Başlamak için, kültürlenmiş fare yumurtalık epitel kanseri hücrelerini alın. Kültür ortamını Petri kaplarından çıkarın ve DPBS ile iki kez yıkayın. FBS ve penisilin-streptomisin çözeltisi içermeyen 20 mililitre Dulbecco'nun Modifiye Eagle Medium'unu ekleyin.
37 santigrat derece ve% 5 karbondioksitte 48 saat inkübe edin. Daha sonra hücre kültürü süpernatantını 15 santimetre çapında 20 Petri kabından toplayın. Dört santigrat derecede 10 dakika boyunca 300 G'de santrifüjleyin ve süpernatanı toplayın.
Süpernatanı dört santigrat derecede 10 dakika boyunca 2.000 G'de santrifüjleyin ve hücresel kalıntıları gidermek için süpernatanı toplayın. Şimdi vakum pompasını açın ve vakum filtrasyon sisteminin hava girişine bağlayın. 0,22 mikrondan daha büyük vezikülleri veya safsızlıkları gidermek için süpernatanı 0,22 mikron polietersülfon zarından süzün.
100 kilodalton ultrafiltrasyon tüpünün iç borusuna 15 mililitre filtrelenmiş süpernatan ekleyin. Dört santigrat derecede 10 dakika boyunca 3.500 G'de santrifüjleyin. Ardından sıvıyı dış tüpten çıkarın.
Ardından, sıvıyı iç tüpten toplayın. İç tüpe bir mililitre DPBS ekleyin. Eksozomları yeniden süspanse etmek için tekrar tekrar pipetleyin ve ardından toplayın.
Sıvıyı 10.000 G'de 60 dakika boyunca dört santigrat derecede santrifüjleyin. Süpernatanı altı mililitrelik hızlı bir santrifüj tüpüne aktarın ve bir ısı mühürleyici ile kapatın. Süpernatanı iki saat boyunca ultrasantrifüj ettikten sonra tüpü kesin.
Süpernatan çıkarıldıktan sonra, eksozom çözeltisini elde etmek için peleti 100 mikrolitre DPBS'de yeniden süspanse edin.
