Başlamak için, filtre kağıdını yaklaşık 17 x 20 milimetrelik dikdörtgen bir şekle kesin ve dört köşeyi çıkarın. Ardından, filtre kağıdında yaklaşık yedi x 10 milimetre içi boş merkez oluşturun. Piyasada bulunan bir halkayı esnek bir film katmanına takın ve esnek film katmanında içi boş bir merkez oluşturun.
Hazırlanmış bir halkayı 35 milimetrelik bir Petri kabına yerleştirin. Ön kültürlemeden sonra, yumurtayı kuluçka makinesinden alın ve yumurta kartonu tepsisine uzun ekseni üzerine yerleştirin. Yumurta kabuğunun tüm yüzeyini %70 etanol ile temizleyin ve 15 dakika dinlendirin.
Yumurtayı kısa ekseninde tutun ve dibinden kırın. İçindekileri çıkarmak için yumurtayı 100 milimetrelik temiz bir Petri kabının üzerinde açın. Bir pipet kullanarak, yaklaşık 10 mililitre ince albümini ex ovo kültür için 15 mililitrelik bir tüpe aktarın.
Kültür kabının orta kuyusunu ince albümin ile doldurun. Kağıt mendil kullanarak, embriyonun vitellin zarına tutturulmuş kalın albümini nazikçe çıkarın. Şimdi, filtre kağıdını dikkatlice vitellin membranına yapıştırın ve embriyonun vücut ekseninin filtre kağıdındaki merkez dikdörtgenle hizalandığından emin olun.
Filtre kağıdını çevreleyen zarı makasla kesin. Cımbız kullanarak, izole edilmiş filtre kağıdını yavaşça boyunduruktan eğik bir yönde çekin. Embriyoyu sırt tarafı aşağı bakacak şekilde konumlandırmak için filtre kağıdını ters çevirin.
Tüm filtre kağıdını uzun eksenin bir tarafından dikkatlice yıkama ortamı içeren 100 milimetrelik Petri kabına daldırın. Temiz bir pipet kullanarak, kalan sarıyı çıkarmak için yıkama ortamını filtre kağıdına paralel olarak hafifçe püskürtün. Daha sonra, filtre kağıdını yıkama ortamından dikkatlice çıkarın ve embriyonun kenarlarından fazla ortamı emmek için kağıt mendil kullanın.
Filtre kağıdını embriyo ile birlikte kültür kabına yerleştirin ve embriyonun sırt tarafının aşağı baktığından emin olun. Kültür kabını ex ovo kültür için sahnedeki inkübatöre aktarın. Kültür kaplarını ılık bir yıkama ortamıyla doldurun.
Embriyo istenen bir gelişim aşamasına ulaştığında, embriyo ile birlikte filtre kağıdını bir yıkama ortamı ile doldurulmuş kültür kabına aktarın. Kültür çanağını Brillouin mikroskobunun inkübatörüne yerleştirin. Kalibrasyon işlemi için suyun Brillouin sinyalini ölçün.
Ardından, metanolün Brillouin sinyalini ölçün. Dört kat objektif lensle parlak alan görüntüleme altında, lazer aydınlatma noktasını ikinci somit çiftine ayarlayın. Ardından, 40 kez objektif lense geçin ve lazer noktasının nöral tüpün ortasına ince ayarını yapın.
Lazer ışınının engelini kaldırın ve odak düzlemini ayarlayın. Embriyoyu iki boyutlu bir translasyon aşaması kullanarak tarayın ve ilgilenilen bölgenin bir Brillouin görüntüsünü elde edin. Taramayı tamamladıktan sonra, filtre kağıdını embriyo ile dikkatlice çıkarın.
Embriyodaki fazla yıkama ortamını emmek için kağıt mendil kullanın. Sürekli kültürleme için embriyoyu ince albümin ile doldurulmuş kültür kabına geri yerleştirin. Brillouin görüntü rekonstrüksiyonu için su ve metanol sinyal verilerini yükleyin.
Bölgeyi ayarla'ya tıklayın ve kalibrasyon parametrelerini hesaplamak için dört noktalı bölgeyi seçin. Kalibrasyon sonuçlarını kaydedin. Embriyo tarama verilerini yükleyin ve parametrelerin işlenmesi için başlat'a tıklayın.
Son olarak, 2-B Brillouin görüntüsünü tüm piksellerin Brillouin kaymalarına göre yeniden oluşturun. Nöral plağın somit sayısına ve inkübasyon süresine karşı tahmini uzunlamasına modülündeki Brillouin kayması, nöral tüp kapanması sırasında dokunun Brillouin kaymasında bir artış gösterdi.
