Bakteri Topluluklarında Glikoz Metabolizmasını Araştırmak için OPTIR-FISH için Numune Hazırlama

Başlamak için standartlaştırılmış kalsiyum florür slaytları alın. 15 dakika boyunca% 70 etanole batırın ve iki kez deiyonize su ile durulayın. Temiz slaytları %0.1 poli L lizin çözeltisine aktarın ve gece boyunca dört santigrat derecede inkübe edin.

Daha sonra slaytları deiyonize su ile durulayın ve kurumasını bekleyin. Daha sonra, hazırlanan hücre örneklerini ışıktan koruyarak oda sıcaklığında çözdürün. Numune kurutma sırasında PBS'den aşırı tuz kristallerini önlemek için, çözülmüş hücreleri deiyonize su ile iki kez yıkayın.

10 dakika boyunca 14.000 G'de santrifüjleyin ve süpernatanı çıkarın. Orijinal deiyonize su hacmini hücrelere yeniden verin ve onları nazikçe girdaplayın. Yıkadıktan sonra, bakteri hücresi örneklerini konsantre etmek ve süpernatanı çıkarmak için hücreleri 14.000 G'de 10 dakika santrifüjleyin.

Kalan çözeltiyi yaklaşık 30 saniye boyunca hafifçe girdaplayın ve bu çözeltiden bir ila iki mikrolitre hazırlanan kalsiyum florür lamı üzerine uygulayın.