Hücresellikten Arındırılmış Akciğer Hücre Dışı Matriks Hidrojel Oluşumu için Sığır Akciğer Dokularının Toplanması, Decellularizasyonu ve Pepsin Sindirimi

1 Başlamak için, donmuş sığır akciğerdokularını 2 80 santigrat dereceden 3 çıkarın ve oda sıcaklığında çözülmelerine izin verin. 4 Trakea ve kıkırdaklı hava yollarını çıkarmak için steril neşter ve makas 5 kullanarak dokuyu inceleyin, 6 ardından dokuyu küçük parçalar halinde nane edin. 7 Dokuyu üç kez yıkayın 8 ultra saf su ile 9% 2 penisilin ve streptomisin içerir.

10 Kıyılmış doku örneğini 11 bir dakika boyunca %2 iyot çözeltisine daldırın, 12 ardından steril damıtılmış suda art arda iki yıkama 13 gerçekleştirin. 14 Doku parçalarını 50 mililitrelik bir tüpe aktarın 15 15 mililitre işaretine kadar. 16 Tüpün üstüne kadar damıtılmış su 17 doldurun ve sıvı nitrojen içinde iki dakika dondurun.

18 Daha sonra tüpü hemen 10 dakika boyunca 37 santigrat derece su içeren bir behere 19 aktarın. 20 Beş donma çözülme döngüsünden sonra, 21 numuneyi 30 mililitre 22 DNaz çözeltisi içinde bir saat 23 37 santigrat derecede sürekli karıştırarak inkübe edin. 24 Islak hücreden arındırılmış hücre dışı matris örneklerini 25 80 santigrat derecede 24 saat boyunca dondurun.

26 Dondurulmuş numuneleri bir liyofilizatöre 27 aktarın ve tamamen kuruyana kadar üç ila dört gün boyunca bir vakum 28 altında kurutma modunda çalıştırın. 29 Dondurarak kurutmayı takiben, numuneler kuru buz içeren bir öğütme aparatında 30 ince bir toz 31 haline getirilir. 32 Akciğer dokularını% 1 Triton-X-100 ile tedavi edin 33 hafif rotasyon altında üç gün boyunca 34 dört santigrat derecede, 35 çözeltiyi her 24 saatte bir değiştirin.

36 Numuneyi DNaz çözeltisi 37 içinde 37 santigrat derecede bir saat boyunca sürekli karıştırarak inkübe edin. 38 Mendili damıtılmış suyla yıkayın 39 üç gün boyunca sürekli haddeleme altında, 40 suyu her 24 saatte bir yenileyin. 41 Son yıkamadan sonra, daha önce gösterildiği gibi liyofilizasyon ve kriyo frezeleme 42 gerçekleştirin.

43 Mililitrede 15 miligram, 44 toz halinde hücreden arındırılmış hücre dışı matris örneklerini, 45'i mililitre başına bir miligram pepsin çözeltisinde 46, oda sıcaklığında 48 saat boyunca sürekli karıştırarak sindirin. 47 Etkili bir sindirim için çözelti pH'ını ikide tutun. 48 Doku sindirimini 5.000 g'da 10 dakika 49 santrifüjleyin ve süpernatanı çıkarın.