Önceden çözülmüş pankreas tümör hücresi süspansiyonunu iki mililitrelik bir mikrosantrifüj tüpüne aktararak başlayın ve iki mililitrelik bir son hacme ulaşmak için PBS ekleyin. Ardından, hücrelerin miktarını ve kalitesini değerlendirmek için bir hemositometre kullanın. Hücre peleti santrifüjleme yoluyla elde edildikten sonra, giderek daha küçük pipet uçları kullanarak, boşaltılan sıvıyı en üst düzeye çıkarırken pelet dağılımını en aza indirmek için süpernatanı dikkatlice boşaltın.
1X hücre lizis tamponu hazırlayın, ardından 0.1X hücre lizis tamponu elde etmek için önceden hazırlanmış 900 mikrolitre hücre lizis seyreltme tamponuna 100 mikrolitre ekleyin. 100 mikrolitre soğutulmuş 0.1X hücre lizis tamponunu hücre peletine aktarın ve tam süspansiyonu sağlamak için beş kez hafifçe pipetleyin. Buz üzerinde üç dakika inkübe ettikten sonra, yeniden süspanse edilmiş pelete bir mililitre soğutulmuş yıkama tamponu ekleyin ve hafifçe beş kez pipetleyin.
Santrifüjlemeyi takiben, süpernatanı gösterildiği gibi atın ve bu yıkama işlemini iki kez daha tekrarlayın. Çekirdek sayısını saymak için tripan mavi lekeli süspansiyonu bir hemositometreye yükleyin. Hedefe yönelik çekirdek geri kazanımına dayalı olarak çekirdek peletini 1X çekirdek tamponunda yeniden süspanse edin.
Yeniden süspanse edilmiş çekirdekleri dikkatlice 40 mikrometrelik bir pipet ucu hücre süzgecinden geçirin ve ardından buz üzerinde tutun. Şimdi çekirdekleri anlatın. Bu yöntem kullanılarak elde edilen çekirdekler uygun boyut ve şekil sergiledi.
Nükleer zarfın ara sıra hafif kesilmesi gözlenebilir ve hemositometre ile son nükleer değerlendirmede izlenmelidir.
