Bu çalışma CIHR EKİBİ hibe # CTP 82946, bir CIHR hibe # MOP 102741, yanı sıra Kanada sandalye # 216684 ve Strauss Vakfı tarafından desteklenmiştir. ER Kanada Kalp ve İnme Vakfı tarafından burs tarafından desteklenmiştir.

Geçici Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO) 1. Cerrahi Prosedür (Şekil 1) Geçici orta serebral arter tıkanıklığı (tMCAO) 2 yapılır - 3 aylık erkek C57BL / 6 fareler (22-28g) için. Bu protokol IRCM biyoetik komitesi hayvan bakımı tarafından onaylanmıştır. Cerrahi aletler otoklavda (60 dk için 15 psi az 121 ° C) ile sterilize edildi. Her hayvan arasında, onlar sıcak boncuk sterilizatör (15 sn) kullanılarak sterilize edilmiştir. Cerrahi masa ve diğer ekipmanlar% 70 etanol kullanılarak dezenfekte edilir. Ameliyattan önce iki saat, fareler buprenorfin (0.03 mg / kg bwip) ile analgesized edildi. Şekil 1A. <ol><li> Derinden izofluran% 5 ile farelerin uyuşturan ve daha sonra% 2.5 izofluran de anestezi korumak. Farelerin Vücut sıcaklığı bir ısıtma pedi ile ameliyat sırasında sabit tutulur. </li><li> Kürk ve sk Dezenfekte% 70 etanol ya da Betadin ile. Tıraş inme patofizyolojisi etkileyebilecek saç parçası sürüm, microabrasions ve iltihap üretir bu yana, fare kürk tıraş etmeyin. </li><li> Bir orta hat boyun kesi olun ve yavaşça yumuşak dokuların birbirinden çekin. </li><li> Bir stereo mikroskop (Stemi 2000, Zeiss) altında, bir künt diseksiyon karotis arter bulmak için trakea maruz ve kasları geri çekmek için yapılır. </li><li> Sol ana karotis arter (CCA) dikkatli çevreleyen doku disseke ve CCA geçici 20 mm segmente 5-0 ipek sütür kesim kullanarak geçici bir sütür (1) tıkanmasıyla edilir. Büyük bir dikkatle vagal sinir zarar vermeyecek olunmalıdır. </li><li> Sol internal karotis arter (ICA) ve dış karotis arter (ECA) ve çatallanma ayırın. Bir kalıcı sütür (2) olarak distalde mümkün olduğunca, ECA etrafına yerleştirilir ve biraz sıkı başka bir geçici sütür (3) distal ECA üzerine yerleştirilirçatallanma. </li><li> Kanama önlemek için bir ters eylem cımbız kullanarak sol ICA (4) klipsleyin. Büyük bir dikkatle vagal sinir zarar vermeyecek olunmalıdır. </li><li> Sürekli (2) ve geçici (3) dikiş arasında ECA (5) içine bir küçük delik kesin. </li></ol> 1B Şekil. <ol start="9"><li> , 12 mm uzunluğunda 6-0 silikon kaplı (9-10mm hakkında kaplamalı silikon olan) ECA (6) içine monofilament sütür (Doccol Corporation) tanıtılması tamamen kalıcı sütür distal ECA kesip ICA içine tıkayıcı ters . Sütür sıkıca kanamayı önlemek için monofilament etrafında bağlı ve ters eylem cımbız kaldırılır. </li><li> Tıkayıcı Willis daire MCA kökeni tıkanmak üzere tanıtıldı. ECA ve CCA çatallanma ötesinde 9-10 mm çapındaki ekleme durdurun. Tıkayıcı bloke edilir ve artık hareket edemez. Bakım pterigopalatin arter nüfuz edilmesine dikkat edilmelidir. ECA üzerindeki sütür (3) tig olduğunuhtly pozisyonda mono düzeltmek için bağlanmıştır. </li><li> Bir AutoClip yara kapama sistemi ile cilt kapatın. </li><li> Subkutan salin solüsyonu 1 ml enjekte edilir ve tüm post-kapama süresinin (60 dakika) sırasında bir kızılötesi ısıtma lambası altında fareler yerleştirin. </li></ol> 2. Orta Serebral Arter Kan Akım Restorasyonu Reanesthesia önce neuroscore cerrahinin başarısını değerlendirmek için kontrol edilebilir. <ol><li> Daha önce açıklandığı gibi fareler anestezisi ve autoclips çıkarın. </li><li> Biraz monofilament çekilmesi ve kan reperfüzyon izin ECA üzerine sütür (3) açın. </li><li> Sürekli kan kaybını önlemek için ECA üzerindeki geçici dikiş kapalı kravat. Monofilament yeniden kullanım için tutulur. </li><li> Kan sirkülasyonu sağlamak için CCA üzerine geçici sütür (1) sökün. </li><li> Yara kapatın. Farelerde subkütan başka 1 ml serum fizyolojik verilmelidir. </li><li> 1 saat boyunca ısıtma kızılötesi lamba altında fareler yerleştirin. Hayvan hareketliliği kavuşur emin olduktan sonra, fare kafesinden döndürülür ve ısıtma pedi ve 72 saat için havlu altında bıraktı. Kafesin sadece yarısı fareler çevrelerini seçmek için izin ısıtma pedi üzerine yerleştirilir unutmayın. Ameliyat sonrası kilo kaybı genel olarak görülmektedir, çünkü püre yemek yeme teşvik etmek için bir Petri tabağına yerleştirilir. On iki saat ameliyat sonrası, fareler buprenorfin (0.03 mg / kg bwip) başka bir doz verildi. </li></ol> 3. Sham Operasyonu Sham operasyon için tüm prosedürleri tıkayıcı takılı olmadığından haricinde aynıdır. 4. Neuroscore Nörolojik defisit sadece reperfüzyon sonrası ve yaralanma şiddetinin derecesi sonraki tahmini tMCAO başarısının değerlendirilmesine olanak sağlar. Önceden 5 açıklandığı gibi nörolojik defisit atacak &lt;/ Sup&gt; ve 1, 24, 48 ve 72 saat sonrası reperfüzyon gerçekleştirildi. Bir genişletilmiş altı maddelik ölçek kullanılmıştır: <ul><li> 0: Normal. </li><li> 1: hafif kuyruk tarafından yakalandı zaman veya tutarsız rotasyon olmadan davranışı çizerek, karşı tarafa döndürmek için &lt;% 50 girişimleri. </li><li> 2: hafif çizerek tutarlı, karşı tarafa döndürmek için&gt;% 50 girişimleri. </li><li> 3: güçlü, tutarlı ve çizerek acil, fare burnu neredeyse kendi kuyruğunu ulaşan, fazla 1-2 saniye için bir dönüş konumunda tutar. </li><li> 4: barreling içine ilerleyici ağır dönme, refleks yürüme veya düzeltilmesi kaybı. </li><li> 5: komadaki veya ölmek üzere. </li></ul> 5. Kresil Menekşe Boyama (Şekil 2) PBS çözeltisi perfüzyon takiben, beyinleri hızla izopentan dondurulmuş ve -80 ° C&#39;deC. Fare beyinleri de planlanan immünohistokimyasal çalışmalar bağlı olarak,% 4 paraformaldehit (PFA) ile perfüze edilebilir. Koronal beyin kesitleri (17 um) Kriyostat-kesikler yapılmıştır. Her 30 üzerinden bir bölümü temsil eden bir beyin hasarı ile aynı slayt üzerinde toplanır. Hacim ölçümü için, 2 adet kaydırak (Scion Corporation, Frederick, MD) lezyon değerlendirmek için kullanılan cresyl violet boyama ve görüntü analiz sistemi ile boyanmış. Yaralanma ses keyfi birimler (piksel) hesaplanır, ve her bölüm için kontralateral olmayan lezyonlanan alanının bir yüzdesi olarak ifade edildi. Diğer slaytlar immünohistokimyasal çalışmalar için -80 ° C&#39;de tutulur. Alternatif olarak, PFA-sabit beyin vibratome ve gibi Han ve ark. (2009) 6 tarafından önerilen ölçülen infarkt hacmi ile 30-50 mikron de kesilebilir.

<ol>
	<li>Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema,+I:+a+new+experimental+model+of+cerebral+embolism+in+rats+in+which+recirculation+can+be+introduced+in+the+ischemic+area.">Experimental studies of ischemic brain edema, I: a new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area.</a> Jpn. J. Stroke. 8, 1-8 (1986).</li><li>Chan, P. H., Kamii, H., Yang, G., Gafni, J., Epstein, C. J., Carlson, E., Reola, L. B. r. a. i. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=infarction+is+not+reduced+in+SOD-1+transgenic+mice+after+a+permanent+focal+cerebral+ischemia.">infarction is not reduced in SOD-1 transgenic mice after a permanent focal cerebral ischemia.</a> Neuroreport. 5, 293-296 (1993).</li><li>Yang, G., Chan, P. H., Chen, J., Carlson, E., Chen, S. F., Weinstein, P., Epstein, C. J., Kamii, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+copper-zinc+superoxide+dismutase+transgenic+mice+are+highly+resistant+to+reperfusion+injury+after+focal+cerebral+ischemia.">Human copper-zinc superoxide dismutase transgenic mice are highly resistant to reperfusion injury after focal cerebral ischemia.</a> Stroke. 25, 165-170 (1994).</li><li>Liu, S., Zhen, G., Meloni, B. P., Campbell, K., Winn, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+stroke+model+guidelines+for+preclinical+stroke+trials+(1st+edition.">Rodent stroke model guidelines for preclinical stroke trials (1st edition.</a> J. Exp. Stroke Transl. Med. 2, 2-27 (2009).</li><li>Jiang, S. X., Lertvorachon, J., Hou, S. T., Konishi, Y., Webster, J., Mealing, G., Brunette, E., Tauskela, J., Preston, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chlortetracycline+and+demeclocycline+inhibit+calpains+and+protect+mouse+neurons+against+glutamate+toxicity+and+cerebral+ischemia.">Chlortetracycline and demeclocycline inhibit calpains and protect mouse neurons against glutamate toxicity and cerebral ischemia.</a> J. Biol. Chem. 280, 33811-33888 (2005).</li><li>Han, R. Q., Ouyang, Y. B., Xu, L., Agrawal, R., Patterson, A. J., Giffard, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postischemic+brain+injury+is+attenuated+in+mice+lacking+the+beta2-adrenergic+receptor.">Postischemic brain injury is attenuated in mice lacking the beta2-adrenergic receptor.</a> Anesth. Analg. 108, 280-287 (2009).</li><li>Rousselet, E., Marcinkiewicz, J., Kriz, J., Zhou, A., Hatten, M. E., Prat, A., Seidah, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PCSK9+reduces+the+protein+levels+of+the+LDL+receptor+in+mouse+brain+during+development+and+after+ischemic+stroke.">PCSK9 reduces the protein levels of the LDL receptor in mouse brain during development and after ischemic stroke.</a> J. Lipid Res. 52, 1383-1391 (2011).</li><li>Tamura, A., Graham, D. I., McCulloch, J., Teasdale, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+cerebral+ischaemia+in+the+rat:+1.+Description+of+technique+and+early+neuropathological+consequences+following+middle+cerebral+artery+occlusion.">Focal cerebral ischaemia in the rat: 1. Description of technique and early neuropathological consequences following middle cerebral artery occlusion.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 1, 53-60 (1986).</li><li>Chen, Y., Ito, A., Takai, K., Saito, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blocking+pterygopalatine+arterial+blood+flow+decreases+infarct+volume+variability+in+a+mouse+model+of+intraluminal+suture+middle+cerebral+artery+occlusion.">Blocking pterygopalatine arterial blood flow decreases infarct volume variability in a mouse model of intraluminal suture middle cerebral artery occlusion.</a> J. Neurosci. Methods. 174, 18-24 (2008).</li><li>Tsuchiya, D., Hong, S., Kayama, T., Panter, S. S., Weinstein, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+suture+size+and+carotid+clip+application+upon+blood+flow+and+infarct+volume+after+permanent+and+temporary+middle+cerebral+artery+occlusion+in+mice.">Effect of suture size and carotid clip application upon blood flow and infarct volume after permanent and temporary middle cerebral artery occlusion in mice.</a> Brain Res. 970, 131-192 (2003).</li><li>Tureyen, K., Vemuganti, R., Sailor, K. A., Dempsey, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infarct+volume+quantification+in+mouse+focal+cerebral+ischemia:+a+comparison+of+triphenyltetrazolium+chloride+and+cresyl+violet+staining+techniques.">Infarct volume quantification in mouse focal cerebral ischemia: a comparison of triphenyltetrazolium chloride and cresyl violet staining techniques.</a> J. Neurosci. Methods. 139, 203-207 (2004).</li></ol>

Yazarlar ifşa etmek çakışan çıkarları var. Bu makalenin Üretim ve Serbest Giriş Zeiss, Inc tarafından desteklenen

Farklı zamanlı modeller hastalarda inme sonuçlarını taklit geliştirilmiştir. Inme modelinde seçimi söz konusu biyolojik bağlıdır. Intraluminal MCAO modeli hastalarda iskemik inme en yaygın türlerinden biri taklit ve Tamura modeli 4,7 daha az invaziv ve daha tutarlıdır. Bu nöroproteksiyon, neurorepair ve hücre ölümüne analizler için gerçekten ilginç bir model. Intraluminal modelinin başarısı kontrol edilmesi gereken bu tür hayvan cinsiyet, yaş ve ağırlık, sıcaklık, anestezi ve cerrahi süresi gibi birçok faktöre bağlıdır. Tıkayıcı (uç çapı, uzunluğu, şekli ve esneklik) fiziksel adap MCAO 4 tutarlılığı için kritik öneme sahiptir. Bu yazıda, Doccol Corporation 9-10 mm silikon ile kaplanmış 12 mm uzunluğundaki 6-0 monofilament kullanın. Uzunluğu tüm ICA kapsamında çünkü bu monofilament büyük avantajı subaraknoid kanama azaltmak veWillis ve PPA Circle anterior ve posterior komünikan arterlerden gelir uzunluğu, rezidüel kan akımı, engelledi ve infarkt hacmi azalır değişkenliği (bizim ellerde değişkenliğin% 15) 8 edilir. CCA sütür de infarkt hacmi 9 değişkenliği azalır. Beyin hasarı aşağıdaki tMCAO ölçüde farklı yollar ile tespit edilebilir. Daha önce de belirtildiği gibi nörolojik hasarlar ölçülebilir. Bununla birlikte, bu arada etkin bir ölçü olması zordur. Enfarkt boyutu genellikle TTC boyama ile gerçekleştirilir. Daha yakın zamanda, manyetik rezonans teknikler, aynı zamanda, nöro-koruyucu tedavisi için özellikle ilginç bir teknoloji kullanılır. Böyle neurorepair, hücre ölümü veya hücre çoğalması olarak inme dahil yatan hücresel mekanizmaları anlamak için, immünohistokimyasal olarak farklı marker çalışması kritik ve çok bilgilendirici. Böylece, bizim protocbeyin bölüm preparatları ol bu analizlerin izin veren büyük bir avantaja sahiptir, ve kullanılan fareler sayısını en aza indirir. Ayrıca, Tureyen ark. 10. cresyl violet boyama ve TTC arasında iyi bir korelasyon olduğunu bildirmişlerdir.

<table border="1"&gt;<tr&gt;<td<strong&gt; Açıklama</strong</td&gt;<td<strong&gt; Şirket</strong</td&gt;<td<strong&gt; Katalog numarası</strong</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Stereo mikroskop</td&gt;<td&gt; Zeiss</td&gt;<td&gt; Stemi 2000</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Fiber-Işık Yüksek Yoğunluklu Illuminator</td&gt;<td&gt; Dolan-Jenner Sanayi A.Ş.</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<tdIzofluran için&gt; Anestezi sistemi</td&gt;<td</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; İzofluran</td&gt;<td&gt; CDMV</td&gt;<td&gt; 108.737</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Isıtma battaniye</td&gt;<td&gt; Gaymar Medsearch</td&gt;<td&gt; TP22G</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Kızılötesi ısıtma lambası</td&gt;<td</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Ultra ince cımbız, stili 5</td&gt;<td&gt; Elektron Mikroskobu Bilimleri</td&gt;<td&gt; 78320-5TI</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Vannas Makas 3 mm Kesme Kenar, Düz</td&gt;<td&gt; Elektron Mikroskobu Bilimleri</td&gt;<td&gt; 72932-01</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Stil LA-1 ve MPF-1 Tüm düz bıçaklar</td&gt;<td&gt; Elektron Mikroskobu Bilimleri</td&gt;<td&gt; 77926-5S</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Negatif eylem cımbız, stil KOPINC 5</td&gt;<td&gt; Elektron Mikroskobu Bilimleri</td&gt;<td&gt; 72850-F</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Makas 5 1/2 &quot;Düz Kesme</td&gt;<td&gt; Cedarlane</td&gt;<td&gt; 72.960</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; AutoClip başlangıç ​​seti</td&gt;<td&gt; Harvard aparatı</td&gt;<td&gt; 34-0557</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; BD AutoClip Kapanış Sist Yara., 9mm Uzun, 100/PK</td&gt;<td&gt; Fisher</td&gt;<td&gt; 01-804-5</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 5-0 sütür</td&gt;<td&gt; Harvard aparatı</td&gt;<td&gt; 517.763</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Sütür materyali PDS II monofilament menekşe, 5-0, RB-1; Z303H</td&gt;<td&gt; CDMV</td&gt;<td&gt; 6167</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 12 mm uzunluğundaki 6-0 silikon kaplı monofilament sütür</td&gt;<td&gt; Doccol Şirketi</td&gt;<td&gt; 60SPRePK5</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 1ml Seringes</td&gt;<td&gt; Fisher</td&gt;<td&gt; 14-823-2F</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; İğneler 26G1 / 2</td&gt;<td&gt; Fisher</td&gt;<td&gt; BD-305111</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td<em&gt; C57BL / 6</em&gt; Fareler</td&gt;<td&gt; IRCM</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;</table

mouse model of intraluminal mcao: cerebral infarct evaluation by cresyl violet staining

İnme mortalite ve Dünyada sakatlık önde gelen nedeni üçüncü nedenidir. Tüm inmelerin yaklaşık% 80 İskemik inme hesaplar. Ancak, trombolitik doku plazminojen aktivatörü (tPA) mevcutsa akut iskemik inme tek tedavidir. Bu liderliğindeki araştırmacılar türlerde birçok iskemik inme modelleri geliştirmek için. Kemirgen modellerinde iki tip geliştirilmiştir: global serebral iskemi veya fokal serebral iskemi modeli. Kime yaklaşık% 80 trombotik veya embolik inme, orta serebral arter (MCA), model inme çalışmalar için oldukça uygundur intralüminal orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) topraklarında meydana hastalarda iskemik inme taklit etmek. Bu model, ilk olarak Koizumi, ve arkadaşları tarafından sıçanlarda geliştirilmiştir. 1986 1 in. Çünkü farelerde genetik manipülasyon kolaylığı, bu modeller de bu türün 2-3 geliştirilmiştir. content &quot;&gt; Bu yazıda, C57/Bl6 farelerde geçici MCA oklüzyonu prosedürü sunuyoruz. Önceki çalışmalar, uç çapı, uzunluğu, şekli, ve esneklik gibi tıkayıcı fiziksel özellikleri infarkt hacmi 4 tekrarlanabilirliği için önemli olduğunu bildirdi. Burada ticari bir silikon kaplı monofilament (Doccol Corporation) kullanılmıştır. diğer büyük avantajı bu monofilament subaraknoid kanama ikna etmek riskini azaltır olmasıdır. Zeiss stereo-mikroskop Stemi 2000 kullanmak, silikon kaplı monofilament internal karotis arter girmiştir (ICA) monofilament kadar eksternal karotis arter (ECA) bir kesik yoluyla MCA tabanı tıkar. kan akımı bir tromboembolik pıhtı lizis bölgesindeki sonrası kan akımının restorasyonu taklit monofilament çıkarılması ile 1 saat sonra restore edildi İnsanlarda. serebral infarkt ölçüde bir nörolojik skoru ile ve infarkt hacmi ölçümü ile ilk değerlendirilebilir.İskemik farelerin böylece farklı post-reperfüzyon zaman onların nörolojik skoru incelendi. 2,3,5-Triphenyftetrazoliumchlorid (TTC) ile boyanarak, infarkt hacmi değerlendirmek için genellikle yapıldı. Immunhistokimya tarafından birçok kritik belirleyicileri sınamak için bir fırsat sunuyor yana yazıda cresyl violet boyama kullanılır. Bu videoda, biz MCAO prosedürü rapor; nörolojik puanları ve cresyl violet boyama ile infarkt hacminin değerlendirilmesi.

Neuroscore değerlendirme tMCAO inme sonrası başarısını onaylar ve tMCAO post-reperfüzyon verimliliğini belirler. Bizim elimizde, tüm fareler, en azından hafif bir tutarlı kıvırma (neuroscore 2) ve nörolojik kusurların en fazla 72 saat için genel olarak stabil olan sunulan lümen içi prosedürüne tabi tutulmuştur. Çoğu fareler hafif tutarlı curling (neuroscore 2) sergilerler. Kıvrık olmaması gösteren Fare çalışmanın dışında tutulmuştur. Ancak, neuroscore değerlendirilmesi bize yaralı hipokampus ve sağlam bir hipokampus olanlar ile fareler arasında ayrım izin vermez. Mortalite subaraknoid kanama meydana gelmedi düşündüren, ameliyat gün boyunca gözlenmiştir. Subaraknoid kanama bir fare tespit edildiğinde, bu bir sistematik analizi çıkarılmıştır. Ev yapımı monofilamentler daha yumuşak hale Doccol Corporation, gelen silikon kaplı monofilament kullanımı başarısını artırırtMCAO ve subaraknoid kanama azaltır. 24 saat ve 72 saat arasında Mortalite bu model% 14, genel olarak oklüzyon 60 dk Min. Gözlemlenen mortalite muhtemelen bu fare soyu içinde geniş bir enfarktüs hacmini kaynaklanmaktadır. Güçlü bir lezyon tekrarlanabilirliği de onların etki (ler) modeli değişkenliği tarafından gizli olabilir nöro molekülleri okumak için çok ilginç olan (standart sapma% 15) gözlenmiştir. TMCAO sonrasında beyin hasarı ölçüde değerlendirilmesi için, bir malzeme çok uygun bir marker 6 test etmek sahip olmak için oldukça TTC daha cresyl violet boyama (Şekil 2) kullanmayı seçti. Lezyonun boyutu oldukça tutarlıdır. Ancak, bazı farelerde, hipokampus (farelerin yaklaşık% 30) yaralı olduğunu fark ettim. O cresyl violet boyama sonrasında 1 hafta kadar uygulanabilir ilginçtir. Literatürde, beyin enfarktüsü yüzdesi değişir birindendiğer çalışma. Bu fare suşu, anestezi, beyin kesitleri kalınlığı, kullanılan monofilament ya da 6, 7 ikinci boyama seçimine bağlıdır. <img src="/files/ftp_upload/4038/4038fig1.jpg" alt="Şekil 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/4038/4038fig1highres.jpg" /> Şekil 1. Silikon kaplı intraluminal monofilament kullanarak orta serebral arter oklüzyonu şeması. Fare beyin ve silikon kaplı monofilament tanıtımı hazırlamak için ardışık sütür ve klibi gösteren serebral arterlerin bir. Basitleştirilmiş şeması. B. Willis daire ile monofilament pozisyonu temsil edilmektedir. . Monofilament MCA ACA, anterior serebral arter baz tıkanmak üzere ECA aracılığıyla ICA sokulur; BA, baziler arter; CCA, karotis arter; C. Willis, Willis Circle; ECA, eksternal karotid artery; ICA, internal karotis arter; MCA, orta serebral arter; PCA, posterior komünikan arter; PPA, pterigopalatin arter. <img src="/files/ftp_upload/4038/4038fig2.jpg" alt="Şekil 2," /> Şekil 2. 72 saat sonrası reperfüzyon. İnfarktı alanı (özellikle striatum, korteks ve komşu beyin bölgeleri) sonra cresyl violet ile boyandı fare beyin Temsilcisi koronal bölümleri beyaz (cresyl menekşe tarafından boyanmadan) görünür. Yaralanma hacmi (beyaz kısmı, sağ hemisfer) ayrılmış ve kontralateral olmayan lezyonlanan alanı (sol hemisfer) bir yüzdesi olarak ifade edilir.

Watch this Scientific Journal Video about Mouse Model of Intraluminal MCAO: Cerebral Infarct Evaluation by Cresyl Violet Staining at JoVE.com

Mouse Model of Intraluminal MCAO: Cerebral Infarct Evaluation by Cresyl Violet Staining

Farelerde intraluminal orta serebral oklüzyon modeli sunuldu. Serebral infarkt ölçüde bir nörolojik skoru ve cresyl violet boyama, TTC alternatif boyama, paralel birçok ilgi belirteçleri test etmek büyük avantajı sunarak değerlendirilir.

Intraluminar MCAO Mouse Model: kresil Violet Boyama tarafından Serebral İnfarktı Değerlendirilmesi

Stroke is the third  cause of mortality and the leading cause of disability in the World. Ischemic  stroke accounts for approximately 80% of all strokes. ...

mouse-model-intraluminal-mcao-cerebral-infarct-evaluation-cresyl

Research

JoVE Journal

Medicine

62.8K Görüntüleme.  Clinical Research Institute of Montreal. Farelerde intraluminal orta serebral oklüzyon modeli sunuldu. Serebral infarkt ölçüde bir nörolojik skoru ve cresyl violet boyama, TTC alternatif boyama, paralel birçok ilgi belirteçleri test etmek büyük avantajı sunarak değerlendirilir.

Video: Mouse Model of Intraluminal MCAO: Cerebral Infarct Evaluation by Cresyl Violet Staining

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fare Modeli

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Tıp

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United States in 20091,2. The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model was developed by Koizumi4 in 1986 to simulate this 
impactful human pathology in the rat. A modification of the MCAO method was later presented by Longa3. Both techniques have been widely used to identify 
molecular mechanisms of brain injury resulting from ischemic stroke and potential therapeutic modalities5. This relatively noninvasive method in rats has been 
extended to use in mice to take advantage of transgenic and knockout strains6,7. To model focal cerebral ischemia, an intraluminal suture is advanced via 
the internal carotid artery to occlude the base of the MCA. Retracting the suture after a specified period of time mimics spontaneous reperfusion, but the 
suture can also be permanently retained. This video will be demonstrating the two major approaches for performing intraluminal MCAO procedure in mice in a 
stepwise fashion, as well as providing insights for potential drawbacks and pitfalls. The ischemic brain tissue will subsequently be stained by 
2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to evaluate the extent of cerebral infarction8.

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model is the most frequent used model among experimental ischemic stroke models. Here we will demonstrate the entire model in detail with the guide of Laser Doppler flowmetry, and its representative results.

Fare lazer Doppler flowmetre Rehberlik İskemik İnme intraluminal Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO) Model

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal models of acute ischemic stroke allows to confirm successful arterial occlusion and exclude subarachnoid hemorrhage. Cerebral perfusion monitoring can also be used to study intracranial collateral circulation, which is emerging as a powerful determinant of stroke outcome and a possible therapeutic target. Despite a recognized role of Laser Doppler perfusion monitoring as part of the current guidelines for experimental cerebral ischemia, a number of technical difficulties exist that limit its widespread use. One of the major issues is obtaining a secure and prolonged attachment of a deep-penetration Laser Doppler probe to the animal skull. In this video, we show our optimized system for cerebral perfusion monitoring during transient middle cerebral artery occlusion by intraluminal filament in the rat. We developed in-house a simple method to obtain a custom made holder for twin-fibre (deep-penetration) Laser Doppler probes, which allow multi-site monitoring if needed. A continuous and prolonged monitoring of cerebral perfusion could easily be obtained over the intact skull.

Cerebral perfusion monitoring has been demonstrated to improve accuracy in ischemic stroke models. Technical difficulties often limit the use of this essential tool for cerebrovascular research. In this video, an optimized system is shown to obtain a single or multi-site hemodynamic monitoring during intraluminal middle cerebral artery occlusion in rats.

Intraluminar Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Sıçan Strok Model Serebral Perfüzyon İzleme için Optimize Sistemi

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic stroke. However, the use of tPA is limited by its narrow therapeutic window and by increased risk of hemorrhagic transformation. There is an urgent need to develop suitable stroke models to study new thrombolytic agents and strategies for treatment of ischemic stroke. At present, two major types of ischemic stroke models have been developed in rats and mice: intraluminal suture MCAO and embolic MCAO. Although MCAO models via the intraluminal suture technique have been widely used in mechanism-driven stroke research, these suture models do not mimic the clinical situation and are not suitable for thrombolytic studies. Among these models, the embolic MCAO model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical investigation of thrombolytic therapy. This embolic model was first developed in rats by Overgaard et al.1 in 1992 and further characterized by Zhang et al. in 19972. Although embolic MCAO has gained increasing attention, there are technical problems faced by many laboratories. To meet increasing needs for thrombolytic research, we present a highly reproducible model of embolic MCAO in the rat, which can develop a predictable infarct volume within the MCA territory. In brief, a modified PE-50 tube is gently advanced from the external carotid artery (ECA) into the lumen of the internal carotid artery (ICA) until the tip of the catheter reaches the origin of the MCA. Through the catheter, a single homologous blood clot is placed at the origin of the MCA. To identify the success of MCA occlusion, regional cerebral blood flow was monitored, neurological deficits and infarct volumes were measured. The techniques presented in this paper should help investigators to overcome technical problems for establishing this model for stroke research.

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

In this paper, we demonstrate a standard method for producing an embolic middle cerebral artery occlusion with homologous blood clots (fibrin-rich) in adult rat. This model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical study of thrombolytic therapy for ischemic stroke.

Sıçanlar Homolog Kan pıhtısı ile İskemik İnme emboli Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO)

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Evaluation of Lung Metastasis in Mouse Mammary Tumor Models by Quantitative Real-time PCR

Metastatic disease is the spread of malignant tumor cells from the primary cancer site to a distant organ and is the primary cause of cancer associated death 1. Common sites of metastatic spread include lung, lymph node, brain, and bone 2. Mechanisms that drive metastasis are intense areas of cancer research. Consequently, effective assays to measure metastatic burden in distant sites of metastasis are instrumental for cancer research. Evaluation of lung metastases in mammary tumor models is generally performed by gross qualitative observation of lung tissue following dissection. Quantitative methods of evaluating metastasis are currently limited to ex vivo and in vivo imaging based techniques that require user defined parameters. Many of these techniques are at the whole organism level rather than the cellular level 3-6. Although newer imaging methods utilizing multi-photon microscopy are able to evaluate metastasis at the cellular level 7, these highly elegant procedures are more suited to evaluating mechanisms of dissemination rather than quantitative assessment of metastatic burden. Here, a simple in vitro method to quantitatively assess metastasis is presented. Using quantitative Real-time PCR (QRT-PCR), tumor cell specific mRNA can be detected within the mouse lung tissue.

This protocol describes how to use quantitative Real-time PCR (QRT-PCR) to detect tumor cell specific mRNA representing metastasis within the mouse lung tissue.

Kantitatif gerçek zamanlı PCR ile fare meme tümör modellerinde akciğer metastazı Değerlendirilmesi

Metastatic disease is the spread of malignant tumor cells from the primary cancer site to a distant organ and is the primary cause of cancer associated ...

A Battery of Motor Tests in a Neonatal Mouse Model of Cerebral Palsy

As the sheer number of transgenic mice strains grow and rodent models of pediatric disease increase, there is an expanding need for a comprehensive, standardized battery of neonatal mouse motor tests. These tests can validate injury or disease models, determine treatment efficacy and/or assess motor behaviors in new transgenic strains. This paper presents a series of neonatal motor tests to evaluate general motor function, including ambulation, hindlimb foot angle, surface righting, negative geotaxis, front- and hindlimb suspension, grasping reflex, four limb grip strength and cliff aversion. Mice between the ages of post-natal day 2 to 14 can be used. In addition, these tests can be used for a wide range of neurological and neuromuscular pathologies, including cerebral palsy, hypoxic-ischemic encephalopathy, traumatic brain injury, spinal cord injury, neurodegenerative diseases, and neuromuscular disorders. These tests can also be used to determine the effects of pharmacological agents, as well as other types of therapeutic interventions. In this paper, motor deficits were evaluated in a novel neonatal mouse model of cerebral palsy that combines hypoxia, ischemia and inflammation. Forty-eight hours after injury, five tests out of the nine showed significant motor deficits: ambulation, hindlimb angle, hindlimb suspension, four limb grip strength, and grasping reflex. These tests revealed weakness in the hindlimbs, as well as fine motor skills such as grasping, which are similar to the motor deficits seen in human cerebral palsy patients.

Presented is a concise battery of mouse neonatal motor tests. Using these tests, neonatal motor deficits can be demonstrated in a variety of neonatal motor disorders. By having a standardized set of tests, results from different studies can be compared, allowing for better and accurate reporting between groups.

Cerebral Palsy bir Yenidoğan Fare Modeli Motor Testleri A Pil

As the sheer number of transgenic mice strains grow and rodent models of pediatric disease increase, there is an expanding need for a comprehensive, ...

Intraluminal Drug Delivery to the Mouse Arteriovenous Fistula Endothelium

Delivery of therapeutic agents to enhance arteriovenous fistula (AVF) maturation can be administered either via intraluminal or external routes. The simple murine AVF model was combined with intraluminal administration of drug solution to the venous endothelium at the same time as fistula creation. Technical aspects of this model are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made and the aorta and inferior vena cava (IVC) are exposed. The infra-renal aorta and IVC are dissected for clamping. After proximal and distal clamping, the puncture site is exposed and a 25 G needle is used to puncture both walls of the aorta and into the IVC. Immediately after the puncture, a reporter gene-expressing viral vector was infused in the IVC via the same needle, followed by 15 min of incubation. The intraluminal administration method enabled more robust viral gene delivery to the venous endothelium compared to administration by the external route. This novel method of delivery will facilitate studies that explore the role of the endothelium in AVF maturation and enable intraluminal drug delivery at the time of surgical operation.

After puncturing the aorta through the inferior vena cava (IVC) to create an aorto-caval fistula in the mouse, solution containing a drug is infused into the IVC via the same needle, followed by incubation. This method enables more robust drug delivery to the venous endothelium compared to the external route.

Fare Arteriovenöz Fistül Endotelyumunun için intraluminal Drug Delivery

Delivery of therapeutic agents to enhance arteriovenous fistula (AVF) maturation can be administered either via intraluminal or external routes. The ...

Induction and Micro-CT Imaging of Cerebral Cavernous Malformations in Mouse Model

Mutations in the CCM1 (aka KRIT1), CCM2, or CCM3 (aka PDCD10) gene cause cerebral cavernous malformation (CCM) in humans. Mouse models of CCM disease have been established by tamoxifen induced deletion of Ccm genes in postnatal animals. These mouse models provide invaluable tools to investigate molecular mechanism and therapeutic approaches for CCM disease. An accurate and quantitative method to assess lesion burden and progression is essential to harness the full value of these animal models. Here, we demonstrate the induction of CCM disease in a mouse model and the use of the contrast enhanced X-ray micro computed tomography (micro-CT) method to measure CCM lesion burden in mouse brains. At postnatal day 1 (P1), we used 4-hydroxytamoxifen (4HT) to activate Cre recombinase activity from the Cdh5-CreErt2 transgene to cleave the floxed allele of Ccm2. CCM lesions in mouse brains were analyzed at P8. For micro-CT, iodine based Lugol&#39;s solution was used to enhance contrast in brain tissue. We have optimized the scan parameters and utilized a voxel dimension of 9.5 &#181;m, which lead to a minimum feature size of approximately 25 &#181;m. This resolution is sufficient to measure CCM lesion volume and number globally and accurately, and provide high-quality 3-D mapping of CCM lesions in mouse brains. This method enhances the value of the established mouse models to study the molecular basis and potential therapies for CCM and other cerebrovascular diseases.

This protocol demonstrates the induction of cerebral cavernous malformation disease in a mouse model and uses contrast enhanced micro computed tomography to measure lesion burden. This method enhances the value of established mouse models to study the molecular basis and potential therapies for cerebral cavernous malformation and other cerebrovascular diseases.

İndüksiyon ve fare modeli serebral derin malformasyon mikro-CT görüntüleme

Mutations in the CCM1 (aka KRIT1), CCM2, or CCM3 (aka PDCD10) gene cause cerebral cavernous malformation (CCM) in humans. Mouse models of CCM disease have ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

İzometrik Contractility ölçüm tel Myography kullanarak fare mezenterik arter

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Two-vessel Occlusion Mouse Model of Cerebral Ischemia-reperfusion

In this study, a middle cerebral artery (MCA) occlusion mouse model is employed to study cerebral ischemia-reperfusion. A reproducible and reliable mouse model is useful for investigating the pathophysiology of cerebral ischemia-reperfusion and determining potential therapeutic strategies for patients with stroke. Variations in the anatomy of the circle of Willis of C57BL/6 mice affects their infarct volume after cerebral-ischemia-induced injury. Studies have indicated that distal MCA occlusion (MCAO) can overcome this problem and result in a stable infarct size. In this study, we establish a two-vessel occlusion mouse model of cerebral ischemia-reperfusion through the interruption of the blood flow to the right MCA. We distally ligate the right MCA and right common carotid artery (CCA) and restore blood flow after a certain period of ischemia. This ischemia-reperfusion injury induces an infarct of stable size and a behavioral deficit. Peripheral immune cells infiltrate the ischemic brain within the 24 h infiltration period. Additionally, the neuronal loss in the cortical area is less for a longer reperfusion duration. Therefore, this two-vessel occlusion model is suitable for investigating the immune response and neuronal recovery during the reperfusion period after cerebral ischemia.

A mouse model of cerebral ischemia-reperfusion is established to investigate the pathophysiology of stroke. We distally ligate the right middle cerebral artery and right common carotid artery and restore blood flow after 10 or 40 min of ischemia.

Serebral iskemi-reperfüzyon iki damar tıkanıklığı fare modeli

In this study, a middle cerebral artery (MCA) occlusion mouse model is employed to study cerebral ischemia-reperfusion. A reproducible and reliable mouse ...