OP50-1 bakteri ile tohumlanmış 35 milimetre standart NGM plakalarının altında üç veya dört gravid Caenorhabditis elegans ergini seçerek hayvanları RNAi kalıtım testi için hazırlayın. Dört gün sonra, Triton X-100 ile takviye edilmiş 800 mikrolitre M9 tamponu kullanarak gravid yetişkin solucanları plakalardan 1,5 mililitrelik tüplere yıkayın. Yıkamayı tekrarlayın ve solucanları bir tüpe çekin.
Solucanları 1.5 ila iki dakika boyunca 1.000 G'de santrifüjledikten sonra, solucan peletini bozmadan 100 mikrolitre bırakarak süpernatanı aspire edin. Solucan peletini içeren her tüpe 650 mikrolitre çift damıtılmış su ekleyin. C.elegans embriyolarını toplanan popülasyondan izole etmek için, 250 mikrolitre taze hazırlanmış ağartma solüsyonu ekleyin ve bir zamanlayıcı başlatın.
Her bir ila iki dakikada bir, tüpleri iyice girdaplayın. Beş dakika sonra, stereoskop altında yetişkin solucanların bozulmasını izleyin. Solucanlar tamamen çözülene ve sadece embriyolar kalana kadar girdap yapmaya devam edin.
Bu genellikle altı ila yedi dakika sürer. Tüpleri hemen 1.5 dakika boyunca 1.000 G'de santrifüjleyin ve süpernatanı aspire edin, embriyolarla birlikte yaklaşık 50 ila 100 mikrolitre süpernatan bırakın. Embriyolara ve girdaba Triton X-100 ile takviye edilmiş bir mililitre M9 tamponu ekleyin.
Süspansiyonu santrifüjleyin ve yıkamayı iki kez tekrarlayın. Son yıkamadan sonra, süpernatanı aspire edin ve tüpte yaklaşık 100 mikrolitre bırakın. Tüpleri izole embriyolarla vorteksleyin ve her tüpten iki mikrolitreyi etiketli bir cam slayt üzerine iki kez pipetleyin.
Mikrolitre başına embriyo konsantrasyonunu tahmin etmek için bir çetele sayacı kullanarak embriyoları sayın. Yarı senkronize bir popülasyon artışı başlatmak için, GFP veya kontrol RNAi vektörleri ile E.coli HT115 bakterisi içeren her bir RNAi NGM plakasına yaklaşık 250 embriyo aktarın. Sıvının emilmesine izin verin.
RNAi ile muamele edilen P naught neslini 21 santigrat derecede dört gün boyunca inkübe edin.
