Başlamak için, plastik bir doku kültürü kabında M2 IBMX Medium damlaları hazırlayın ve kabı oosit izolasyonundan önce en az 30 dakika boyunca 37 santigrat derecede sıcak bir blok üzerine yerleştirin. Ötenazi yapılan farelerin yumurtalıklarını inceleyin ve M2 IBMX ile beş mililitrelik yuvarlak tabanlı bir tüpe yerleştirin. Yumurtalıkları 1,5 mililitre M2 IBMX içeren plastik bir kapağa aktarın.
Peri-yumurtalık yağ dokusunu veya fallop tüpü segmentlerini çıkarın ve yumurtalıkların 27 gauge iğne ile mekanik olarak delinmesiyle kümülüs oosit komplekslerini serbest bırakın. Kümülüs oosit komplekslerini M2 IBMX damlaları ile bir kültür kabına aktarın. Ve kümülüs hücrelerini, dar delikli bir cam mera pipeti kullanarak tekrar tekrar pipetleyerek çıkarın.
Etrafı sarılmış çekirdek germinal vezikül veya GV evre oositlerini seçin ve bunları ışıktan korunan 37 santigrat derecede sıcak blok üzerinde bir damla M2 IBMX ortamına aktarın. Etoposid kullanarak çift iplikçik kırılmalarını indükledikten sonra, GV evre oositlerini karanlıkta sıcak blok üzerinde bir saat boyunca genotoksik ajan damlalarına yerleştirin. Oositlere 400 mikromolar IBMX ile takviye edilmiş M16 kültür ortamı damlaları ekleyerek onları uzun süre tutuklu tutun.
Oositleri 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksitte bir inkübatöre yerleştirin.
