Başlamak için göz koruması, cerrahi maske ve lateks olmayan eldivenler dahil olmak üzere kişisel koruyucu ekipman kullanın. EGM'de 20 mililitre fare nöroblastomu veya BHK-21 hücresini, mililitre başına 3.0 kez 10 ila beşinci hücre konsantrasyonuna hazırlayın. Hazırlanan hücreleri kullanıma hazır olana kadar soğuk tutun.
Daha sonra CVS-11 virüsünü EGM'de seyrelterek hazırlayın. Hazırlanan virüsü kullanılana kadar soğuk tuttuğunuzdan emin olun. Nem slayt haznesini ve politetrafloroetilen kaplı kuyu mikroskop slaytlarını %70 etanol ile temizleyin ve biyogüvenlik kabininde kurumaya bırakın.
Temizledikten sonra, prosedür boyunca sabit nem sağlamak için slayt haznesindeki emici kağıt şeritlerine damıtılmış su ekleyin. Her slaydı bir kurşun kalem kullanarak, lot numarası, tarih ve hücre türü gibi gerekli kimlik bilgileriyle etiketleyin. Etiketli slaytları saklamak için slayt bölmesine yerleştirin.
Daha sonra, tekrarlayan bir pipet kullanarak mikroskop slaytları üzerindeki kuyucuklara 50 mikrolitre virüs seyreltmesi uygulayın. Her kuyucuğa 50 mikrolitre hücre seyreltmesi uygulayın, pipet ucunu zaten kuyuda bulunan virüsle kirletmemeye dikkat edin. Daha sonra nem kaydırma haznesini kapatın ve 34 ila 36 santigrat derece arasındaki nemli inkübatöre yerleştirin.
Ardından, slaytı nem odasından çıkarın ve süpernatanı titizlikle aspire edin. Slaytı PBS dolu bir coplin kavanozunda iki dakika yıkayın, ardından kurumaya bırakın. Numuneyi sabitlemek için slaydı soğuk aseton dolu bir koplin kavanozuna koyun.
Kavanozu en az bir saat boyunca yanıcı maddeler için onaylanmış eksi 20 santigrat derece dondurucuya koyun. Aseton buharlaştığında ve slayt kuruduktan sonra, slaytın kuyucuklarına kuduz doğrudan floresan antikor konjugatı uygulayın ve slaydı 34 ila 36 santigrat derece nemli bir inkübatörde 30 dakika inkübe edin. Daha sonra slaytı iki kez PBS'nin bir coplin kavanozunda iki dakika boyunca yıkayın.
Sürgüyü havayla kurutun ve kapak fişini 0.05 molar triss, 0.15 molar sodyum klorür ile %20 Gliserol tutucuya monte edin. Hücre enfektivitesini değerlendirmek için 200 kat büyütmede bir floresan mikroskobu kullanın. Ardından, kalan slaytları inkübatörden ve nem odasından çıkarın.
Süpernatanı her kuyudan dikkatlice aspire edin. Ardından slaytları bir ila iki dakika boyunca PBS'li bir coplin kavanozuna koyun. Slaytları yaklaşık 30 dakika kurumaya bırakın ve ardından kullanana kadar eksi 80 santigrat derecede saklayın.
