Başlamak için, test için hastanın serum veya beyin omurilik sıvısı örneklerine seyreltme hazırlayın. Gerekli konjugatı PBS'de %0.05 Evans Mavisi ile seyrelterek uygun çalışma konsantrasyonunda hazırlayın. Dolaylı floresan antikor testleri için, test için gerekli olan uygun sayıda hazırlanmış antijen slaytını alın.
Slaytların buzunun çözülmesine ve tamamen kurumasına izin verin. Ardından, slaytları aseton dolu bir Coplin kavanozuna koyun ve iki saatten gece boyunca yanıcı maddeler için onaylanmış eksi 20 santigrat derece dondurucuya aktarın. Daha sonra slaytları asetondan çıkarın ve kurumaya bırakın.
Şimdi, slaytları biyogüvenlik kabininin içindeki nem odası kutusuna yerleştirin. Nemi korumak için, hazneye damıtılmış suya batırılmış emici şeritler ekleyin. Önceden belirlenmiş kuyucuğa her bir kontrol numunesinden, numune seyreltmesinden veya PBS'den 50 mikrolitre uygulayın.
Kapalı nem kaydırma odasını 37 santigrat derece, %5 karbondioksit nem inkübatöründe 30 dakika bekletin. Tamamlandığında, nem kaydırma odasını inkübatörden çıkarın ve bir biyogüvenlik kabinine aktarın. Bir aspiratör ucu kullanarak, hücre tek tabakasını bozmadan süpernatanı her bir kuyucuktan dikkatlice aspire edin.
Daha sonra, steril bir damlalıklı pipet kullanarak her kuyucuğa bir damla PBS uygulayın. PBS'yi dikkatlice aspire edin ve her slaydı PBS ile dolu bir Coplin kavanozuna aktarın. Ardından, slaytları nem odası kutusuna geri yerleştirin.
Her bir oyuğa 50 mikrolitre uygun anti-insan antikor konjugatı uygulayın ve nemli bir inkübatörde 30 dakika inkübe edin. İnkübasyonun sonunda, nem odasını bir biyogüvenlik kabinine aktarın. Bir aspiratör ucu kullanarak süpernatanı aspire edin.
Daha sonra, steril bir damlalıklı pipet kullanarak her kuyucuğa bir damla PBS uygulayın. PBS'yi çıkardıktan sonra, slaytı PBS'nin bir Coplin kavanozunda toplam 15 dakika boyunca iki kez yıkayın. Yıkandıktan sonra, slaytların kurumasını bekleyin, ardından montaj ortamıyla birlikte bir kapak fişi takın.
Slaytları alın ve floresan mikroskobu altında okuyun. Numuneleri negatiften dörde kadar derecelendirin, negatif numuneler floresan göstermiyor ve dört artı numuneler parlak yeşil floresan gösteriyor. Numunenin bir ila iki artı derece gösterdiği seyreltme faktörü tarafından temsil edilen numuneleri ve son nokta değerini atayın.
İlk aşılamadan sonra, hasta örneklerinde hem immünoglobulin M hem de G'nin yüksek seviyeleri gözlendi. Aşılamadan yaklaşık altı ay sonra, hasta örneklerinde her iki antikorun önemli ölçüde daha düşük seviyeleri mevcuttu, ancak immünoglobulin M seviyeleri neredeyse tamamen düşmüştü. Aşılamadan 18 ay sonra hasta örneklerinde immünoglobulin M antikorları tespit edilmedi.
İmmünoglobulin G seviyeleri devam etti ve iki haftalık zaman noktasından ilk düşüşü takiben altı aylık zaman noktasında tespit edilenler gibi kaldı.
