Bu protokol, Kurumsal Hayvan Bakım tarafından onaylanmış ve Florida Üniversitesi&#39;nde Komitesi (IACUC) kullanın ve &quot;Laboratuvar Hayvanları Bakım ilkesi&quot; (NIH yayın No 86-23, 1985 revize) ile uyum içerisindedir. 1. Malzemeler <ol><li> Hayvanlar: cerrahi anda 20-26 gram ağırlığında Erkek C57BL / 6 fareler (Harlan Laboratuvarları, Indianapolis, IN, ABD). </li><li> Anestezi: <ol><li> Anestezi makinesi: VetEquip inhalasyon anestezi sistemi (VetEquip A.Ş., Pleasanton, CA, USA). </li><li> Anestezik Soluma: İsofluranın (Baxter İlaç, Deerfield, IL). </li></ol></li><li> Cerrahi araçları: SUPERCUT Iris makas, düz (Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD); Vannas mikro-makas, düz (Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD); Dumont forseps (ince uçlu, 45 ° bükülmüş ipuçları, Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD); Bipolar koagülasyon birimi (Yüksek Frekanslı Desikatör 900, Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD), mikro damar klip (Dünya Hassas Aletler A.Ş., Sarasota, FL, ABD) </li><li> Cerrahi malzemeler: Steril pamuk ipuçları; Mendil, tül süngerler; Sütür (dikiş 7-0 İpek, Ethicon, Inc, Somerville, NJ, ABD); Doku yapıştırıcı (Vetbond, 3M Company, St Paul, MN, ABD); Cerrahi fırçalayın : Bethadine,% 70 etanol ve steril salin% 0.9; Göz merhemi (Puralube Veteriner Merhem, Pharmaderm, Melville, NY, ABD). </li><li> Tıkanıklığı sütür MCAO için hazırlanması: <ol><li> MCA oklüzyonu Filament: 7-0 cerrahi naylon monofilament sütür (Ethicon, Inc, Somerville, NJ, ABD). </li><li> Isı kaynağı sütür ucu (Termal Koter Birimi, Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL) küntleşme. </li><li> Sıvı silikon kauçuk (Silikon RTV yapıştırıcı, Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD). </li></ol></li><li> / Cerrahi mikroskop Diseksiyon (Leica Stereo Mikroskop MZ6). <ol><li> Fiber optik aydınlatma (Fiber Optik aydınlatma FO1-150, TechniQuip Corp Livermore, CA, USA). </li></ol></li><li> Lazer Doppler flowmetre (PeriFlux Sistemi 5000 Perimed, Stockholm, İsveç). <ol><li> Esnek mikrotip (MT B500-0 Düz mikrotip, Perimed, Stockholm, İsveç) </li></ol></li><li> Isı parametreleri: <ol><li> Rektal ısı monitörü (BAT-12, Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL). </li><li> Termal battaniye (T / POMPA, TP600, Gaymar, NY, ABD). </li></ol></li><li> Boyama ve hacim infarkt kantitatif ölçümü: <ol><li> % 2 solüsyon 2,3,5-triphenyltetrazolium klorür (2% TTC, Sigma-Aldrich Co-St Louis, MO, ABD). </li><li> Fareler beyin matris dilimleme makinesi (Zivic-Miller Lab. Inc, Allison Park, PA, USA). </li><li> Dijital fotoğraf makinesi (V1253, Kodak Co, Rochester, NY, ABD). </li><li> Görüntü J yazılımı (ImageJ 1.42q yazılımı, ABD Ulusal Sağlık Enstitüleri, Bethesda, MA, ABD). </li></ol></li></ol> 2. Cerrahi öncesi adımlar <ol><li> Ameliyat öncesinde, farelerin, su ve kemirgen yemi ücretsiz erişim ile 12:12 ışık / karanlık döngüsü altında muhafaza edilir. </li><li> (7-0 kuru izin MCAO için Dikişler, ısı ve ucundan sıvı silikon kauçuk kaplama dikiş şaft 3-4mm ile sütür ucu 1-2mm küntleşme tarafından hazırlanan; ucu çapı, 0.20-0.25mm; kaplama uzunluğunda, 3-4mm; dikiş uzunluğu 11-13mm). Sterilite, söz konusu adımların tüm korunmuş olması gerekir. </li><li> Fare ağırlığında sonra, anestezi indüksiyon odasında izofluran% 4 ile indüklenen ve% 30 O 2 ve% 70 N 2 O gaz karışımı bir yüz maskesi ile% 1.5-2 izofluran ile prosedür boyunca sürdürülmüştür. </li><li> Fare (termal battaniye) sıcaklık kontrollü bir işletim yüzey üzerinde duran bir gazlı bez üzerine yüzükoyun pozisyonda yerleştirilir; baş kürk traş. </li><li> Yağ oftalmik merhem iki göz için uygulanır ve göz kapaklarının cerrahi işlemi sırasında göz kuruma önlemek için kapalı. </li><li> Nasion ve cilt esnek bir mikrotip (0.5mm çap MT B500-0 Düz mikrotip) yapıştırmayın yanal çekilir üstün ense hattan kalvaryumda örten cilt üzerinde orta hat insizyonu (1 cm) yapılır. Mikrotip lazer Doppler flowmetre MCA topraklarında kan akışını izlemek için sağ parietal kafatası yüzeyi (1 mm arka ve bregma lateral 5 mm) dik olarak yerleştirilir. </li><li> Hayvan supin pozisyonda açılmadan önce esnek mikrotip kafatasına sıkıca takılı olduğundan emin olun. Hayvanın boyun yumuşak bir yastık yerleştirilir ve burun burun konisi anestezi cihazların tutulur. Bu esnek mikrotip için yeterli alana sahip neden olacaktır. </li><li> Rektal ısı probu 37 ± 0.5 ° C sabit bir hayvan çekirdek sıcaklığını korumak için eklenir </li><li> Her iki forepaws ve hindpaws işletim platformu yüzeye bantlanmış ve kuyruk rektal tüp bantlanmış. </li> &lt;/ Ol&gt; 3. MCA oklüzyonu cerrahisi: <ol><li> Operasyon mikroskobu altında, orta hat boyun insizyonu gevşek deri hafifçe kaldırarak manubrium ve çene arasındaki makas ile yapılır. </li><li> In situ sol sol bezi ile eşleştirilmiş yatan submandibular bezlerin açık açık ayrılır. Sağ submandibular bezi cranially retrakte ve sternokleidomastoid kas ile birlikte güvence altına alınmıştır. </li><li> Carotica&#39;nın kapsayan omohyoid kas maruz kalan bölümü dikkatle manyetikler ile ayrılmıştır. </li><li> Sağ karotis arter (CCA), vagus siniri ve kılıf (CCA lateralinde bulunan) dikkatlice ayrılmış ve izole edilmiştir. </li><li> Bundan sonra, farklı MCA oklüzyonu gerçekleştirmek için sık sık kullanılan 2 cerrahi yöntemler : </li></ol> Koizumi Kullanıcı 4 yöntem <ol class="lroman" type="i"><li> Üç gevşek yakalı sütür (7-0 ipek) sağ CCA etrafında hazırlanmıştır. </li><li> Eksternal karotid arter (ECA), tespit izole ve koterize (bifurkasyon için distal 2-3mm). Bu daha sonra mikro makas ile ayrılabilir. Koterizasyon yerinde yanlışlıkla periferik hasarları önlemek için, güç, güç düğmesini kullanarak 1 ayarlanmış olmalıdır. Bu tüm cauterizations için tutarlı. </li><li> Yeterli gerilim, kan akımı (kalıcı ligasyonu) CCA kapamak için en proksimal yaka dikiş uygulanır. Akış tıkanma temel kortikal perfüzyon değerlerinin ~ 50% düşüş tarafından doğrulanmadı. </li><li> Sonra bir gemi klibi arteriyotomi zaman retrograd akışını önlemek için sadece CCA çatallanma önce yerleştirilir. </li><li> Bir arteriyotomi mikro-makas (yakın ligasyonu) ile proksimal bağlandı dikiş ve CCA damar klip arasında yapılır. </li><li> Arteriyotomi ısı köreldiğini silikon kaplı 7-0 naylon sütür ile tanıştırdı ve damar klip ulaşana kadar gelişmiş. Arter duvarında travmatize dikkatli, CCA üzerinden akış kaçağı önlemek için arteriyotomi ve damar klip arasında CCA çevresinde kalan 2 gevşek yakalı sütür hafifçe sıkılır, daha sonra damar klip çekilmiş. </li></ol> Longa Kullanıcı 3 yöntem <ol class="lalpha" type="a"><li> ECA, tespit koterize (1 gücü ile), (dilli ve maksiller arterlerin ayrılmasından yakınında) mümkün olduğu kadar disseke ve mikro-makas ile bölünmüş. </li><li> İki gevşek yakalı sütür (7-0 ipek) CCA çatallanma sadece yukarıda proksimal ICA çevresinde hazırlanmıştır. </li><li> CCA geçici bir gemi klibi ile kapatılır. Akış tıkanma temel kortikal perfüzyon değerlerinin ~ 50% düşüş tarafından doğrulanmadı. </li><li> Sonra ICA arteriyotomi zaman retrograd akışını önlemek için iki gevşek yakalı sütür üzerinde bir gemi klip ile geçici olarak kapatıldı. </li><li> Güdük yansıyan ECA yakın bir arteriyotomi mikro-makas kullanılarak yapılır. </li><li> ECA arteriyotomi ısı köreldiğini silikon kaplı 7-0 naylon sütür ile tanıştırdı ve ICA uygulanan damar klip ulaşana kadar gelişmiş. Proksimal ICA 2 gevşek yakalı sütür, arter duvarındaki travmatize yeterince ilgi, ICA reflü kan akışını önlemek için proksimal ICA etrafında hafifçe sıkılır, daha sonra damar klip çekilmiş. </li></ol> Prosedürün geri kalanı büyük ölçüde yakınsak: <ol><li> Hafif bir direnç hissedilir kadar kapatılmasıy sütür internal karotis arter (ICA) kafa tabanına doğru yavaş yavaş ilerlemiştir. Serebral kan akımı değeri başlangıca göre bir yüzdesi (% 80) olarak eşzamanlı açılan lazer Doppler flowmetre tarafından teyit edilir. 2 yaka sütür eklenen filament etrafında sıkılır. </li><li> Kapatılmasıy dikiş geçici serebral iskemi deneyleri için, 45 dakika sonra hafifçe geri çekilir. Bu zaman noktası, çeşitli deneysel amaçlar için değiştirilebilir. </li><li> Arteriyotomi sitesinde dikiş filament çekilme sonra, ameliyat sonrası kanama önlemek için kapalı. Koizumi yöntemi, bu güvenli CCA etrafında yakalı sütür sıkma içerir. Longa tekniği, ECA üssünde arteriyotomi sitesi koterize, proksimal ICA yakalı dikişlerle sonra gevşedi ve karotis akışı geri kaldırılır. </li><li> Insizyon kapatmak için, submandibular bezi ve SCM ameliyat alanın üzerine serilir. Yara kenarları sonra servikal doku yapıştırıcısı ve kafa derisi alanları ile yaklaştırılır. Alternatif olarak, emilebilen bir sütür veya metal zımba, hayvanın uzun süreli sağkalım amaçlanan, özellikle yara kapatmak için kullanılan olabilir. </li><li> Kesi kapatılmasından sonra, hayvan hacmi ikmal olarak subkutan 1 ml ılık tuzlu su alır. Iyileşme döneminde hayvanın ağrı ve rahatsızlık en aza indirmek için uygun analjezik doz (0.05-0.1 mg / kg &#39;yani Buprenorfin) kullanılmalıdır. Animal cerrahi seti kaldırıldı ve yumuşak gıda ve su ücretsiz, kolay erişim, hipotermi önlemek için sıcak bir kurtarma alan / kafes yerleştirilir. </li></ol> 4. Post-Op nörolojik değerlendirme 3 aşağıdaki gibi, hayvan toplam bilinç kavuşur sonra nörolojik defisit basit bir ölçek (beş puanlık bir ölçek) tarafından değerlendirilmelidir. <ol start="0"><li> gözlemlenebilir açıkları yok </li><li> kontralateral forepaw (hafif fokal nörolojik defisit) genişletmek için başarısızlık </li><li> infarkt için kontralateral bir yön çizerek (orta fokal nörolojik defisit) </li><li> infarkt kontralateral bir yön düşen (ciddi fokal nörolojik defisit) </li><li> spontan hareket olmadan bilinç depresif </li></ol> 5. Boyama ve beyin infarkt hacmi kantitatif ölçümü <ol><li> MCA reperfüzyon 24 saat sonra, hayatta kalan fare,% 4 isoflorane ile derin anestezi tartılır ve onaylanmış protokole göre kurban. </li><li> Beyin dikkatle kaldırılır ve bir fare beyin matris dilimleyiciyi yerleştirilir ve 2 mm aralıklarla tüm serebrum koronal kesitli. </li><li> Bölümleri TTC 37 fosfat tamponlu salin (PBS)% 2 ° C de 20 dakika boyunca dalmış. TTC boyama sonra, infracted alan kırmızı tuğla (canlı) doku (Şekil 1) bitişik bir beyaz (boyasız) doku olarak gösterilmiştir. </li><li> Seri bölümleri, dijital kamera ve görüntü J programı ile ölçülür infarkt alanı kullanılarak fotoğraflandı. </li><li> Infarkt alanı (beyaz, boyasız), ipsilateral hemisferde (lekeli, tuğla, beyaz ve kırmızı) alanında ve kontralateral hemisferde (kırmızı tuğla, vitray) alanında, her bölüm için ölçülür. Hacmi, tüm bölümlerde temsilcisi alanlarda toplayarak ve kesit kalınlığı ile çarpılarak hesaplanır. Ödemi düzelttikten sonra, enfarktüs hacmi 9 aşağıdaki gibi hesaplanır: Düzeltilmiş İnfarkt Hacmi (CIV),% = [kontralateral hemisfere hacmi - (ipsilateral yarımkürede hacmi - infarkt hacmi)] / kontralateral yarımkürede hacmi x 100 </li></ol> 6. Temsilcisi Sonuçlar Geçici serebral iskemi kurmak için sol CCA ile MCA oklüzyon ve reperfüzyon sonra, hayvanlar kurban ve onların koronal kesitli beyinleri infarkt hacmi (Şekil 1) değerlendirmek için TTC ile boyandı. <img src="files/ftp_upload/2879/2879fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1 fareler TTC-lekeli seri koronal beyin bölümler (2 mm) MCA oklüzyonu tabi.

<ol>
	<li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommendations+on+stroke+prevention,+diagnosis,+and+therapy.+Report+of+the+WHO+Task+Force+on+Stroke+and+other+Cerebrovascular+Disorders.">Recommendations on stroke prevention, diagnosis, and therapy. Report of the WHO Task Force on Stroke and other Cerebrovascular Disorders.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 20, 1407-1431 (1989).</li><li>Lloyd-Jones, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+disease+and+stroke+statistics--2009+update:+a+report+from+the+American+Heart+Association+Statistics+Committee+and+Stroke+Statistics+Subcommittee.">Heart disease and stroke statistics--2009 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee.</a> Circulation. 119, e21-e181 (2009).</li><li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 20, 84-91 (1989).</li><li>Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema.+I.+A+new+experimental+model+of+cerebral+embolism+in+rats+in+which+recirculation+can+be+introduced+in+the+ischemic+area.">Experimental studies of ischemic brain edema. I. A new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area.</a> Jpn J Stroke. 8, 1-8 (1986).</li><li>Clark, W. M., Lessov, N. S., Dixon, M. P., Eckenstein, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monofilament+intraluminal+middle+cerebral+artery+occlusion+in+the+mouse.">Monofilament intraluminal middle cerebral artery occlusion in the mouse.</a> Neurol Res. 19, 641-648 (1997).</li><li>Fujii, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain-related+differences+in+susceptibility+to+transient+forebrain+ischemia+in+SV-129+and+C57black/6+mice.+.">Strain-related differences in susceptibility to transient forebrain ischemia in SV-129 and C57black/6 mice. .</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 28, 1805-1810 (1997).</li><li>Bederson, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+2,3,5-triphenyltetrazolium+chloride+as+a+stain+for+detection+and+quantification+of+experimental+cerebral+infarction+in+rats.">Evaluation of 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride as a stain for detection and quantification of experimental cerebral infarction in rats.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 17, 1304-1308 (1986).</li><li>Qi, X., Hosoi, T., Okuma, Y., Kaneko, M., Nomura, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sodium+4-phenylbutyrate+protects+against+cerebral+ischemic+injury.">Sodium 4-phenylbutyrate protects against cerebral ischemic injury.</a> Mol Pharmacol. 66, 899-908 (2004).</li><li>Barone, F. C., Knudsen, D. J., Nelson, A. H., Feuerstein, G. Z., Willette, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+strain+differences+in+susceptibility+to+cerebral+ischemia+are+related+to+cerebral+vascular+anatomy.">Mouse strain differences in susceptibility to cerebral ischemia are related to cerebral vascular anatomy.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 13, 683-692 (1993).</li><li>Tureyen, K., Vemuganti, R., Sailor, K. A., Dempsey, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ideal+suture+diameter+is+critical+for+consistent+middle+cerebral+artery+occlusion+in+mice.">Ideal suture diameter is critical for consistent middle cerebral artery occlusion in mice.</a> Neurosurgery. 56, 196-200 (2005).</li><li>Barber, P. A., Hoyte, L., Colbourne, F., Buchan, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temperature-regulated+model+of+focal+ischemia+in+the+mouse:+a+study+with+histopathological+and+behavioral+outcomes.">Temperature-regulated model of focal ischemia in the mouse: a study with histopathological and behavioral outcomes.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 35, 1720-1725 (2004).</li><li>Kapinya, K. J., Prass, K., Dirnagl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isoflurane+induced+prolonged+protection+against+cerebral+ischemia+in+mice:+a+redox+sensitive+mechanism?.">Isoflurane induced prolonged protection against cerebral ischemia in mice: a redox sensitive mechanism?.</a> Neuroreport. 13, 1431-1435 (2002).</li></ol>

Yazarlar, herhangi bir çıkar çatışmasından olduğunu beyan ederim.

MCAO model fare türlerinde serebral iskemi çoğaltır kurulmuş bir model. Bu model ilk sıçanlarda kullanılır ve bundan sonra farelere adapte oldu. Kraniektomi kaçınmak, kan-beyin bariyeri geçirgenliği ve intrakranial basınç cerrahi manipülasyonu etkisini ortadan kaldırmak için bu tekniğin bir avantaj. Ancak, ilgili gerilim farklılıkları 10, 6, oklüzyon vücut ısısı 12, anestezi 13 sütür ucu 11, süresi büyüklüğü ve diğer faktörler gibi pek çok...

<table border="1"><tbody><tr><th> Reaktifin Adı </th><th> Tip </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th><th> Yorumlar (isteğe bağlı) </th></tr><tr><td> Erkek C57BL / 6 fareler </td><td> Hayvan </td><td> Harlan Laboratuvarları, Indianapolis, IN, ABD </td><td></td><td> 20-26 gr </td></tr><tr><td> Diseksiyon mikroskobu </td><td> Mikroskop </td><td> Leica Stereo Mikroskop MZ6 </td><td></td><td> 6.3:1 zum </td></tr><tr><td> Fiber optik aydınlatma </td><td> Aydınlatıcı </td><td> TechniQuip Corp, Livermore, CA, USA </td><td></td><td> FO1-150 </td></tr><tr><td> İsofluranın </td><td> Anestezi </td><td> Baxter İlaç, Deerfield, IL </td><td> 1001936060 </td><td></td></tr><tr><td> Iris makas düz SUPERCUT </td><td> Cerrahi araç </td><td> Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD </td><td> 14218 </td><td></td></tr><tr><td> Vannas mikro-makas, düz </td><td> Cerrahi araç </td><td> Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD </td><td> 14003 </td><td></td></tr><tr><td> Dumont ince ucu forseps </td><td> Cerrahi araç </td><td> Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD </td><td> 503290 </td><td></td></tr><tr><td> Gemi klip </td><td> Cerrahi araç </td><td> Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD </td><td> 14120 </td><td></td></tr><tr><td> Yüksek Frekans Desikatör 900 </td><td> Cerrahi araç </td><td> Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD </td><td> 500397 </td><td></td></tr><tr><td> 7-0 cerrahi naylon monofilament sütür </td><td> Dikiş </td><td> Ethicon, Inc Somerville, NJ, ABD </td><td> 1647G </td><td> Oklüzyonu Sütür </td></tr><tr><td> 7-0 cerrahi İpek sütür </td><td> Dikiş </td><td> Ethicon, Inc Somerville, NJ, ABD </td><td> 7733G </td><td> Ligasyonu için sütür </td></tr><tr><td> Silikon RTV yapıştırıcı </td><td> Silikon kauçuk </td><td> Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD </td><td> 1571 </td><td></td></tr><tr><td> Vetbond </td><td> Doku yapıştırıcısı </td><td> 3M Company, St Paul, MN, ABD </td><td> 70200746587 </td><td></td></tr><tr><td> Puralube Veteriner Merhem </td><td> Göz merhemi </td><td> Pharmaderm, Melville, NY, ABD </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Buprenorfin hydrochlorode </td><td> Analjezikler </td><td> Hospira A.Ş., Lake Forest, IL, ABD </td><td> NDC 0409-2012-32 </td><td></td></tr><tr><td> Termal Koter Ünitesi </td><td></td><td> Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD </td><td> 501292 </td><td></td></tr><tr><td> PeriFlux Sistemi 5000 </td><td> TCD flowmetre </td><td> Perimed, Stockholm, İsveç </td><td></td><td></td></tr><tr><td> BAT-12 </td><td> Rektal termometre </td><td> Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD </td><td> Bat-12R </td><td></td></tr><tr><td> T / POMPA, TP600 </td><td> Termal battaniye </td><td> Gaymar, NY, ABD </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride </td><td> Reaktif </td><td> Sigma-Aldrich Co, St Louis, MO, USA </td><td> T8877 </td><td></td></tr><tr><td> Fareler beyin matris dilimleme makinesi </td><td> Beyin dilimleme makinesi </td><td> Zivic-Miller Lab. Inc, Allison Park, PA, USA </td><td> BSMAS001-1 </td><td></td></tr></tbody></table>

intraluminal middle cerebral artery occlusion (mcao) model for ischemic stroke with laser doppler flowmetry guidance in mice

İnme, 1,2 2009 yılında Amerika Birleşik Devletleri 70 milyar ABD doları yakın bir tahmini maliyeti, üçüncü önde gelen ölüm nedeni ve özürlülük dünyanın önde gelen nedenidir. Koizumi 4 sıçan bu etkileyici insan patoloji simüle etmek için 1986 yılında intraluminal orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) modeli geliştirilmiştir. MCAO yöntemi bir değişiklik daha sonra Longa 3 tarafından takdim edildi. Her iki teknikte de yaygın iskemik inme ve olası tedavi yöntemleri 5 kaynaklanan beyin hasarının moleküler mekanizmaları tanımlamak için kullanılmaktadır. Bu nispeten noninvaziv bir metod sıçanlarda, farelerde transgenik ve nakavt suşları 6,7 yararlanmak kullanmak uzatıldı . Fokal serebral iskemi modeli için, intraluminal sütür internal karotid arter yoluyla MCA tabanı kapamak için ileri düzeydedir. Katlanması zaman belirli bir süre sonra dikiş spontan reperfüzyon taklit eder, ancak sütür de kalıcı olarak muhafaza edilebilir. Bu video, kademeli bir biçimde farelerde intraluminal MCAO prosedürü gerçekleştirmek için iki ana yaklaşım gösteren yanı sıra potansiyel sakıncaları ve tuzaklar anlayışlar olacaktır. Iskemik beyin dokusu daha sonra beyin enfarktüsü 8 ölçüde değerlendirmek için 2,3,5-triphenyltetrazolium klorür (TTC) ile boyanan olacaktır .

Watch this Scientific Journal Video about Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice at JoVE.com

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Intraluminal orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) modeli deneysel iskemik inme modelleri arasında en sık kullanılan model. Burada Lazer Doppler flowmetre kılavuzu ile ayrıntılı olarak tüm model ve onun temsilcisi sonuçları gösterecektir.

Fare lazer Doppler flowmetre Rehberlik İskemik İnme intraluminal Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO) Model

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

intraluminal-middle-cerebral-artery-occlusion-mcao-model-for-ischemic

Research

JoVE Journal

Medicine

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

49.6K Görüntüleme.  University of Florida. Intraluminal orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) modeli deneysel iskemik inme modelleri arasında en sık kullanılan model. Burada Lazer Doppler flowmetre kılavuzu ile ayrıntılı olarak tüm model ve onun temsilcisi sonuçları gösterecektir.

Video: Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are very limited. To meet the need for novel therapeutic approaches, experimental stroke research frequently employs rodent models of focal cerebral ischaemia. Most researchers use permanent or transient occlusion of the middle cerebral artery (MCA) in mice or rats.
Proximal occlusion of the middle cerebral artery (MCA) via the intraluminal suture technique (so called filament or suture model) is probably the most frequently used model in experimental stroke research. The intraluminal MCAO model offers the advantage of inducing reproducible transient or permanent ischaemia of the MCA territory in a relatively non-invasive manner. Intraluminal approaches interrupt the blood flow of the entire territory of this artery. Filament occlusion thus arrests flow proximal to the lenticulo-striate arteries, which supply the basal ganglia. Filament occlusion of the MCA results in reproducible lesions in the cortex and striatum and can be either permanent or transient. In contrast, models inducing distal (to the branching of the lenticulo-striate arteries) MCA occlusion typically spare the striatum and primarily involve the neocortex. In addition these models do require craniectomy. In the model demonstrated in this article, a silicon coated filament is introduced into the common carotid artery and advanced along the internal carotid artery into the Circle of Willis, where it blocks the origin of the middle cerebral artery. In patients, occlusions of the middle cerebral artery are among the most common causes of ischaemic stroke. Since varying ischemic intervals can be chosen freely in this model depending on the time point of reperfusion, ischaemic lesions with varying degrees of severity can be produced. Reperfusion by removal of the occluding filament at least partially models the restoration of blood flow after spontaneous or therapeutic (tPA) lysis of a thromboembolic clot in humans.
In this video we will present the basic technique as well as the major pitfalls and confounders which may limit the predictive value of this model.

Filamentous occlusion of the Middle cerebral artery is a common model for studying ischemic stroke in mice.

Fare Modelleme İnme - Filament Model Orta Serebral Arter Tıkanıklığı

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

Tıp

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fare Modeli

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We have established bilateral common carotid artery occlusion as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance to transient focal cerebral ischemia in C57Bl6/J mice. In this video, we will demonstrate the methodology used for this study.

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning (PC) &#x2013; a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We established bilateral common carotid artery occlusion (BCCAO) as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance (IT) to transient focal cerebral ischemia (induced by middle cerebral artery occlusion, MCAO) in C57Bl6/J mice.

Odak Serebral İskemi Erken İskemik Tolerans tetikleyebilecek bir Yeterli Önkoşullama Uyarıcı olarak bilateral Ortak Karotis Arter Tıkanıklığı

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a ...

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in 20091, 2. Several models of cerebral ischemia have been developed to mimic the human condition of stroke. It has been suggested that up to 80% of all strokes result from ischemic damage in the middle cerebral artery (MCA) area3. In the early 1990s, endothelin-1 (ET-1) 4 was used to induce ischemia by applying it directly adjacent to the surface of the MCA after craniotomy. Later, this model was modified 5 by using a stereotaxic injection of ET-1 adjacent to the MCA to produce focal cerebral ischemia. The main advantages of this model include the ability to perform the procedure quickly, the ability to control artery constriction by altering the dose of ET-1 delivered, no need to manipulate the extracranial vessels supplying blood to the brain as well as gradual reperfusion rates that more closely mimics the reperfusion in humans5-7. On the other hand, the ET-1 model has disadvantages that include the need for a craniotomy, as well as higher variability in stroke volume8. This variability can be reduced with the use of laser Doppler flowmetry (LDF) to verify cerebral ischemia during ET-1 infusion. Factors that affect stroke variability include precision of infusion and the batch of the ET-1 used6. Another important consideration is that although reperfusion is a common occurrence in human stroke, the duration of occlusion for ET-1 induced MCAO may not closely mimic that of human stroke where many patients have partial reperfusion over a period of hours to days following occlusion9, 10. This protocol will describe in detail the ET-1 induced MCAO model for ischemic stroke in rats. It will also draw attention to special considerations and potential drawbacks throughout the procedure.

Several animal models of cerebral ischemia have been developed to simulate the human condition of stroke. This protocol describes the endothelin-1 (ET-1) induced middle cerebral artery occlusion (MCAO) model for ischemic stroke in rats. In addition, important considerations, advantages, and shortcomings of this model are discussed.

Rat Lazer Doppler Flowmetri Rehberlik ile İskemik İnme için Endotelin-1 Bağlı Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Modeli

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be performed in many locations overlying the rat cerebrum, but is most easily carried out by creating a craniectomy over the readily accessible frontal or parietal bones. Most frequently, we have used this technique in combination with the endothelin-1 middle cerebral artery occlusion model of ischemic stroke to quantify the changes in middle cerebral artery vessel diameter that occur with injection of endothelin-1 into the brain parenchyma adjacent to the proximal MCA4, 5. In order to visualize the proximal portion of the MCA during endothelin -1 induced MCAO, we use a technique to create a cranial window through the temporal bone on the lateral aspect of the rat skull (Figure 1). Cerebral arteries can be visualized either with the dura intact or with the dura incised and retracted. Most commonly, we leave the dura intact during visualization since endothelin-1 induced MCAO involves delivery of the vasoconstricting peptide into the brain parenchyma. This bypasses the need to incise the dura directly over the visualized vessels for drug delivery. This protocol will describe how to create a cranial window to visualize cerebral arteries in a step-wise fashion, as well as how to avoid many of the potential pitfalls pertaining to this method.

This article describes a method for visualizing rat cerebral arteries through a cranial window using temporal craniectomy in order to view proximal portions of the middle cerebral artery (Figure 1). This versatile method can be combined with various techniques of drug delivery to measure cerebral artery reactivity in vivo.

Endotelin-1 Bağlı Orta Serebral Arter Tıkanıklığı sırasında Orta Serebral Arter görselleştirin bir Kranial Pencere kullanmak

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal models of acute ischemic stroke allows to confirm successful arterial occlusion and exclude subarachnoid hemorrhage. Cerebral perfusion monitoring can also be used to study intracranial collateral circulation, which is emerging as a powerful determinant of stroke outcome and a possible therapeutic target. Despite a recognized role of Laser Doppler perfusion monitoring as part of the current guidelines for experimental cerebral ischemia, a number of technical difficulties exist that limit its widespread use. One of the major issues is obtaining a secure and prolonged attachment of a deep-penetration Laser Doppler probe to the animal skull. In this video, we show our optimized system for cerebral perfusion monitoring during transient middle cerebral artery occlusion by intraluminal filament in the rat. We developed in-house a simple method to obtain a custom made holder for twin-fibre (deep-penetration) Laser Doppler probes, which allow multi-site monitoring if needed. A continuous and prolonged monitoring of cerebral perfusion could easily be obtained over the intact skull.

Cerebral perfusion monitoring has been demonstrated to improve accuracy in ischemic stroke models. Technical difficulties often limit the use of this essential tool for cerebrovascular research. In this video, an optimized system is shown to obtain a single or multi-site hemodynamic monitoring during intraluminal middle cerebral artery occlusion in rats.

Intraluminar Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Sıçan Strok Model Serebral Perfüzyon İzleme için Optimize Sistemi

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical options are available for a small proportion of stroke patients in the acute phase. Current research is intensively searching for novel therapeutic strategies and is increasingly focusing on the sub-acute and chronic phase after stroke because more patients might be eligible for therapeutic interventions in a prolonged time window. These delayed mechanisms include important pathophysiological pathways such as post-stroke inflammation, angiogenesis, neuronal plasticity and regeneration. In order to analyze these mechanisms and to subsequently evaluate novel drug targets, experimental stroke models with clinical relevance, low mortality and high reproducibility are sought after. Moreover, mice are the smallest mammals in which a focal stroke lesion can be induced and for which a broad spectrum of transgenic models are available. Therefore, we describe here the mouse model of transcranial, permanent coagulation of the middle cerebral artery via electrocoagulation distal of the lenticulostriatal arteries, the so-called &#8220;coagulation model&#8221;. The resulting infarct in this model is located mainly in the cortex; the relative infarct volume in relation to brain size corresponds to the majority of human strokes. Moreover, the model fulfills the above-mentioned criteria of reproducibility and low mortality. In this video we demonstrate the surgical methods of stroke induction in the &#8220;coagulation model&#8221; and report histological and functional analysis tools.

Various murine models of middle cerebral artery occlusion (MCAO) are widely used in experimental brain research. Here, we demonstrate the model of transcranial permanent distal MCAO which produces consistent cortical infarction of a size corresponding to damage imposed by the majority of human ischemic strokes.

Farelerde Modelleme İnme: Distal Orta Serebral Arter Daimi Pıhtılaşma

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic stroke. However, the use of tPA is limited by its narrow therapeutic window and by increased risk of hemorrhagic transformation. There is an urgent need to develop suitable stroke models to study new thrombolytic agents and strategies for treatment of ischemic stroke. At present, two major types of ischemic stroke models have been developed in rats and mice: intraluminal suture MCAO and embolic MCAO. Although MCAO models via the intraluminal suture technique have been widely used in mechanism-driven stroke research, these suture models do not mimic the clinical situation and are not suitable for thrombolytic studies. Among these models, the embolic MCAO model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical investigation of thrombolytic therapy. This embolic model was first developed in rats by Overgaard et al.1 in 1992 and further characterized by Zhang et al. in 19972. Although embolic MCAO has gained increasing attention, there are technical problems faced by many laboratories. To meet increasing needs for thrombolytic research, we present a highly reproducible model of embolic MCAO in the rat, which can develop a predictable infarct volume within the MCA territory. In brief, a modified PE-50 tube is gently advanced from the external carotid artery (ECA) into the lumen of the internal carotid artery (ICA) until the tip of the catheter reaches the origin of the MCA. Through the catheter, a single homologous blood clot is placed at the origin of the MCA. To identify the success of MCA occlusion, regional cerebral blood flow was monitored, neurological deficits and infarct volumes were measured. The techniques presented in this paper should help investigators to overcome technical problems for establishing this model for stroke research.

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

In this paper, we demonstrate a standard method for producing an embolic middle cerebral artery occlusion with homologous blood clots (fibrin-rich) in adult rat. This model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical study of thrombolytic therapy for ischemic stroke.

Sıçanlar Homolog Kan pıhtısı ile İskemik İnme emboli Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO)

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Surgical Approach for Middle Cerebral Artery Occlusion and Reperfusion Induced Stroke in Mice

Stroke is a leading cause of death worldwide and continues to be one of the major causes of long-term adult disabilities. About 87% of strokes are ischemic in origin and occur in the territory of the middle cerebral artery (MCA). Currently the only Food and Drug Administration (FDA) approved drug for the treatment of this devastating disease is tissue plasminogen activator (tPA). However, tPA has a small therapeutic window for administration (3 - 6 hr), and is only effective in 4% of the patients who actually receive it. Current research focuses on understanding the pathophysiology of stroke in order to find potential therapeutic targets. Thus, reliable models are crucial, and the MCA occlusion (MCAo) model (also termed the intraluminal filament or suture model) is deemed to be the most clinically relevant surgical model of ischemic stroke, and is fairly non-invasive and easily reproducible. Typically the MCAo model is used with rodents, especially with mice due to all the genetic variations available for this species. Here we describe (and present in the video) how to successfully perform the MCAo model (with reperfusion) in mice to generate reliable and reproducible data.

In order to understand the pathophysiology of stroke, it is important to use reliable models. This paper will describe one of the most frequently used stroke models in mice, termed the middle cerebral artery occlusion (MCAo) model (also termed the intraluminal filament or suture model) with reperfusion.

Farelerde Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Reperfüzyon Kaynaklı İnme Cerrahi Yaklaşım

Stroke is a leading cause of death worldwide and continues to be one of the major causes of long-term adult disabilities. About 87% of strokes are ...

Induction of Ischemic Stroke and Ischemia-reperfusion in Mice Using the Middle Artery Occlusion Technique and Visualization of Infarct Area

Cerebrovascular disease is highly prevalent in the global population and encompasses several types of conditions, including stroke. To study the impact of stroke on tissue injury and to evaluate the effectiveness of therapeutic interventions, several experimental models in a variety of species were developed. They include complete global cerebral ischemia, incomplete global ischemia, focal cerebral ischemia, and multifocal cerebral ischemia. The model described in this protocol is based on the middle cerebral artery occlusion (MCAO) and is related to the focal ischemia category. This technique produces consistent focal ischemia in a strictly defined region of the hemisphere and is less invasive than other methods. The procedure described is performed on mice, given the availability of several genetic variants and the high number of tests standardized for mice to aid in the behavioral and neurodeficit evaluation.

We describe a mouse model of stroke induced by the occlusion of the middle cerebral artery using a silicone coated suture. The protocol can be applied to induce permanent occlusion or a temporary ischemia, followed by reperfusion.

Enfarktüs Bölgesi Orta Arter Tıkanıklığı Tekniği ve Görselleştirme kullanma Fare İskemik İnme ve İskemi-reperfüzyon indüksiyon

Cerebrovascular disease is highly prevalent in the global population and encompasses several types of conditions, including stroke. To study the impact of ...