Lezyon boyutu endometriozis, kapaklı fare modeli noninvaziv izlenmesi

Özet

Burada, canlı görüntüleme, farelerde aşılı fluorescently etiketli insan endometrium parçacıkları için bir iletişim kuralı mevcut. Yöntemi seçim ilaçların etkileri izleme aracılığıyla endometriotic lezyon boyutu ve gerçek zamanlı olarak flüoresan muhabir tarafından yayılan Floresans miktar sağlar

Özet

Burada, biz hangi endometriozis ilerlemesini noninvaziv implante Ektopik insan endometrium dokusu tarafından yayılan Floresans izleme aracılığıyla gerçek zamanlı olarak tespit edilebilir bir kapaklı fare modeli uygulanması için bir iletişim kuralı tanımlamak. Bu amaçla, insan endometrium biyopsi donör kadınlar devam eden oosit bağış elde edilir. İnsan endometrium parçaları muhabir floresan protein mCherry için hızlı cDNA için tasarlanmış adenovirüse bakın huzurunda kültürlü. Enfeksiyon daha sonra seçilen alıcı farelerde implantasyon için görselleştirme, doku floresan en uygun bir fiyata sahip adlı. İmplantasyon ameliyat öncesi bir hafta alıcı fareler oophorectomized ve östradiol granül subkutan hayatta kalma ve büyüme lezyonların sürdürebilmek için yerleştirilir. Ameliyat günü fareler küçük (1.5 cm) kesi linea alba. tarafından erişilen imzalat ve Periton boşluğu vardır. Fluorescently etiketli implantlar kaşların, kısa bir süre içinde tutkal batırılmış ve Periton katmana bağlı. İnsizyon sütüre ve hayvanlar birkaç gün kurtarmak için yaptı. Floresan endometriotic implantlar tarafından yayılan genellikle non-invaziv 3 günde 4 hafta içinde vivo bir görüntüleme sistemi ile izlenir. Endometriotic implantları boyutunda varyasyonlar gerçek zamanlı olarak mCherry sinyal ve normalleştirme maksimal floresan yoğunluğu gösteren ilk zaman noktası karşı miktar tarafından tahmin edilebilir.

Endometriozis modellerin geleneksel preklinik kemirgenler non-invaziv lezyon gerçek zamanlı izleme izin vermez ama oldukça bitiş noktası denetlesinler ilaçların etkilerinin izin. Bu iletişim kuralı bir lezyonlar gerçek zamanlı olarak izlemek izin verir ve endometriozis Preklinik modellerin uyuşturucu tedavi potansiyelini keşfetmek için daha yararlı olduğunu. Böylece üretilen modeli ana sınırlandırılması non-invaziv izleme reklam-virüs episomal ifadesi nedeniyle uzun süreler boyunca mümkün değildir.

Giriş

Endometriozis rahim boşluğuna dışında işlevsel endometrium implantasyonu tarafından başlatılan kronik bir jinekolojik hastalıktır. Ektopik lezyonlar büyümek ve iltihabi süreçleri kronik pelvik ağrı ve infertilite¹için önde gelen neden. Bu kadar üreme çağındaki kadınların % 10-15 endometriosis2 tarafından etkilendiğini tahmin edilmektedir ve infertil kadınlar³yaklaşık % 40-50 mevcut. Endometriozis için mevcut farmakolojik tedaviler lezyonlar tamamen ortadan kaldırmak için ve yan etkileri^4,5özgür değil. Endometriozis insan lezyonlar uygun şekilde taklit ve diğerler....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protokol

İnsan dokusu örnekler kullanımı Kurumsal değerlendirme Komitesi ve hastane Universitario La Fe Etik Komitesi tarafından kabul edildi. Tüm hastalar yazılı Onam sağlanan. Hayvanları içeren çalışma Centro de Investigacion Principe Felipe de Valencia kurumsal hayvan bakımı Komitesi tarafından kabul edildi ve tüm yordamlar Ulusal kurumları için bakım ve memeliler kullanım yönergeleri izleyerek gerçekleştirilmiştir Sağlık.

1. rahim dokusu koleksiyonu ve ön işleme

1. Kaliteli biyopsi insan endometrium aspiratı ve emme bir aygıta bağlı bir kanül kullanarak elde. Biyopsi 10 mL steril serum fizyolojik ve nazik el ile ajitasyon ile yıkama içere....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Sonuçlar

Burada, böylece non-invaziv izin insan endometrium fluorescently etiketli adet immün fareler yerleştirerek tarafından lezyonlar mimarisini korunduğu endometriozis kapaklı bir model oluşturmak için süreci tanımlamak lezyon ilerlemesini izleme. Endometrium parçaları etiketleme tarafından Enfeksiyon Mod hızlı mCherry, Floresans yakın kızılötesi bölgesi yayan bir protein için tasarlanmış adenovirus ile elde edilir. Şekil 1' de, Ad-mCherry .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

Burada ayrıntılı iletişim kuralı aynı anda gerçek zamanlı değerlendirmesini Floresans izin yayılan iken lezyonlar mimari Reproduction Mimarlık mCherry tarafından korunur endometriozis bir hayvan modeli uygulamasını açıklar endometrium dokusu etiketli. Bu protokol için belirli içinde vivo görüntüleme sistemi ve non-invaziv etiketli lezyon tarafından yayılan Floresans değerlendirmek için ilgili yazılım kullanımını açıklar. Her kullanıcı bağlı olarak belirli görüntü aygıtı ve ilgili .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Endosampler™	Medgyn	22720	Cannula for sampling the uterine endometrium
DMEM Medium	VWR	HYCLSH30285.FS	Medium
Ad-mCherry	Vector Biolabs	1767	Adenoviral vector expressing mCherry
PBS, 1x solution, sterile, pH 7.4	VWR	E504-500ML	Buffer for washes
Pellets 17-B-Estradiol 18 mg/60 days	Innovative Research of America	SE-121	Hormone pellets for rodents
Vetbond™ Tissue Adhesive	3M	780-680	Tissue adhesive
Petri dishes in polystyrene crystal	Levantina	367-P101VR20	Petri dishes
Penicillin-Streptomicin	Sigma	P4333-100ML	Antibiotics
Syringes, medical 10 mL 0.5 ml	VWR	CODA626616	Syringes
Nitrile gloves, powder-free	VWR	112-2754	Gloves
Soft swiss nude mice	Charles River	SNUSSFE05S	Mice for animal experiment
Ivis Spectrum In vivo Imaging system	Perkin Elmer	124262	In vivo Monitoring equipment
Living Image® (Ivis software)	Perkin Elmer	---	In vivo monitoring software
Fetal Bovine Serum	Gibco	10082147	Enrichment serum
96-well cell culture treated plates	Life technologies	167008	Culture plates
Urine flasks	Summedical	4004-248-001	Flasks for washes
Sterile surgical blades	(Aesculap Division) Sanycare	1609022-0008	Surgical blades
Isovet 1,000 mg/g	B-BRAUN	---	Isoflurane (Anesthetic)
Buprex® 0.3 mg	Schering Plough S.A.	---	Buprenorphine (Analgesic solution)
Injectable morphine solution 10 mg/mL	B BRAUN	---	Morphine (Analgesic solution)
Monofyl® Absorbable Sutures	COVIDIEN	---	Sutures
Desinclor chlorhexidine	Promedic SA	---	Antiseptic solution
Microscopy DMi8	Leica Mycrosystems	---	fluorescence microscope
Hera Cell 150 Incubator	Thermo Scientific	51026282	Incubator