olarak uygulanabilir Aracı açıklanır. Bizim yöntem klinik ayarları çözünürlük ve teslim yöntemleri güvenli, verimli araçlarının eksikliği hidrofobik therapeutics büyük bir sınırlama giderir.
Kendi kendine montaj peptidler (SAP) hidrofobik tedavi klinik uygulamalar için teslim etmek için umut verici araçlar vardır; onların amfipatik özellikleri onları hidrofobik bileşikler insan vücudunun sulu ortamdaki çözülmeye olanak verir. Ancak, zayıf kan uyumluluk (örneğin, düşük Osmolarite), kendi kendine montaj peptid çözüm var onların klinik uygulama intravenöz idareleri aracılığıyla engelleyen. Biz son zamanlarda amino asit çözümler (SAP-AA) uyuşturucu çözünürlük geliştirmek ve klinik kullanımları için gereksinimleri ulaşmak için formülasyon Osmolarite artırmak için SAP birleştiren hidrofobik ilaç dağıtım için Genelleştirilmiş bir platform geliştirdik. Bu formülasyon strateji iyice üç yapısal olarak farklı hidrofobik bileşikleri-PP2, rottlerin ve curcumin-çok yönlü göstermek için bağlamında test edildi. Ayrıca, formülasyonu bileşenleri 6 farklı SAP, 20 doğal olarak varolan amino asit düşük ve yüksek konsantrasyonlarda ve iki farklı ortak çözücüler Dimetil sülfoksit (DMSO) ve etanol analiz ederek değiştirmenin etkileri incelenmiştir. Bileşenleri belirli hidrofobik uyuşturucu ve formüle engelleyici, PP2, tedavi fonksiyonu için en iyi duruma getirme içinde etkili olduğu kanıtlanmıştır bizim strateji içinde in vitro ve in vivogözlendi. Bu el yazması hidrofobik bileşikler ve çözünürlük daha işlevsel çalışmalarda bu formülasyonları potansiyel kullanımı yolunda ilk adım olarak analizi için SAP-AA bileşimlerini kullanarak bizim Genelleştirilmiş formülasyonu yöntemi özetliyor. Biz temsilcisi çözünürlük sonuçlar için hidrofobik bileşik, curcumin formülasyonu içerir ve nasıl metodolojimiz gelecekteki biyolojik araştırmalar ve hastalık modelleri için bir platform olarak hizmet vermektedir tartışıyorlar.
SAP bir rejeneratif tıp1,2,3,43D iskele olarak kapsamlı bir şekilde inceledik Biyomalzeme sınıfıdır. Son zamanlarda Ancak, onlar kendi benzersiz biyolojik özellikler5,6,7,8nedeniyle tedavi teslim etmek için Araçlar istismar. SAP doğal olarak böylece ilaç saklama ve koruma aracı sağlayan istikrarlı nanoyapıların9içine, toplanın. SAP vardır amfipatik hidrofobik ve hidrofilik amino asit tekrarlar, sürüş belirli bir desen ile oluşan, kendi kendinden montajlı9,10 ve onları hidrofobik ve hidrofilik arasında bir aracı olarak hizmet için izin ortamlar. Sonuç olarak, hidrofobik ilaçların-klinik teslimat için hangi olması son derece düşük bioavailability ve emilimi vücut sulu ortamlarda11,12 -çözünürlük eksikliği nedeniyle SAP olarak teslim umut verici araç. Ayrıca, onların sıra desen aynı zamanda SAP olabilir mantıklı bir şekilde tasarlanmış ve verilen herhangi bir ilaç ile uyumluluğu en üst düzeye çıkarmak veya (fonksiyonel gruplarına göreYani,) bileşik ve daha fazla çözünürlük yardımcı olmak için tasarlanmış olduğunu ima.
SAP etkili ilaç teslim araçlar birçok vitro ve in vivo ayarları13,14,15,16olarak uygulandı. Onlar da büyük güvenlik ve Biyouyumluluk göstermiştir. Ancak, nedeniyle düşük Osmolarite SAP-uyuşturucu hazırlıkları onlar olduğu gibi klinik ayarları13intravenöz enjeksiyonlar için kullanılamaz. Bu kısıtlama göz önüne alındığında son zamanlarda toksik co solvent kullanımını azaltmak ve formülasyon Osmolarite artırmak için amino asit çözümlerle SAP birleştiren bir strateji geliştirdik ve bu nedenle, klinik önemi. Biz yapı taşları olan SAP, oldukları gibi amino asitler kullanmayı tercih zaten klinik olarak kabul ve SAP miktarını azaltarak17,18gerekli ise SAP ile birlikte, onlar hidrofobik uyuşturucu çözünürlük artar.
Biz SAP-AA kombinasyonları hidrofobik uyuşturucu çözünürlük ve sonraki teslim için Genelleştirilmiş bir platform olarak Multi-step tarama ardışık düzen oluşturma ve Src inhibitörü, PP2, bir modeli hidrofobik bileşik için uygulama tarafından incelenip. Bu süreçte biz formülasyonu bileşenleri değiştirme-sonuçta 6 farklı SAP, tüm 20 amino asit (düşük ve yüksek; düşük konsantrasyonlarda mevcut klinik uygulamalarda ve yüksek üzerinde göre 2 farklı konsantrasyonlarda test etkisi incelenmiştir konsantrasyonları vardı 2 x, 3 x veya 5 x klinik konsantrasyonu bağlı olarak maksimum çözünürlük su her amino asit) ve 2 farklı ortak çözücüler – ve daha ayrıntılı bir çözümleme için PP2 çözündürüldükten seçili kombinasyonları. Bu uyuşturucu formülasyonu ilaç teslim araca hücre kültürü, hem de boğaza ve şarapla yönetimleri kullanarak vivo içinde modelleri olarak etkili olduğu ortaya çıktı. Aynı şekilde, bizim iş değindi ve çok yönlülük çözücü çoklu birleşimlerde SAP-AA, yapısal olarak farklı hidrofobik bileşikler sulu ortamlarda; Özellikle, uyuşturucu rottlerin ve curcumin18. Bu el yazması SAP-AA formülasyonu yöntemi ve analizini curcumin çözünürlük bizim tarama boru hattı birincil adımda bir örneği olarak önerilmektedir. Bu iletişim kuralı verilen herhangi bir hidrofobik bileşiği geçiyoruz en uygun SAP-AA kombinasyonları için ekran için basit, tekrarlanabilir bir yol sunar.
1. Amino asit çözümler hazırlık
2. SAP-AA çözümleri hazırlanması
3. Uyuşturucu DMSO veya uyuşturucu-etanol hisse senedi çözümleri hazırlanması
4. İlaç formülasyonları hazırlanması
5. Çözünürlük test
Hidrofobik ilacı curcumin, biz doğal amino asitler bir kanıtı-of-ilke olarak yalnızca bir SAP, EAK16-II, ile birlikte düşük konsantrasyonlarda mevcut tüm 20 kullanarak formüller üretti. Ayrıca formülasyonları DMSO ve etanol ortak çözücüler kullanarak test ettik. Toplamda, bu 40 curcumin formülasyonları, her farklı bileşenleri içeren üretti. PP2, Src inhibitörü kullanarak bizim önceki çalışmalarda biz daha fazla seçenek için SAP (Toplam 6) ve amino asit kons...
Formülasyon yordamda, çeşitli kritik adımlar ve gidermede dikkate alınacak noktalar vardır. İlk olarak, biz çeşitli bileşenleri ve konsantrasyonları ile çalışıyor gibi birden çok girdap adımları boyunca iletişim kuralı tüm konsantrasyonlarda düzgün ve doğru olduğundan emin olun. Bazı yüksek konsantrasyon, hidrofobik amino asit çözümler hala tamamen vortexing sonra çözülmüş değil ve bu durumda, onlar şiddetle işleminde yardımcı olması için elle sarsılmış. Aynı şekilde, bu SAP...
Yazarlar ifşa gerek yok.
Bu eser Sağlık Araştırma Kanada Enstitüleri tarafından desteklenir, işletim paspas-42546 paspas-119514 hibe ve.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
EAK16-I | CanPeptide Inc. | Custom peptide | Sequence: AEAKAEAKAEAKAEAK, N-terminus acetylation and C-terminus amidation, >95% pure by HPLC |
EAK16-II | CanPeptide Inc. | Custom peptide | Sequence: AEAEAKAKAEAEAKAK, N-terminus acetylation and C-terminus amidation, >95% pure by HPLC |
EAK16-IV | CanPeptide Inc. | Custom peptide | Sequence: AEAEAEAEAKAKAKAK, N-terminus acetylation and C-terminus amidation, >95% pure by HPLC |
EFK8-II | CanPeptide Inc. | Custom peptide | Sequence: FEFEFKFK, N-terminus acetylation and C-terminus amidation, >95% pure by HPLC |
A6KE | CanPeptide Inc. | Custom peptide | Sequence: AAAAAAKE, N-terminus acetylation and C-terminus amidation, >95% pure by HPLC |
P6KE | CanPeptide Inc. | Custom peptide | Sequence: PPPPPPPKE, N-terminus acetylation and C-terminus amidation, >95% pure by HPLC |
Alanine | Sigma-Aldrich | A7469-100G | L-Alanine |
Isoleucine | Sigma-Aldrich | I7403-100G | L-Isoleucine |
Leucine | Sigma-Aldrich | L8912-100G | L-Leucine |
Methionine | Sigma-Aldrich | M5308-100G | L-Methionine |
Proline | Sigma-Aldrich | P5607-100G | L-Proline |
Valine | Sigma-Aldrich | V0513-100G | L-Valine |
Phenylalanine | Sigma-Aldrich | P5482-100G | L-Phenylalanine |
Tryptophan | Sigma-Aldrich | T8941-100G | L-Tryptophan |
Tyrosine | Sigma-Aldrich | T8566-100G | L-Tyrosine |
Glycine | Sigma-Aldrich | G8790-100G | L-Glycine |
Asparagine | Sigma-Aldrich | A4159-100G | L-Asparagine |
Glutamine | Sigma-Aldrich | G8540-100G | L-Glutamine |
Serine | Sigma-Aldrich | A7219-100G | L-Serine |
Threonine | Sigma-Aldrich | T8441-100G | L-Threonine |
Histidine | Sigma-Aldrich | H6034-100G | L-Histidine |
Lysine | Sigma-Aldrich | L5501-100G | L-Lysine |
Arginine | Sigma-Aldrich | A8094-100G | L-Arginine |
Aspartic Acid | Sigma-Aldrich | A7219-100G | L-Aspartic Acid |
Glutamic Acid | Sigma-Aldrich | G8415-100G | L-Glutamic Acid |
Cysteine | Sigma-Aldrich | C7352-100G | L-Cysteine |
Dimethyl Sulfoxide | Sigma-Aldrich | D4540-500ML | DMSO |
Ethanol | Sigma-Aldrich | 277649-100ML | Anhydrous |
Curcumin | Sigma-Aldrich | 08511-10MG | Hydrophobic drug, curcumin |
Rottlerin | EMD Millipore | 557370-10MG | Hydrophobic drug, rottlerin |
PP2 | Enzo | BML-EI297-0001 | Hydrophobic drug, PP2 |
Scintillation Vials | VWR | 2650-66022-081 | Borosilicate Glass, with Screw Cap, 20 mL. Vials for weighing peptide. |
Falcon 50 mL Conical Centrifugation Tubes | VWR | 352070 | Polypropylene, Sterile, 50 mL. For amino acid solutions. |
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır