Mililitre başına yaklaşık 10 miligramlık bir protein konsantrasyonu elde etmek için memeli hücre kültürlerinden veya dokularından elde edilen mitokondriyal fraksiyonları mavi doğal numune tamponunda yeniden süspanse ederek başlayın. Mitokondriyal zarları çözündürmek için, bir gram mitokondriyal protein başına dört gram digitonin oranı elde etmek için digitonin ekleyin. Nazik pipetleme ile karıştırın ve beş dakika buz üzerinde inkübe edin.
Çözünmeyen materyali çıkarmak için süspansiyonu 20.000 G'de bir mikrofüje 25 dakika boyunca dört santigrat derecede santrifüjleyin. Süpernatanı yeni bir tüpte toplayın, ardından ilk yeniden süspansiyon hacminin üçte birine eşdeğer olan %5 Coomassie blue G-250 ekleyin ve pipetleme ile karıştırın. Elektroforez aparatının üst bölmesine soğuk katot A tamponu ve alt bölmeye anot tamponu ekleyin.
30 ila 100 mikrogram mitokondriyal proteini bir poliakrilamid jel üzerindeki kuyucuklara yükleyin. Elektroforezden sonra jeli plastik bir kutuya koyun. Jeli kaplamak için yeterli miktarda uygun jel aktivitesi test çözeltisi ekleyin ve ışıktan koruyarak hafifçe çalkalayarak oda sıcaklığında inkübe edin.
Uygun bantlar geliştiğinde, tahlil solüsyonunu çıkarın. Jeli 30 dakika boyunca %40 metanol ve %10 asetik asit ile sabitlemeden önce iki kez damıtılmış suyla yıkayın. Jel aktivitesi tahlil analizi, farelerde ve insan hücrelerinde farklı süper kompleksin montaj modellerini ortaya çıkardı.
Serbest kompleks 1 fare hücrelerinde gözlenirken, insan mitokondrilerinde tespit edilemedi. Kompleks 4 modelleri, insan hücre hatlarında benzerdi, ancak SCAF1'in mutant bir varyantı nedeniyle fare hücre hatlarında değişiklik gösterdi.
