Mini Liposuction Tekniği ile İnsan Subkutan Yağ Dokusu Örneklemesi

Özet

Makale ve ilgili video, umbilikusu çevreleyen bölgelerden deri altı yağ dokusu örnekleri elde etmek için perkütan bir biyopsi tekniğini göstermektedir. Bu yöntem, yağ dokusundaki bir dizi parametreyi (örneğin, gen veya protein ekspresyonu, enzim aktivitesi, lipit içeriği) araştırmak için düşük riskli ve etkili bir yoldur.

Özet

Yağ dokusu üzerine yapılan çalışmalar metabolik ve diğer durumların anlaşılmasında yararlıdır. İnsan deri altı yağ dokusuna erişilebilir. Uygun eğitim ve aseptik tekniğe sıkı sıkıya bağlılık ile, deri altı yağ örnekleri araştırmacılar tarafından klinik olmayan bir ortamda güvenli ve verimli bir şekilde elde edilebilir. Lokal anestezik lateral göbek içine verildikten sonra, 5 veya 10 mL'lik bir şırıngaya tutturulmuş 14 G'lik bir iğne deriden deri altı dokusuna yerleştirilir. Emme altında, şırınga yağ dokusunun parçalarını izole etmek için pistonlu, dilimleme hareketinde hareket ettirilir. Pistonun geri çekilmesi, yağ dokusu parçalarının iğneden şırıngaya aspire edilmesini sağlamak için yeterlidir. Tek bir biyopsi yaklaşık 200 mg doku toplayabilir. Bu biyopsi tekniği hem katılımcılar hem de araştırma personeli için çok güvenlidir. Biyopsiyi takiben, katılımcılar çoğu günlük aktiviteye devam edebilirler, ancak aşırı kanamayı önlemek için 48 saat boyunca yüzmeden ve aşırı yorucu aktivitelerden kaçınmaları gerekir. Katılımcılar tek bir gün içinde güvenli bir şekilde 2 biyopsi alabilirler, bu da tekniğin akut müdahale öncesi ve sonrası çalışmalarda uygulanabileceği anlamına gelir.

Giriş

Yağ dokusu, insanların metabolik fonksiyonları hakkında yararlı bilgiler sağlayabilir. İnsan deri altı yağ dokusuna kolayca erişilebilir. Subkutan yağ dokusu ekstraksiyonu için bir teknik ilk olarak 80'li yılların ortalarında tanımlanmıştır¹; O zamandan beri, verimi artırmak ve çalışma katılımcısının tolere edilebilirliğini artırmak için ilk protokol geliştirilmiştir. Subkutan yağ dokusu çok sayıda bölgeden, en sık glutei¹ ve abdominal bölge^2'den elde edilebilir. İkincisinden alınan örnekler, metabolik hastalıkla ilgili bağlamlarda daha değerli bilgiler sağladıkları için daha arzu edilebilir³.

Mini liposuction yöntemi kullanılarak deri altı yağ dokusu biyopsisi, klinik olmayan bir ortamda güvenli ve verimli bir şekilde gerçekleştirilebilir. Kurul sertifikalı bir doktor tarafından uygun eğitimi takiben ve sıkı aseptik teknik kullanarak, araştırmacılar bu biyopsileri hem katılımcı hem de araştırmacılar için minimum riskle rutin olarak gerçekleştirebilirler. Biyopsi ekibi en az 2 kişiden oluşmalıdır: biyopsiyi yapacak kişi ve bir asistan.

Biyopsiden sorumlu kişi, katılımcının kimliğini doğrulamak, katılımcının prosedürden güvenli bir şekilde geçebileceğini kontrol etmek (aşağıdaki protokol adımları 2.1-2.4'e bakınız), katılımcının prosedür boyunca rahat etmesini sağlamak, prosedür boyunca steril tekniğin korunmasını sağlamak, prosedürü uygulamak ve katılımcıya sözlü ve yazılı bakım sonrası prosedürler sağlamakla görevlidir. Asistanın rolü, daha sonra analiz ve / veya depolama için elde edilen yağ dokusunu işlemek ve hızlı bir şekilde işlemektir. Asistan ayrıca "steril olmayan eller" olarak ve katılımcının prosedür boyunca rahat etmesini sağlayarak yardımcı olur. Bu video ve makalenin amacı, karın bölgesinden deri altı yağ dokusunu güvenli bir şekilde elde etmek için adım adım biyopsi prosedürünü tanımlamaktır.

Protokol

NOT: Stirling Üniversitesi NHS, İnvaziv veya Klinik Araştırma Komitesi, aşağıda açıklanan biyopsi prosedürünü onayladı. Bu prosedürü kullanan tüm araştırma çalışmaları uygun bağımsız etik kurul tarafından onaylanmalıdır. Biyopsi alıcısı, kurumunun gereksinimlerine uygun olarak tarif edilen teknikte resmi eğitimi tamamlamış olmalıdır. Tipik olarak, bu, tarif edilen yağ dokusu biyopsi tekniğinin kurul sertifikalı bir doktor tarafından gösterilmesini ve ardından denetimli uygulamayı gözlemlemeyi içerir. Stajyer, gözetim altında gönüllü denekler üzerinde 10 pratik yağ dokusu biyopsisi gerçekleştirdikten sonra, prosedürün iyi bilinmesini ve uygulanmasını sağlamak için kurul sertifikalı bir doktor tarafından incelenecektir. Kurul onaylı hekim daha sonra bireye imzalı bir muayene formu sağlar.

1. Laboratuvar odası hazırlığı

1. Laboratuvarın temiz, silinebilir gözeneksiz yüzeylere ve katılımcının sırtüstü yatabileceği temiz, konforlu (tercihen gözeneksiz) bir yatağa sahip uygun şekilde özel bir odaya sahip olduğundan emin olun. Biyopsi prosedürü için gerekli tüm yüzeyleri% 70 etanol sprey ve temiz kağıt havlu kullanarak temizleyin. Gerekirse katılımcıyı desteklemek için temiz yastıklar veya minderler sağlayın.
2. Uygun kesici uç imha kutularını ve biyolojik tehlike atık torbalarını, biyopsi yapılan alanın kolayca erişebileceği ve biyopsi alan kişinin kolayca erişebileceği bir yerde tutun.
3. Prosedür için gerekli ekipmanı hazırlar ve katılımcı laboratuvara gelmeden önce yeni temizlenmiş genel tıbbi bir arabaya kurar (Şekil 1). Gerekli sarf malzemelerinin tam listesi için Malzeme Tablosu'na bakın.

2. Katılımcı hazırlığı

1. Tüm katılımcıların, kurumun bağımsız etik komitesi tarafından istenen protokollere uygun olarak prosedürden geçmeden önce yazılı bilgilendirilmiş onam vermelerini sağlayın. Ek olarak, katılımcılardan prosedürde kullanılan herhangi bir malzemeye (yani nikel, krom, lokal anestezik, iyot, kabuklu deniz ürünleri ve sıvalar) alerjileri olmadığından emin olmak için yazılı bir anket doldurmalarını isteyin.
2. Katılımcının kimliğini onaylayın. Katılımcının gerçekleştirilecek prosedürü ve morarma, ağrı ve enfeksiyon dahil olmak üzere potansiyel ikincil etkileri anladığından emin olun (Tablo 1). Daha önce alınmış yazılı bilgilendirilmiş onamlara ek olarak sözlü onay alın.
3. Katılımcıya, anestezik ve biyopsi uygulamasının kendisinin nasıl hissedileceğine vurgu yaparak, prosedürün nasıl gerçekleştirileceğini açıklayın. Katılımcının devam etme konusunda rahat olduğundan emin olun.
   NOT: Lokal subkutan anestezik, kısa süreli bir arı sokmasına benzer şekilde acı hissi yaratacaktır. Birçok katılımcı, anestezik uygulamayı tekniğin en rahatsız edici kısmı olarak bildirmektedir. Anestezi etkili olduktan sonra, katılımcı biyopsi sırasında hafif bir çekme hissinden daha fazlasını hissetmemelidir.
4. Katılımcının lokal anesteziye (özellikle lidokain veya benzeri kullanılıyorsa amino-amid türünden), bazı metallere (nikel ve krom) ve kabuklu deniz hayvanlarına (iyot bazlı çözeltiler kullanılıyorsa) alerjisi olmadığından emin olun. Ek olarak, katılımcıların herhangi bir antikoagülan ilaç almadığından emin olun.
5. Katılımcıya, gerekirse mesanesini boşaltma ve boşaltma fırsatı verin, prosedürü kesmek zorunda kalmamalarını veya adım 4.1'de aşırı rahatsızlık yaşamamalarını sağlayın.

3. Biyopsi prosedürü - biyopsi alıcısı için talimatlar

1. Katılımcı sırtüstü pozisyonda yattıktan sonra, biyopsi bölgesini göbek kemiğine yaklaşık 5-10 cm lateral olarak tanımlayın.
   NOT: Katılımcı aynı gün içinde birden fazla biyopsi yapacaksa, her biyopsi için göbeğin zıt taraflarındaki biyopsi bölgelerini tanımlayın. Bu, her biyopsi bölgesi arasında maksimum mesafeyi sağlayacaktır.
2. Ellerinizi standart tıbbi kılavuzlara göre sabun ve ılık suyla yıkayın⁴.
3. Steril tabakayı temizlenmiş arabaya veya çalışma alanına yerleştirin, sadece tabakanın dış kenarlarına dokunmaya özen gösterin.
4. Uygun aseptik tekniği kullanarak steril cerrahi eldivenler giyin. Asistanın, ekipmanın geri kalanını, ekipmana dokunmadan/kirletmeden hazırlanan steril tabakanın üzerine düşecek şekilde açmasını sağlayın. Asistanın, aletleri steril ambalajlarından çıkarırken öğelere dokunmamaya özen gösterdiğinden emin olun.
5. Asistana, çalışma yüzeyindeki bazı steril gazlı bezlere (gazlı bezi aşırı doyurmadan) az miktarda iyot bazlı çözelti dağıtmasını söyleyin.
6. Steril gazlı bez ve iyot bazlı çözelti kullanarak seçilen biyopsi bölgesinin etrafında yaklaşık 5-10^cm2 sterilize edin. Cildin, önerilen biyopsi bölgesinden dışarı doğru hareket eden spiral bir hareketle temizlendiğinden emin olun. Cilt temizleme prosedürünü iki kez tekrarlayın. Taze steril gazlı bezle silerek fazla sıvıyı (örneğin, steril alandan akarak) çıkarın.
7. Asistanla birlikte, lokal anestezik şişenin içeriğini (bu protokolde% 2 lidokain) ve bunun son kullanma tarihi içinde olduğunu sözlü olarak onaylayın. Asistana açılan şişeyi baş aşağı tutmasını ve 21 G'lik bir iğne kullanarak 5 mL lokal anesteziyi bir şırıngaya çekmesini söyleyin. İğneyi keskin kutuya atın ve şırınganın hava kabarcıklarından arındırılmış olduğundan emin olun.
8. Şırıngaya 26 G'lık bir iğne uygulayın ve hava kabarcıklarını dışarı atın. Karın derisini ve yağ dokusunu hafifçe sıkıştırarak karın duvarından uzaklaştırın. Daha sonra, iğneyi deri altı dokusuna yatay olarak, cildin yüzeyine göre 10 ° 'den daha büyük olmayan bir açıyla yerleştirin.
   1. Şırınganın pistonunu 0,5 mL daha geri çekin (iğnenin kan damarında olmadığından emin olmak için). Şırıngada kan görünüyorsa, iğneyi farklı bir açıyla çekin ve tekrar takın.
   2. Yerleştirme bölgesini uyuşturmak için 2-4 mm çapında bir bleb kaldırın.
   3. İğneyi deri altı dokusuna ilerletin ve fan şeklinde bir desende ~ 1 mL lidokain uygulayın (Şekil 2), anesteziyi enjekte etmeden önce her seferinde pistonu çekmeye özen gösterin.
   4. 26 G iğneyi çıkarın ve atın, şırıngaya 21 G'lik bir iğne uygulayın, herhangi bir hava kabarcığını dışarı atın ve kalan ~ 4 mL lidokaini fan şeklinde bir desende uygulayın (Şekil 2), anesteziyi enjekte etmeden önce her seferinde pistonu çekmeye özen gösterin.
9. Lokal anestezinin etkili olması için yaklaşık 5 dakika bekleyin. Biyopsi alanını nazikçe prod etmek için steril bir neşter kullanın i) lokal anestezinin etkili olduğundan emin olun ve ii) anestezi yapılan alanın sınırlarını belirleyin. Gerekirse, bir veya iki dakika daha bekleyin ve yeniden değerlendirin.
10. Lokal anestezinin çalıştığından emin olduktan sonra, cildi ve yağ dokusunu hafifçe sıkıştırın (adım 3.8'de olduğu gibi) ve ciltte 1-2 mm'lik küçük bir delinme yapmak için steril bir neşter kullanın.
    NOT: Bunun sadece 14 G iğnenin girişini kolaylaştıracak kadar büyük olması ve kapatmak için dikiş gerektirmeyecek kadar küçük olması gerekir. Bu noktadan itibaren bir parça steril gazlı bezle kontrol edilebilen bazı kanamaların meydana gelmesi yaygındır.
11. İlk önce, 5 veya 10 mL'lik bir şırıngaya 14 G'lik bir iğne uygulayın. Daha sonra, cildi ve yağ dokusunu nazikçe sıkıştırırken, iğneyi delinme yoluyla yavaş yavaş anestezi yapılan bölgede yaklaşık olarak merkezi olarak ve cildin yüzeyine göre 10 ° 'den daha büyük olmayan bir açıyla yağ dokusuna yerleştirin.
    NOT: Adım 3.11'deki tüm iğne ilerlemesi durumları için, 10°'den büyük olmayan bir şırınga açısı korunmalıdır.
    1. Pistonu yaklaşık 2,5 mL işaretine çekerek emme uygulayın. İğneyi hızlı bir şekilde ileri ve geri hareket ettirerek biyopsi yapın ve yağ dokusunun parçalarını dilimleyin. Yaklaşık 30 sn sonra, iğneyi ve şırıngayı 90 ° 'den döndürün ve daha sonra emme ile şırıngaya aspire edilen yağ dokusu parçalarını parçalamak için bu prosedürü tekrarlayın.
       NOT: Diğer şırınga boyutları kullanılabilir. Araştırmacının, hem şırınga üzerinde iyi bir tutuşa hem de vakumun bakımı için piston geri çekilmesini rahatça sürdürmeye izin veren bir şırınga boyutu seçmesi önemlidir. Vakumu koruyan, iğne kontrolünü iyileştirebilen ve biyopsi alan ⁵ için algılanan zorluğu azaltabilen kilitleme şırıngaları mevcuttur.
    2. Adım 3.11.1'in yaklaşık 45-60 s'sinden sonra, iğneyi çıkarın ve şırınga içeriğini bir tartım teknesini kaplayan bir gazlı bez tabakasına boşaltın. Potansiyel kan sıçramasını önlemek için iğnenin lümeninin aşağı baktığından emin olun.
    3. 3.11.1 ve 3.11.2 adımlarını en fazla 3 kez yineleyin. Yukarıdaki prosedürün her tekrarından önce katılımcının devam etmekten memnun olup olmadığını kontrol edin.
    4. 3.11.1 ve 3.11.2 adımlarını uygularken, asistana numuneleri analiz/depolama için işlemesi ve hazırlaması talimatını verin (bkz. bölüm 5).

4. Biyopsi sonrası prosedür

1. Tatmin edici bir yağ dokusu örneği (yani ~ 200 mg) elde edildikten sonra, delinme yarasının üzerine 1-2 kat steril gazlı bez yerleştirin, ardından bunların üzerine bir buz torbası yerleştirin ve hemostazı indüklemek için yaklaşık 10 dakika boyunca sert basınç uygulayın.
2. Hemostaz meydana geldiğinde, iyot bazlı herhangi bir çözeltiyi / kurutulmuş kanı steril gazlı bezle silin ve bölgeye emici ped ile yapışkan bir yara örtüsü uygulayın. Katılımcının kendini iyi hissedip hissetmediğini kontrol edin ve biyopsi sitesi sonrası bakım konusunda sözlü ve yazılı talimatlar verin.
   1. Katılımcıların önümüzdeki birkaç gün boyunca muhtemelen biraz morarma sergileyeceğini vurgulayın. Onlara, adım 4.1'deki buz paketi tarafından en aza indirilmesine ve kalıcı etkiler olmadan çözülmesine rağmen, bunun önemli olabileceğini bildirin.
   2. Katılımcıların, anestezi yıprandıktan sonra herhangi bir rahatsızlık / ağrı hissetmeleri durumunda, paket üzerindeki talimatları izleyerek parasetamol gibi analjezikler almalarını, ancak antikoagülan aktiviteleri olan analjezikleri (örneğin, ibuprofen veya aspirin) almaktan kaçınmalarını tavsiye edin.
   3. Şişlik, kızarıklık veya biyopsi bölgesinden akıntının enfeksiyon belirtileri olduğunu açıklayın. Bu belirtilerin veya semptomların ortaya çıkması durumunda, katılımcıya acilen bir doktordan veya yerel Kaza ve Acil Durum biriminden tıbbi yardım almasını söyleyin. Katılımcıya, tıbbi tavsiye almaları durumunda, araştırma ekibini de bilgilendirmeleri gerektiğini bildirin.
      NOT: Araştırma personeli olarak, ne biyopsi alıcısı ne de asistan tıbbi tavsiye veya tedavi sağlayamaz; Bununla birlikte, araştırma ekibinin biyopsi prosedüründen kaynaklanan tüm komplikasyon vakalarının farkında olması ve kaydetmesi önemlidir.
   4. Katılımcıların, insizyon bölgesi kapanana kadar 48 saat boyunca yüzmeyi veya aşırı yorucu aktiviteyi önlemelerini tavsiye edin.
3. Kullanılmış kesici uçları ve kontamine olmuş malzemeleri belirlenmiş kesici uçlara ve/veya klinik atık konteynerlerine temizleyin.
4. Biyopsi işleminde kullanılan tüm yüzeyleri% 70 etanol sprey ve temiz kağıt havlu kullanarak temizleyin. Tek kullanımlık ve tek kullanımlık olmayan yatak takımlarını sırasıyla bertaraf veya temizlik için uygun klinik torbalara yerleştirin.

5. Örnek işleme - asistan için talimatlar

1. Görünür kirleticileri (yani kan, vaskülatür) gidermek için yağ dokusu örneğini durulamak için steril cımbız ve% 0.9 salin kullanın. Ardından, dijital terazileri kullanarak yağ dokusu örneklerini tartın. Dokuyu aşağı akış analizi için uygun boyutta parçalara bölün ve steril cımbız kullanarak uygun depolama tüplerine yerleştirin. Yağ dokusu biyopsilerini içeren tüpleri -190 °C'de sıvı azota batırın ve numuneler -80 °C'de saklanana kadar dondurun.
   NOT: Asistan, olası numune bozulmasını en aza indirmek için numune işlemeyi mümkün olduğunca çabuk, tipik olarak numune aspirasyonundan sonraki 3 dakika içinde tamamlamalıdır.

Sonuçlar

Tarif edilen yağ dokusu biyopsisi prosedürü, araştırmacıların insan gönüllülerden deri altı yağ dokusu örnekleri almaları için etkili ve düşük riskli bir tekniktir. Tanımlanan prosedürü kullanarak 11 sağlıklı, normal kilolu kadında (yaş, 27.4 ± 3.3 yıl; vücut kitle indeksi (VKİ), 22.6 ± 1.5 kg.m²) tanımlanan prosedürü kullanarak 39 adet deri altı yağ dokusu biyopsisi gerçekleştirdik. Tüm katılımcılar 8-12 saatlik oruç dönemini takiben 07:00-10:00 saatleri arasında l...

Tartışmalar

Tarif edilen protokol ve ilişkili video, karın bölgesinden deri altı yağ dokusu örnekleri elde etmek için mini liposuction tekniğine adım adım genel bir bakış sunmaktadır. Bu araştırma grubu, katılımcılarda herhangi bir yan etkisi olmadan 19 ay boyunca toplam 124 biyopsi gerçekleştirmiştir. Prosedür güvenlidir ve açıklanan güvenlik önlemlerine uyulması koşuluyla katılımcılar veya biyopsi ekibi için minimum risk ile ilişkilidir. Aseptik teknik (steril ekipmanın kirletilmeden açılması ...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Item: 14 G needle 14 G x 3 1/8" 210 mm x 80 mm	B Braun	4665473	Per biopsy: 1
Item: 21 G needle 21 G x 1 1/2" 0.8 mm x 38 mm	Terumo	AN*2138R1	Per biopsy: 2
Item: 26 G  needle 26 G x 1/2" microlance needle 0.45 mm x 13 mm	BD	303800	Per biopsy: 2
Item: 5 mL syringe 5 mL luer	DB plastipak	302187	Per biopsy: 2
Item: Adhesive wound dressing Opsite Post-Op Dressing 9.5 x 8.5	Smith & Nephew	6600709	Per biopsy: 1
Item: Disposable sterile scalpel Disposable Scalpel Sterile Blade no. 10	Swann Morton	/0501	Per biopsy: 1
Item: Icepack BlueDot Reusable Hot/Cold Pack 26.5 cm x 13.0 cm	NuCare	F711	Per biopsy: 1
Item: Iodine based antiseptic Videne antiseptic solution	Ecolab Videne	3030440	Per biopsy: q.s
Item: Lidocaine 2% w/o epinephrine Lidocaine 2% injection 5 mL	B Braun	3558553	Per biopsy: 5 mL
Item: Non-sterile gloves Starguard sensitive powder free nitrile gloves	Starguard	SG-N-S	Per biopsy: pair
Item: Sodium chloride 0.9% Sodium chlride 0.9% w/v intravenous infusion BP	BBraun	S8004-5384	Per biopsy: q.s.
Item: Stabilization solution* RNAlater Stabilization Solution	ThermoFisher Scientific	AM7020	Per biopsy: q.s
Item: Sterile forceps Sterile forceps	Rocialle	RML109-006	Per biopsy: 1
Item: Sterile gauze swabs Non woven swabs sterile 7.5 x 7.5 cm	Prestige	1860	Per biopsy: 5
Item: Sterile gloves Prestige soft vinyl sterile powder free medical gloves	Prestige	S: P4301 M:P3302 L:P3301	Per biopsy: pair
Item: Sterile Microcentrifuge tubes 1.5 mL Sterile Microcentrifuge Tubes	StarLab	I1415-5510	Per biopsy: q.s
Item: Sterile sheet Paper plain white 90 x 90 cm	Rocialle	RML 126-216	Per biopsy: 1
Item: Weighing boat Diamond shape weigh boats	Heathrow Scientific	HS1427C	Per biopsy: 1
* denotes optional materials