Başlamak için, berrak böbrek dokusu örnekleri hazırlayın. Ardından, önce lazer gücünü etkinleştirerek ve ardından konfokal kontrol anahtarını devreye sokarak konfokal mikroskobu açın. Ardından, bilgisayarı başlatın, mikroskobu çalıştırın ve konfokal donanımı başlatın.
Kendi kendine testi çalıştırdıktan sonra, konfokal yazılımı başlatın. Uygun lensi seçin. Numuneyi kübik R reaktifinden alın ve konfokal kaba yerleştirin.
Kübik R reaktifinin kurumasını önlemek için üzerini örtün. Örneği görüş alanının ortasına taşıyın ve örnek odaklanana kadar odağı ayarlayın. 3D rekonstrüksiyon için, yakınlaştırma düzlemini floresan görünmeyene kadar bir yönde ayarlayın ve bu konumu üst konum olarak tanımlayın.
Ardından, yakınlaştırma düzlemini hiçbir floresan görünmeyene kadar ters yönde ayarlayın ve bu konumu alt olarak tanımlayın. Taramayı başlatmak için iletişim kutusunun sağ alt köşesindeki çalıştır düğmesine tıklayın. Büyük görüntü rekonstrüksiyonu için, görüş alanını numunenin ortasına yerleştirin ve bunu merkez olarak belirleyin.
İkişer ikişer bir görüş alanı seçin. ND çok işlevli arabirimde, büyük görüntüleri yeniden oluşturmak için Z yığınını seçin. Paneldeki çeşitli seçenekleri gerektiği gibi ayarlayın ve taramayı başlatmak için çalıştır düğmesine basın.
Şeffaf böbreği numune sabitleme adaptörüne yapıştırıcı ile yapıştırın ve böbrek güvenli bir şekilde takılana kadar bekleyin. Ardından böbreği numune kutusuna daldırın ve numune kutusunu mikroskop sistemine kaydırın. Kapağı kapatın.
Konum belirleme arayüzünde, numuneyi uygun bir gözlem konumuna ayarlayın. Toplama arayüzüne geçin, optik yolu ayarlayın. 488 nanometre lazeri seçin.
405-488-561-640 ışık demeti filtresini seçin, ardından optik bölme filtre bloğunu SBS LP 490 olarak ayarlayın. İkinci kamerayı seçin ve sahte rengi yeşile çevirin. Kanal alt menüsünden elde edilen sol ve ardından sağ Z ofsetini girin.
En küçük yakınlaştırmayı seçin ve optik netlik için ince ayar yapın. Tüm organ için XY sınırını ve Z aralığını tanımlayın. Ardından lazer yoğunluğunu ve maruz kalma süresini 10 milisaniyenin altına ayarlayın.
Denemeyi başlat'a tıklayarak işlemi başlatın. Doku aşırı büyükse, mikroskopi yazılımını kullanarak iki veya daha fazla görüntüyü görüntü dikişi ile birleştirin. Yakalanan dosyayı açın ve işlemeyi seçin.
Ardından yöntem ve dikiş, ardından yöntem parametresi. Görüntü birleştirmeyi sonlandırmak için uygula'ya tıklayın. Glomerüllerin etiketlenmesi için intravasküler olarak enjekte edilen fitindex iplikçik kullanıldı.
Temizlenen böbrekte, ışık tabakası mikroskobu veya konfokal mikroskopi kullanılarak glomerüller net bir şekilde gözlenebilir.
