Başlamak için, diseksiyon mikroskobu altında bir parça yağlı kağıda resmi ve sabit bir fare gözü yerleştirin. Bir çift mikro forseps ile kas ve optik sinirin kalıntılarını tutun. Ardından gözü, kornea bir tarafa bakacak şekilde yönlendirin.
Şimdi limbusun arkasında ve ona paralel olarak bir ila iki milimetre uzunluğunda bir kesi yapmak için cerrahi bir bıçak kullanın. Ön segment arka uçtan ayrılana kadar gözü yerinde tutarken bıçakla aşağı doğru bir kuvvet uygulayın. Ardından ön segmenti ve lensi atın.
Arka segmenti PBS ile doldurulmuş altı santimetrelik bir tabağa aktarın. Optik siniri mikro forseps ile tutarken aynı anda retinayı çıkarmak için bir mikro spatula kullanın. Retinayı durulamak için, çift damıtılmış su ile doldurulmuş altı oyuğu olan 12 oyuklu bir plakanın kuyusuna aktarın.
Hafif çalkalamaya neden olmak için suyu üflerken retinanın yanındaki suyu dikkatlice yukarı ve aşağı pipetlemek için bir P1000 pipeti kullanın. Ardından, retinayı ikinci kuyucuğa aktarmak için ters çevrilmiş bir cam pipet kullanın. Retinayı sindirmek için, durulanmış retinayı ters çevrilmiş bir cam pipet ile 12 oyuklu bir plakada tripsin çözeltisine aktarın.
Tripsinle ıslatılmış bir P200 pipet ucunu optik sinirin üzerine ortalayın. Ardından, vasküler olmayan dokuyu ayırmak için tüm vasküler ağı nazikçe yukarı ve aşağı pipetleyin. Şimdi, retina damar sistemini altı oyuklu bir plakada çift damıtılmış su içeren bir kuyuya aktarmak için tripsin içinde önceden durulanmış ters çevrilmiş bir cam pipet kullanın.
Plakayı döndürün, ardından kalan vasküler olmayan dokuyu çıkarmak için ters tripsin ile durulanmış bir cam pipetle damar sistemini yukarı ve aşağı pipetleyin. Retina damar sistemini, yüklü bir yüzey mikroskobu slaytı üzerinde işaretli bölgenin merkezine dikkatlice aktarın. Ardından, bir kenardaki fazla suyu dikkatlice çıkarmak için bir P200 pipeti kullanın.
Kalan suyun buharlaşmasını sağlamak için sürgüyü ön tarafa yakın bir biyogüvenlik kabinine yerleştirin. Damar sistemi neredeyse kuruduğunda, bir faz kontrast mikroskobu altında aktarın. Damar sistemini dikkatlice yeniden sulandırmak için işaretli bölgenin bir tarafına yavaşça çift damıtılmış su eklemek için bir P200 pipeti kullanın.
İzole retinal vaskülatür fiksasyonu, AFM ölçümleri için uygun yapısal olarak sağlam ve yeterince dayanıklı doku ile sonuçlandı. Buna karşılık, sabitlenmemiş veya kısa süreli sabit gözlerden izole edilen retina damarları parçalandı ve çöktü.
