Akış sitometrik analizine başlamak için önce 785 nanometre lazeri karanlık alan ölçümleri için beş miliwatt'lık bir güce ayarlayın. Sayısal diyafram açıklığı 0,9 olan 60X lens kullanın. Ardından yüksek hassasiyet ayarını seçin ve hızı düşük olarak ayarlayın.
Kalibrasyon boncuğu stabilitesini sağlamak için, akışkan kutusundaki Oynat düğmesine basın ve keskin ve net görünmesi gereken boncuk görüntülerini inceleyin. Çalışma alanı kutusunda Yeni Dağılım Grafiği'ni seçerek yeni bir dağılım grafiği oluşturun. Ardından, Brightfield kanalında SSC kanal yoğunluğuna karşılık gelen alanı seçin ve numune içinde eşzamanlı olarak çalışan kalibrasyon boncuklarını hariç tutun.
Ardından, Yükle düğmesine basın ve Lactobacilli örneğini içeren bir tüpü tutucuya yerleştirin. Edinme Ayarları kutusuna, örnek adını girin ve veri depolama konumunu belirtin. Toplanacak olay sayısını, genellikle 10.000 ila 20.000 olay aralığında ayarlayın.
Şimdi, Edinme kutusunda bulunan Kaydet düğmesine tıklayarak edinme işlemine başlayın. Belirtilen olay hacmine ulaştıktan sonra işlem duracaktır. Tüpü boşaltmak ve açılır pencerede istendiği gibi tutucudan çıkarmak için Geri Dön düğmesine basın.
İşlemi tüm numuneler için tekrarladıktan sonra, veri toplama tekdüzeliğini korumak için şablonu kaydedin. Veri analizi için, ham dosyayı analiz yazılımına yüklemek için Dosya'ya tıklayın ve rif dosyasını açın. Açılan pencerede, Edinme Analizini Kullan'ı seçin ve ardından Tamam'a tıklayın. Ardından, gradyan kök ortalama karenin histogramını oluşturmak için Yeni Histogram düğmesine tıklayın ve analiz etmek için edinimden popülasyonu seçin.
X Ekseni özelliği altında, Brightfield kanalının Gradyan RMS'sini seçin. Ardından, analiz alanındaki Çizgi Bölgesi Oluştur düğmesine tıklayarak odaklanmamış olayları hariç tutmak için bir geçit yerleştirin. Analiz alanındaki Yeni Dağılım Grafiği düğmesini tıklatarak alanın en boy oranına karşı bir dağılım grafiği oluşturun.
Yeni Dağılım Grafiği penceresinde odaklanılan popülasyonu seçin. Ardından, X Ekseni özelliği için Parlak Alan kanalının alanını seçin. Y Ekseni özelliği için en boy oranını seçin.
Dikdörtgen Oluştur düğmesini kullanarak, toplam olay popülasyonunun alan değerini temel alarak dağılım grafiği üzerine bir geçit çizin. Benzer şekilde, bekarlar ve küçük agrega nüfusu için başka bir kapı çizin. Dosya sekmesini tıklatıp Şablon Olarak Kaydet'i seçerek veri analizinizi şablon olarak kaydedin ve ardından veri analizi dosyasını oluşturmak için aynı şablon altındaki bir sonraki örnek dosyayı açın.
Toplam boyut dağılımını ölçmek için, toplama olayları popülasyonunun alanının histogramını çizerek başlayın. Dosyaya tıklayarak ve Şablon Olarak Kaydet seçeneğini seçerek veri analizini kaydedin. Kaydettikten sonra, veri analizi dosyası için aynı şablonun altındaki bir sonraki örnek dosyayı açın.
LGG ve L. paracasei'de tek hücreli, küçük agregalı, büyük agregalı ve zincirli olarak gözlenmiş, ancak zincirler ile daha büyük agregalar arasında ayrım yapmak mümkün olmamıştır. Fermente edilebilir veya fermente edilemeyen şekerlere yanıt olarak farklı LAB suşlarının agregasyon özelliklerinde önemli farklılıklar gözlenmiştir.
