Manyetik nanoparçacık, anti-mikroRNA 10b enjeksiyonundan 24 saat sonra, fareyi tartın ve kilogram başına 150 miligramlık bir dozaj için uygulanacak d-lusiferin hacmini hesaplayın. Çözeltiyi doğrudan ışıktan koruyan hacme sahip 28 gauge bir şırınga hazırlayın. Anestezi uygulandıktan sonra, cerrahi bölgenin daha fazla yaralanmasını önlemek için fareyi nazikçe fırçalayın ve d-lusiferin dozunu intraperitoneal olarak enjekte edin.
Farenin iyileşmesine izin verin ve görüntülemeden önce 10 dakika bekleyin. Bir in vivo görüntüleme sistemi veya IVIS tarayıcı hazırladıktan sonra, siyah düşük floresan matı görüntüleme sahnesine yerleştirin ve görüntüleme için burun konisi dizisini yapılandırın. Yazılımda, görüntüleme sihirbazına tıklayın.
Ardından, biyolüminesans görüntülemeyi ve ardından filtreyi açmayı seçin. Bir sonraki ekranda, görüntüleme konusunu ve görüş alanını seçin. Anestezi uygulanmış fareyi IVIS tarayıcıda yüzüstü pozisyonda yerleştirin.
Sırayı al'a tıklayın ve minimum 3000 sayım sinyal eşiği ile otomatik pozlama ayarlarını kullanarak, lusiferaz etiketli U-251 glioblastoma hücrelerinin lokalizasyonu için bir görüntü yakalayın. Ardından, görüntüleme sihirbazında floresansı ve ardından epi aydınlatmalı filtrelenmiş çifti seçin. Bir sonraki ekranda, probu (Cy5.5) seçin.
Görüntüleme konusunu ve görüş alanını seçin. Minimum sinyal eşiği 6.000 sayım olan otomatik pozlama ayarlarını kullanarak, manyetik nanopartiküllerin, anti-mikroRNA 10b'nin lokalizasyonu için bir görüntü yakalayın. Anestezi uygulanmış fareyi yüzüstü MRI yatağına yerleştirin.
Bir ısırma çubuğu ve kulak çubukları kullanarak tarama için kafayı hareketsiz hale getirin ve konumlandırın. Yağlanmış rektal sıcaklık probunu takın ve solunum ve sıcaklık izlemenin çalıştığından emin olun. Fare yatağındaki mandalları bobin üzerindeki deliklere takarak fare beyin bobinini başın üzerine yerleştirin ve tarama sırasında hareketi azaltmak için bobini yerine bantlayın.
Vücut ısısını korumak için farenin üzerine küçük bir ılık su sirkülasyon pedi yerleştirin. Fareyi ve görüntüleme yatağını tarama için uygun konuma getirin. Edinme yazılımında, MRI bobinlerini ayarlamak ve eşleştirmek için yalpalama kurulum adımını başlatın.
İzin ortalandığından ve mümkün olduğunca derin olduğundan emin olun. Beynin üç düzlemli bir lokalizatör taramasını edinin. Aşağıdaki parametreleri kullanarak, tümörü tespit etmek için iki boyutlu T2 ağırlıklı taramalar elde edin.
Harita şim yardımcı programını kullanarak lokalize bir şim hesaplamak için tüm beynin bir b0 haritasını edinin. Nanopartikülleri görselleştirmek için üç boyutlu T2 yıldız ağırlıklı görüntüler kullanın. Aşağıdaki parametrelerle, taramayı tümör üzerinde konumlandırmak için iki boyutlu T2 ağırlıklı görüntüyü referans olarak kullanarak daha fazla nanopartikül görüntüleme için bir T2 yıldız haritası elde edin.
Beş milisaniyelik yankı zaman aralığı ile 10 pozitif yankı görüntüsü elde edin. Deneysel son noktada, fareyi tartın ve kilogram başına 150 miligramlık bir dozaj için uygulanacak d-lusiferin hacmini hesaplayın. Daha önce açıklandığı gibi enjeksiyondan 10 dakika sonra canlı biyolüminesans görüntüleme yapın.
Ötenazi uygulanmış fareden çıkarılan beyinle birlikte Petri kabını IVIS tarayıcısına yerleştirin. İn vivo görüntüleme ile aynı çekim ayarlarını kullanarak beyni hem biyolüminesans hem de floresan modaliteleriyle görüntüleyin. Manyetik nanopartiküller anti-mikroRNA 10b enjekte edilen farelerdeki Cy5.5 floresan ve biyolüminesans sinyalleri, nanopartiküllerin tümöre verildiğini gösteren net bir kolokalizasyon gösterirken, kontrol fareleri floresan sinyali göstermedi.
Ex vivo floresan görüntüleme, nanopartiküllerin karaciğer ve böbrekler gibi ana klerens organlarında lokalizasyonunu gösterdi. T2 ağırlıklı MRG sinyalinde karakteristik bir azalma, manyetik nanopartiküllerin, bir MRG kontrast maddesi olarak anti-mikroRNA 10b'nin kan-beyin bariyerini geçme potansiyelini ve tümör bölgesinde birikmesini gösterir.
