Fare derisini %80 etanol kullanarak sterilize ederek ve fareyi steril bir biyogüvenlik başlığına aktararak başlayın. Kuyruk tendonu çekirdek eksplantlarını izole etmek için, kuyruğu tabanından kesmek için bir neşter kullanın. Ardından, kuyruğun ucunu cımbızla kavrayın ve cildi kırmak için kıpırdatın.
Tendon çekirdeği eksplantlarını ortaya çıkarmak için cımbızı yavaşça çekin. Tendon çekirdeği eksplantlarını standart bir kültür ortamına yerleştirin ve taze bir neşter bıçağı kullanarak kuyruktan ayırın. Daha sonra, tendon fibroblastlarını izole etmek için, bir neşter kullanarak farenin ayağının ortasında enine bir kesi yapın.
Bu insizyonun her iki ucundan, arka bacakların kenarları boyunca kalçalara kadar dik bir kesim yapın. Ardından, ayaktaki deri flebini sabitlemek için cımbız kullanın ve baldır kaslarını kaplayan deriyi soyun. Aşil tendonunu kalkaneus kemiğinden yeni bir neşter bıçağıyla ayırın.
Gevşek ucu cımbızla sabitleyin ve diğer ucunu gastroknemius kasından ayırın. Tendonu PBS'ye aktarın ve kalan kas dokusunu çıkarın. Daha sonra tendonu sindirim ortamına aktarın.
Ardından, kalça eklemini kesmek ve arka bacakları vücuttan ayırmak için makas kullanın. Arka ayakları soğuk PBS'de yıkayın. Neşterle kasları çıkarın ve buz üzerinde bir Petri kabına yerleştirin.
Petri kabı buz üzerindeyken, kas dokusunu bir milimetre küpten daha küçük parçalara ayırın. Kıyılmış kas dokusunu sindirim ortamına aktarın. Kalan kas dokularını çıkardıktan sonra, kalan kemikleri soğuk PBS'de yıkayın.
Kemikleri taze soğuk PBS'ye yerleştirin ve kemik iliğini açığa çıkarmak için epifizleri yavaş yavaş çıkarın. Bir şırıngayı 0.4 x 25 milimetre enjeksiyon iğnesi ile donatın ve 10 mililitre makrofaj kültürü ortamı ile doldurun. Her kemiği 50 mililitrelik plastik bir tüp üzerinde tutun ve iğneyi üstten kemik iliğine yaklaşık bir milimetre derinliğinde sokun.
Şırıngayı boşaltarak kemik iliğini boşaltın.
