Rat Retina Excision and Mounting on Porous Membrane for Calcium Imaging

Lütfen tüm çevirilerin yapay zeka tarafından oluşturulduğunu unutmayın. İngilizce sürüm için buraya tıklayın.

334 Views

•

02:42 min

•

August 18th, 2023

DOI :

10.3791/200529-v

August 18th, 2023

•

Marina Cunquero¹, Maria Marsal¹, Gustavo Castro-Olvera¹, Steven T. Walston², F. Taygun Duvan², José Gabriel Macias-Montero³, Carles Puigdengoles³, Mokhtar Chmeissani³, Jose A. Garrido²^,⁴, Pablo Loza-Alvarez¹

¹Institut de Ciències Fotòniques (ICFO), The Barcelona Institute of Science and Technology, ²Catalan Institute of Nanoscience and Nanotechnology (ICN2), CSIC and BIST, Campus UAB, ³Institut de Física d'Altes Energies (IFAE), The Barcelona Institute of Science and Technology, Campus UAB, ⁴Institució Catalana de Recerca i Estudis Avançats (ICREA)

Transkript

Görüntülemeden iki ila üç hafta önce, anestezi uygulanmış bir sıçanın gözünün vitreusuna, genetik olarak kodlanmış kalsiyum göstergesini taşıyan viral parçacıklar enjekte edilir. Fundoskopi ve OCT kullanılarak, retina yapısı kalsiyum indikatör enjeksiyonundan kaynaklanan advers reaksiyonlar açısından incelenir. Enjeksiyondan iki hafta sonra, ganglion hücre tabakası veya GCL floresan emisyonu sergiledi.

Daha sonra ötenazi yapılan sıçandan retina eksizyonu başlatılır. AAV2-CAG-GCaMP5G'yi ifade eden gözleri alın ve küçük kavisli forseps ve ince yaylı makas kullanarak göz küresini çevreleyen tüm dokuyu çıkarın. Ardından, üç x üç santimetrelik bir filtre kağıdı alın.

3,5 santimetrelik bir kabın kapağına yerleştirin ve filtre kağıdını AIMS ortamıyla ıslatın. Göz küresini, ön segment operatöre doğru bakacak şekilde kağıda yerleştirin. Göz küresini çanak yüzeyinden yaklaşık 45 derecelik bir açıyla tutmak için bir çift düz forseps kullanın.

Bir kesiği bıçakla yönlendirmek için düz forseps arasındaki boşluğu kullanın. Ardından göz küresini AIMS ortamına daldırın. Gözün ön ve arka kısımlarını ayırmak için düz forseps ve ince yaylı makas kullanın.

İki çift düz forseps kullanarak lensi dikkatlice çıkarın ve retinayı skleradan ayırın. İnce yaylı makas kullanarak, sklerada optik sinire doğru bir kesi yapın ve retina göz kabından başarıyla ayrılana kadar kesin. Kesilen retina parçasını, kesik uçlu plastik bir pipet kullanarak montaj membranına aktarın.

Ardından, retinayı düz bir şekilde monte etmek için bir çift düz forseps kullanın ve ganglion hücre tabakasının yukarı doğru yönlendirildiğinden emin olun. Ardından, ortamı çıkarmak için 100 mikrolitrelik pipet ucuna sahip plastik bir pipet kullanın ve retina parçasının gözenekli zara yapışmasını kolaylaştırın. Ardından, GCL'yi elektrotların üzerine yerleştirerek düzeneği mikro elektrot dizisine veya MEA'ya çevirin.

Ardından numune banyosunu oksijenli AIMS besiyeri ile doldurun.