İnsan Embriyonik Kök Hücre Kaynaklı Retina Pigment Epitel Hücrelerinin Optimize Edilmiş Kriyoprezervasyon ile Korunması

Lütfen tüm çevirilerin yapay zeka tarafından oluşturulduğunu unutmayın. İngilizce sürüm için buraya tıklayın.

40 Views

•

02:51 min

•

November 3rd, 2023

DOI :

10.3791/200824-v

November 3rd, 2023

•

Xinyue Bai*¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷, Ting Zhang*¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷, Xinyue Zhu¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷, Xianyu Huang¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷, Haiyun Liu¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷, Xiaoyan Ding⁸, Mei Jiang¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷, Xiaodong Sun¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷

¹Department of Ophthalmology, Shanghai General Hospital, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, ²National Clinical Research Center for Eye Diseases, ³Shanghai Clinical Research Center for Eye Diseases, ⁴Shanghai Key Clinical Specialty, ⁵Shanghai Key Laboratory of Ocular Fundus Diseases, ⁶Shanghai Engineering Center for Visual Science and Photomedicine, ⁷Shanghai Engineering Center for Precise Diagnosis and Treatment of Eye Diseases, ⁸Stem Cell Core Facility, CAS Center for Excellence in Molecular Cell Science, Chinese Academy of Sciences

* Bu yazarlar eşit katkıda bulunmuştur

Transkript

Başlamak için, hESC'den türetilen retina pigmenti epitel hücrelerini ayırın, hücre süspansiyonunu hazırlayın ve ardından hücreleri sayın. Şimdi, hücreleri oda sıcaklığında üç dakika boyunca 250 g'da santrifüjleyin. Süpernatanı dökün, ardından, hücre peletini kriyoprezervasyon ortamında yeniden süspanse edin.

Daha sonra, hücre süspansiyonunun bir mililitresini 1.2 mililitrelik bir kriyojenik şişeye aktarın. Kriyojenik şişeleri bir dondurma kabına koyun ve gece boyunca eksi 80 santigrat derecede dondurun. Uzun süreli saklama için şişeleri sıvı nitrojene aktarın.

Dondurulmuş şişeleri çözmek için, önce kültür ortamını 37 santigrat dereceye kadar ısıtılmış metalik boncuklarda ısıtın, ısıtılmış kültür ortamının 10 mililitresini 15 mililitrelik bir tüpe önceden doldurun. Şimdi, kriyojenik şişeleri sıvı nitrojenden çıkarın ve hızlı çözdürme için otomatik bir çözdürme sistemine yerleştirin. Kademeli hücre adaptasyonunu sağlamak için önceden ısıtılmış kültür ortamının 0,5 ila bir mililitresini kriyojenik şişeye bırakın.

Ardından, 1.5 ila iki mililitre hücre süspansiyonunu orta ile 15 mililitrelik tüpe pipetleyin. Hücreleri oda sıcaklığında üç dakika boyunca 250 g'da santrifüjleyin. Ardından, süpernatanı atın.

Peleti iki mililitre ılık ortamda yeniden süspanse edin. Hücreleri bir hemositometreye yükleyin ve iyileşme ve hayatta kalma oranlarını belirlemek için sayın. Çözülmüş hücreleri Y27632 ile bir kültür ortamında bazal membran kaplı plakalar üzerinde kültürleyin.

Üstel fazlarında beşinci günde dondurulan retina pigment epitel hücreleri, çözülmeden sonra daha yüksek bir bağlanma oranı gösterdi. Karakteristik altıgen morfolojilerine göre, diğer zaman noktalarında donmuş hücreler fibroblastik bir fenotipe sahipti. P2 beşinci gün hücreleri, çözülmeden 28 gün sonra daha yüksek ekspresyon ve daha düzgün lokalize hücre belirteçleri gösterdi.

Farklı kriyoprezervasyon ortamlarının, çözülme sonrası yüksek hücre canlılığı ve bağlanma elde etmede eşit derecede iyi performans gösterdiği kaydedildi.

Daha Fazla Video Keşfet

Human Embryonic Stem Cells

Retinal Pigment Epithelial Cells