Başlamak için, kalsiyum magnezyum içeren PBS'de glutaraldehit çapraz bağlı jelatin kaplı kapak kızaklarını bir orbital çalkalayıcı üzerinde yaklaşık beş kez durulayın. İlk üç durulama sırasında, glutaraldehitin iyice durulanmasını sağlamak için steril bir cımbız kullanarak kapak fişlerini kaldırın. Ardından, fare REC'lerinin kültür ortamını steril, filtrelenmiş askorbik asit ile desteklenmiş taze ortamla değiştirin.
15 günlük tedaviden sonra, hücreleri kalsiyum magnezyum içermeyen PBS ile durulayın. Hücreleri 250 mikrolitre ılık hücre hücreden arındırma tamponunda iki ila üç dakika inkübe edin. Bir faz kontrast mikroskobu altında hücrelerin hücreden arındırılmasını onaylayın.
REC tarafından salgılanan subendotelyal matrisi bozmadan tamponu nazikçe pipetleyin. Ardından her bir kuyucuğa 0,5 mililitre PBS ekleyin. PBS'yi çıkardıktan sonra, 200 mikrolitre RNase içermeyen DNase ekleyin.
Tüm hücresel kalıntıları gidermek için karışımı 37 santigrat derecede 30 dakika inkübe edin. Ardından, Macroscale fibröz subendotelyal matrisi bir faz kontrast mikroskobu altında görüntüleyin. Ardından, daha ince nano ölçekli matris liflerini 100x büyütmede görüntülemek için konfokal bir mikroskop kullanın.
İnsan veya fare REC'lerinin 10 günlük veya 15 günlük kültürlerinin decellularizasyonunu takiben cam örtü kaymalarında subendotelyal matriks agregatları gözlendi. Deselüler matrislerin konfokal mikroskobu, yoğun bir nano fibriller kollajen-IV ve fibronektin matrisi gösterdi.
