Başlamak için, 70 mililitre önceden ısıtılmış Dulbecco'nun Modifiye Eagle Medium'unu steril bir biyogüvenlik kabininde bir Petri kabına aktarın ve 100 nano molar konsantrasyonda deksametazon ekleyin. Düz, düz, ince uçlu forseps içeren diseksiyon için gerekli cerrahi aletleri bir araya getirin. Tırtıklı dişlere ve düz keskin ince makaslara sahip düz ince uçlu forseps.
Arka bacak eksplantlarını incelemek için. Ötenazi uygulanmış bir farenin kalça eklemini, emici alt pedlerle kaplı tezgah üstüne sırtüstü konumlandırılmış olarak bulun. Üst bacağın proksimal ve ön yönlerini kaplayan cilt üzerinde küçük bir kesi oluşturmak için ince makas kullanın.
Ardından, açıkta kalan üst bacağı genişletmek ve sıkıştırmak için kesiği ayırmak için parmaklarınızı kullanın. Arka bacak eldivenini ayak bileği seviyesine çıkarmak için cildi dikkatlice distal olarak çekin. Bir makas bıçağını ayağın dorsal yönü boyunca derinin altına nazikçe sokun.
Ardından ayak parmaklarına doğru uzanan bir kesi yapın ve tamamen çıkarılana kadar cildi distal olarak çekmeye devam edin. Fareyi, Aşil tendonunun ayak bileğine yakın kalkaneusun arka yüzüne yerleştirilmesini net bir şekilde görecek şekilde konumlandırın. Bitki teras tendonunu çıkarmak için, düz ince uçlu forsepsin bir ucunu iki tendon arasına yerleştirin.
Ucu medial olarak plantaris tendonunun altından geçirin. Sonra plantaris kasını yırtmak için proksimal olarak çekin. Daha sonra ince uçlu tırtıklı forseps kullanarak, plantaris tendonunun ayrılmış proksimal ucunu kavrayın ve tamamen çıkarmak için distal olarak çekin.
Kalça ekleminde, arka bacak izolasyonu yaparak pelvisi hassas bir şekilde kesmek için ince makas kullanın. Kalan pelvisi nazikçe çıkarmak için makası kullanın ve femur başını ortaya çıkarın. Biyogüvenlik kabininde, arka bacak eksplantını hücre kültürü ortamı ve deksametazon içeren kaba aktarın.
Çanağı inkübatöre yerleştirin ve 48 saat boyunca ön işleme tabi tutun.
