Başlamak için, UV ile sterilize edilmiş yüksek verimli plakaları ve trombin alikotlarını doku kültürü başlığına yerleştirin. Pıhtılaşmayı yavaşlatmak için hazırlanan hücre fibrin karışımını buz üzerine yerleştirin. Bir P20 pipeti kullanarak, hücre fibrin karışımından altı mikrolitre çekin.
Ardından pipet ucunu yavaşça trombin alikotuna yerleştirin ve hava kabarcığı oluşturmadan iki kez karıştırın. Yüksek verimli plakayı belirli bir açıyla kaldırın ve pipet ucunu yükleme portlarından birine hızlı bir şekilde yerleştirin. Pipet pistonunu yumuşak ve akıcı bir hareketle ilk durağa kadar itin ve hücre fibrin karışımını doku odasına enjekte edin.
Jelin hazneden tamamen geçtiğinden emin olun. Pipet ucunu çıkarmadan veya pipeti yerinden çıkarmadan plakayı nazikçe düz bir şekilde yerleştirin. Pipet ucunu bir elinizle P20'den çıkarın ve yükleme ağzı deliğinde bırakın.
İki dakika sonra, pipet uçlarını yükleme deliklerinden hafif büküm hareketleriyle çıkarın ve kapağı plakaya yerleştirin. Jel polimerizasyonu için plakayı 37 santigrat derecede 15 ila 20 dakika inkübe edin. Hücrelerin herhangi bir hava kabarcığı olmadan oda boyunca eşit dağılımını gözlemlemek için mikroakışkan cihazı mikroskop tablasına yerleştirin.
P20 pipet ucunu M1 veya M3'e yerleştirin ve tüm üst paneli kaplamak için dört mikrolitre laminini yavaşça dışarı atın. Pipet ucunu daha önce gösterildiği gibi çıkarın ve plakayı 37 santigrat derecede %5 karbondioksit içinde 10 dakika inkübe edin. P200 pipet ucunu, 275 mikrolitre EGM-2 içeren kuyucukların ortam giriş deliğine yerleştirin ve 75 mikrolitre ortamı yavaşça dışarı atın, ortamın kanaldan geçmesini ve diğer tarafta kabarmasını izleyin.
Pipet ucunu çıkardıktan sonra, uçtan kalan ortamı ortam haznesine itin. G ve H sıralarındaki alçak taraf kuyucuklarını tamamen kaplamak için 50 mikrolitre ortam ekleyin. Mikroskop altında, medya kanallarındaki kabarcıkları belirleyin ve kanallara 75 mikrolitre medyayı yeniden vererek bunları çıkarın.
Çıplak gözle orta giriş veya çıkışlarda hava kabarcığı olup olmadığını kontrol edin. Ardından P200 pipet ucunu deliğe sokun ve pistonu kaldırarak balonu dışarı çekin. Vaskülarize mikro organlarda veya VMO'larda, endotel hücreleri başlangıçta doku odası içinde eşit olarak dağıldı, ancak ikinci günde uzamaya ve aydınlanmaya başladılar.
Dördüncü günde, endotel hücreleri dış mikroakışkan kanallarla anastomoz edildi ve sürekli bir vasküler ağ oluşturdu. Sıkı vasküler bariyer fonksiyonu, FITC-dekstran'ın mikrovasküler ağ üzerinden minimal sızıntı ile perfüze edilmesiyle doğrulandı. MDA-MB-231 kanser hücrelerinin VMO'lara perfüzyonu, endotelyal astara yapışmalarına ve ardından hücre dışı boşluğa ekstravazasyona neden oldu ve perfüzyondan sonraki 24 saat içinde çoklu mikrometastaz oluşturdu.
Hızlandırılmış mikroskobik görüntüleme yoluyla, T hücrelerinin VMO'ların hücre dışı boşluğuna ekstravazasyonu 45 dakika boyunca gözlendi. Tam oluşmuş damarlara sahip vaskülarize mikrotümörlerde, T hücreleri perfüzyon sonrası hızla damar duvarına yapışır.
