Mühendislik ve LEADER Konsorsiyum Programları NUE yoluyla Ulusal Bilim Vakfı Fon minnetle kabul edilmektedir.

1. Kolloidal AGNPS sentezi Creighton yöntemi (biraz değiştirilmiş ucuz) 22 için reaksiyon mekanizması istenmeyen hidroliz, oda sıcaklığında ya da daha yüksek NaBH4 yan reaksiyon ile birlikte referans Pavel et.al arasında desteklenmesi bilgi de ayrıntılı olarak tarif edilmektedir. 23 <ol><li> 4-12% 40 etanol banyosu içinde bir 1.25 M NaOH içinde, hr ve son olarak otoklav, daha sonra da% 10 HNO 3 banyosu içinde 12-24 saat için her cam temizleyin. Züccaciye asit ve baz banyo adımlardan sonra ultra saf su (MΩ 17 veya daha yüksek) ile iyice beş kez en az durulanmalıdır. </li><li> Bir 2 mM NaBH4 çözeltisi, 300 ml ve 10 soğutuldu otoklavlanmış su ° C&#39;ye kullanılarak 1 mM AgNO 3 çözelti, 100 ml hazırlanması Daha düşük sıcaklıklarda NaBH4 gibi bir yan reaksiyonu önlemek olacaktır. </li><li> Bir 500 ml Erlenmeyer şişesi reaksiyon devam 2 mM NaBH4 çözeltisi 300 mlBir karıştırma çubuğu aining ve gümüş oksitlenmeyi önlemek için alüminyum folyo ile sarın şişesi. Bir karıştırma plakası üzerinde bir buz banyosu içinde şişeye yerleştirin ve 10 dakika için 325 rpm&#39;de çözelti karıştırılır. </li><li> Saf su dolu bir kolon ile durulama ile asal bir 25 ml büret. Priming sonra alüminyum folyo ile AgNO 3 çözüm ve şal ile büret doldurun. </li><li> Karanlık bir odada, sürekli karıştırma (Şekil 1A) ile NaBH4 çözelti 1 damla saniye-1 hızında 1 mM AgNO 3 solüsyonundan 50 ml eklenir. AgNO 3 ilavesi sırasında ışığa maruz kalma en aza indirmek için bir &quot;folyo çadır&quot; ile, cihazın orta bölümünde kaplayın. AgNO 3 ek 30-40 dakika gerektirir. Periyodik buz banyosu doldurun. </li><li> AgNO 3 ilave işlemi tamamlandıktan sonra, buz banyosu doldurmak ve bir ilave 45-50 dakika boyunca koloidal çözelti karıştırmaya devam edin. Kolloidal AGNPS oluşumu renksiz gelen renk değişikliği ile bildirilirbir altın sarı için, hangi AGNPS bir yüzey plazmon rezonans maksimum (Şekil 1B) bir özelliğidir. </li><li> Reaksiyon tamamlandıktan sonra, kolloid buzdolabında soğutun. Kolloid tutarlı kalmıştır varsa Kolloidal AgNP toplu bir hafta sonra kombine edilebilir, yani kolloidal çözelti toplanmaz ve toplu mümkün toplama veya kirleticileri belirlemek için UV-Vis absorpsiyon spektrofotometresi ve Raman spektroskopisi ile karakterize edilmiştir. </li></ol> 2. Kolloidal AGNPS Karakterizasyonu Bir Cary 50 UV-VIS-NIR spektrofotometre (Varian Inc) ve bir Olympus BX41 konfokal mikroskop Raman donatılmış bir LabRamHR 800 Raman sistemi (Horiba Jobin Yvon, Inc) AgNP karakterizasyonu için kullanılmıştır. Cary WinUV yazılım LabSpec v.5 ve Kökeni 8.0 yazılımı veri toplama ve analiz için kullanılmıştır. Not: tedarik parametreleri fo optimize edilmesi gerekmektedirr diğer enstrümantasyon modelleri. UV-Vis Spektrofotometresi üzerinden Kolloidal AGNPS bir Yüzey Plazmon Rezonans Belirlenmesi <ol><li> 1:10 hacim oranında Creighton kolloid ve ultra saf su ile 1 cm 3 tek küvetini doldurun. Boş bir temel düzeltme için ultra saf su ile başka bir 1 cm 3 küvetini doldurun. Bir Kimwipe ile her ikisi de küvetlerin dışında silin. </li><li> 1.0 Y maksimum -0,5 bir Y den en az absorbans moduna spektrofotometre ayarlayın. 200-800 nm X tarama penceresinde ayarlayın ve taban düzeltme ile 4,800 nm dk -1 hızlı tarama hızı seçin. </li><li> Cihaz içine su dolu küvet takın ve bir temel taraması çalıştırın. Gerekirse sıfır olmayan bir temel kontrolü elde edilene kadar tekrarlayın. </li><li> Örnek küveti ile boş küvetin değiştirin ve kolloidal numunenin UV-Vis absorpsiyon spektrumu (Şekil 1C) toplanması için bir absorbans tarama başlatabilir. </li&gt; </ol> Raman spektroskopisi ile Kolloidal AGNPS Saflık Testi Video gösterisi (10-15 dak video) zamanaşımı ve protokol metni alan kısıtlaması (en fazla 3 sayfa) nedeniyle, bu deneysel bölümde videoya olmayacaktır. <ol start="5"><li> Uyarma kaynağı (632,8 nm He-Ne), filtre (hiçbir filtre, numune, lazer gücünü ~ 17 mW), konfokal deliği (300 mikron), spektrometre (730 cm -1), holografik parmaklığı aşağıdaki gibidir: Cihaz parametre ayarlarını (600 bahçeleri / mm), objektif lens (50x uzun bir çalışma mesafesi hava objektif), maruz kalma süresi (30 sn) ve birikim döngüleri (5). </li><li> Kolloid ile 2 ml kuvars küvetine doldurmak için temiz bir pipet kullanın ve yavaşça fişi takın. Küvetin yüzeyinden parmak izleri, lekeler veya kolloid kapalı temiz bir Kimwipe kullanın. Anlamlı mikroskop sahne indirin. 50x objektif lens seçin ve sahneye küvet yerleştirin. </li><li> Las Odakdoğrudan cihaz ve Olympus kameranın video modunu kullanarak küvetin iç duvar altında AgNP kolloid üzerine er kiriş. Oda ışıkları kapatın ve Raman spektrumu (Şekil 1D) kazanır. </li></ol> 3. Teğet Akış Ultrafiltrasyon (TFU) aracılığıyla Boyutu seçimi ve Kolloidal AGNPS Yoğunlaşması Bir KrosFlo II Araştırma filtre sistemi (Spectrum Laboratories, Rancho Dominguez, CA) AgNP polidispersite sınırlamak için ve onları (Şekil 2) yoğunlaştırmak için kullanılmıştır. TFU işlemi üç adımlar şunlardır: bir 50 nm MidiKros polisülfon modül (460 cm 2), 2) boyutu seçimi ve konsantrasyonu kullanılarak AGNPS ve 50 nm arasında AgNP-agrega çap ve daha büyük (1) boyutu seçimi , 100 kD MicroKros polisülfon filtresi (20 cm2) (Şekil 3) ile bir 100 kD MidiKros filtre (200 cm 2) ve (3) daha fazla hacim azalması ile çapı 1-20 nm AGNPS. <ol><li> 2A Şekil göre peristaltik pompa boyutu 17 MASTERFLEX besleme hortumu bağlayın. Y-bağlantı ve boru bağlantı kurulumu için gerekli olacaktır. 50-nm MidiKros modülü tüp takın. Zip bağları kullanarak filtre hortumu güvenli olduğundan emin olun. BOYUT düğmesini kullanarak tüp boyutu 17 seçin. </li><li> DIR düğmesi kullanılarak pompa yönü saat yönünün tersi seçin. MODE düğmesine INT açık olduğundan emin olun. </li><li> Pompayı çalıştırmadan önce 300 Aşağıda ml dak -1 pompa hızı düşürün. Pompa hızı ikinci boru boyutuna göre ayarlanmalıdır. Bu, operatör derhal olası kaçak ancak yine de astarlama sisteminin bir etkiye sahip olmak için yeterince büyük reaksiyona izin vermek için küçük bir ayar olmalıdır. Haznesinden tüp ve filtre içine kolloid çekmek için gereken vakumu yaratmak için, hortumun orta Y-birleşme bölgesinin üst kısmına doğru, filtrenin alt bölümünde yol açar boru kesilir. </li><li&gt; Rezervuar şişeye filtresinden açar tüp bölümüne yerleştirin ve bir kelepçe veya elle Y-kavşak yakınında borunun alt kısmı kelepçe. Pompayı çalıştırın. Oluşturulan vakum kolloid sifonlamakla başlamalıdır. </li><li> Sıvı tüp aracılığıyla serbestçe sonra, pompa kapatmak bir boru kavşak ile tüp kırık bölümü katılmak ve zip bağları ile sabitleyin. Pompayı yeniden açın ve filtrasyon devam. </li><li> Sızıntı boru devresini kontrol edin. Bir sızıntı bulunursa, bir zip kravat uydurma ayarlama veya yeniden güvence altına alarak sızıntısı düzeltmez. Bir kez tüp sistemi pompa debisi hiçbir büyük 700 ml&#39;den dk -1 artabilir sızıntı ücretsiz olduğunu. Bu pompa hızı değeri boru arızasından kaçınmak için tüp büyüklüğüne göre optimize edilmelidir. Rezervuar şişe içinde sıvı neredeyse hiçbir şey bitene kadar filtrasyon devam edin. </li><li> Filtreleme işlemi tamamlandıktan sonra, 50 nm çaplı ve Smal ve AGNPS içeren süzüntü toplamakler. Retentat belirli AgNP uygulamaya göre daha fazla analiz için kaydedilebilir. </li></ol> Adım 2 <ol start="8"><li> % 2 HNO 3 ve önce 100 kD MidiKros 50 nm modül için olduğu gibi, aynı ayar kullanarak filtre yüklenmesi için saf su ile birlikte tüp durulayın. </li><li> 100-kD MidiKros modülünü kullanarak 3.3 adımı yineleyin. </li><li> Filtreleme işlemi tamamlandıktan sonra, tüp ve filtre (100 kD retentat) içeriğini toplamak. Hacim yaklaşık 50 ml olmalıdır. </li></ol> Adım 3 <ol start="11"><li> 2B Şekil göre peristaltik pompaya FİLTRE boyutu 14 MASTERFLEX tüp ve 100 kD MicroKros bağlayın. Zip bağları ile tüm kavşaklar sabitleyin. SIZE düğmesine ve 30 ml dak -1 pompa hızı düşük kullanılarak pompa hortumunu boyutu 14 seçin. </li><li> Filtrasyon işlemine başlayın. Sızıntı boru devresini kontrol edin. Bir sızıntı bulunursa, uygun ayarlayarak sızıntısı düzeltmezting veya yeniden güvence zip kravat. </li><li> Bir kez tüp sistemi sızıntı ücretsiz, pompa debisi hiçbir büyük 90 ml&#39;den dk -1 artabilir. Rezervuar şişe içinde kalan sıvı konsantre asgari bir miktarını içeren kadar filtrasyon devam edin. </li><li> Tüp ve filtre kalan içerik pompa çalışır durumdayken şişe besleme borusu kaldırarak rezervuar şişe içine alınabilir. Boru ve filtre içerikleri rezervuar şişe girdikten sonra, pompa kapalı olabilir. </li></ol> 4. Endüktif Eşleşmiş Plazma Optik Emisyon Spektroskopisi (ICP-OES) ile Kolloidal AGNPS Gümüş Tutar Kantitasyonu Her kolloidal numune kimyasal sindirildi ve gümüş miktarı A 710E spektrometre (Varian Inc) kullanarak ICP-OES ile ölçüldü. Gümüş için lineer regresyon kalibrasyon eğrisi (Şekil 4) sekiz gümüş standartlar (0, 3 kullanılarak inşa edildiEser metal analiz (Ultra Scientific) için bir 10,000 ug ml-1 gümüş standart elde edildi, 7, 10, 15, 25, 50, ve 100 ug M-1). <ol><li> Kimyasal HNO 3 örnekleri kullanılarak sindirmek. Temsili numuneler orijinal kolloid (adım 1), 50-nm süzüntü (adım 1), 100-kD retentat (adım 2), ve son 100-kD retentat (adım 3) (Şekil 3). </li><li> Için ilk olarak 100 kD retentat için 50 nm süzüntü, 1/25.000 için orijinal koloit, 1:1000 için 1:1000, ve 1:250,000: Örnekler% 2 HNO 3 Aşağıdaki birim oranlarını kullanan ile sulandırılıp Nihai 100 kD retentat. Gümüş liç önlemek için, tüm örneklerin düşük yoğunluklu polipropilen kaplarda muhafaza edilmelidir. </li><li> Ag için dalga boyu (328,068 nm), güç (1.20 kW), plazma akışı (15.0 L dk -1), Yardımcı akım (1,50 L dak -1) ve nebulizatör basınç (200 kPa aşağıdaki gibidir: ICP-OES cihazı parametreleri ayarlayın ). </li><li> Her sample 10 saniyelik bir süre ile tekrarlanan üç kopya halinde ölçülmelidir. 15 sn ve 30 sn numune alımı gecikme Arasında ölçümü stabilizasyon zamanı kullanılmalıdır. Bir yöntem boş çapraz kontaminasyon riskini azaltmak için her numune arasındaki getirilmelidir. </li></ol> 5. Transmisyon Elektron Mikroskobu (TEM) ile Kolloidal AGNPS Büyüklüğü Dağılımı A Phillips EM 208S TEM koloidal AGNPS görselleştirmek için kullanılmıştır. Elektron mikroskop yüksek çözünürlüklü Gatan Bioscan fotoğraf makinesiyle çekilmiştir ve ImageJ yazılım analiz edilmiştir. 24 <ol><li> Ultra saf su (1:100 hacim oranında) ile 100 kD retentat örnek seyreltilir. 300-örgü formvar kaplı altın ızgaraları (Elektron Mikroskobu Bilimler) üzerine orijinal kolloid ve seyreltilmiş 100-kD retentat (adım 3) Mevduat 20 ul. Izgaraları bir desikatörde kurumaya bırakın. Bir gün içinde görüntüle. </li><li> AGNPS görselleştirmek için 70 kV TEM aracın hızlanma potansiyeli ayarlayın. Cyüksek çözünürlüklü kamera kullanarak elektron mikroskop (Şekil 5) apture ve etiketli görüntü dosya biçimi (TIFF) olarak kaydedebilirsiniz. </li></ol> 6. Temsilcisi Sonuçlar Kolloidal AGNPS Sentezi ve Karakterizasyonu Creighton kolloidal AGNPS Dört litre başarıyla Şekil 1A görüntülenen kurulum kullanılarak sentezlenmiştir. Nihai kolloid karakteristik altın sarısı bir renk (Şekil 1B). 22, 23 Bu kolloid UV-Vis absorpsiyon spektrumu 394 nm (Şekil 1C) tipik bir keskin, simetrik yüzey plazmon pik (SPR) vardı. Özgün Creighton koloit ve son 100 kD retentat ve Raman spektrumu sadece üç yani titreşim modlarının, bükme (1640 cm-1) ve H2O arasında simetrik ve asimetrik germe modları (3245 cm-1 ve 3390 cm-1 sunulmuştur , sırasıyla) (Şekil 1D). &lt;/ P&gt; Kolloidal AGNPS arasında TFU TFU kurulum ve 3-adım TFU sürecinin şematik, sırasıyla Şekiller 2 ve 3 &#39;te gösterilmektedir. 1. Aşamada, bir 50 nm filtre (460 cm2) için kullanılmıştır boyutu-seçme ve orijinal kolloid (50 nm retentat yaklaşık 100 mL) 50-mil çaplı ve daha büyük AGNPS ve AgNP-agregatları uzaklaştırmak için. Bu adım aynı zamanda 50-nm süzüntü 3.9 L aşağı orijinal kolloid 4 L küçük bir hacim azalması eşlik etti. Hiçbir bozulma geri yıkama ya da akış adımı kullanıldı. Büyük hacim azaltma (yani, su kaldırma) 50-nm süzüntü sonradan 100 kD filtresi (200 cm 2) ile çalıştırıldı 2. adımda elde edildi. Elde edilen 100 kD retentat 50 ml&#39;lik bir toplam hacmine sahipti. Sentez yan ve fazla reaktifler çoğu su çözücü (100 kD süzüntü 3.850 ml) ile bu adımda bertaraf edildi. Dahası, konsantrasyon AgNP addit elde edilmiştirDaha önce rapor edilen prosedür için üçüncü bir süzme aşaması. 19, bu adım 3, daha küçük bir yüzey alanı (20 cm 2) yaklaşık 100 kD bir filtrede iyon 4.0 ml ile 100 kD retentat hacmi azalır. TEM ölçümler bu son 100 kD retentat çapı 1-20 nm asılıyor toplu AGNPS çoğunlukla oluşur olduğunu gösterecektir. Kolloidal AGNPS ICP-OES ve TEM Gümüş için bir lineer regresyon kalibrasyon eğrisi (Şekil 4) sekiz standartları (0, 3, 7, 10, 15, 25, 50, ve 100 ug L-1) imal edilmiştir. Dört temsili örnekleri koloidal her gümüş miktarı, daha sonra bilinen veriler okumada kalibrasyon eğrisinden belirlenmiştir: ilk orijinal kolloid (15.2 ppm, Şekil 3A), 50 nm Süzülen madde (14.1 ppm, Şekil 3B), 100 - kD retentat (683,1 ppm, Şekil 3C) ve son 100-kD retentat (8,538.9 ppm, Şekil 3B).15.2 ppm gerçek verim Creighton reaksiyon için 15.4 ppm tipik teorik verim çok yakındır. AGNPS ve aşırı konsantrasyonu (ppm 8,538.9 4 ml) ile bir son 100 kD retentat (Şekil 3, şişe resim parçalar) için koyu kahverengi için orijinal koloit için altın sarısı renk belirgin bir değişiklik ile yansıtılmıştır. Filtre kalite 1 adım için, özellikle de TFU süreci için kritik olduğu bulunmuştur. Nihai retentat konsantrasyonları 3,390.1 ppm filtreleri (ağırlıklı yepyeni karşı kullanılır) durumuna bağlı 9,333.3 ppm arasında değişmektedir. Membran zarar görür gözenekleri ise, daha az 50 nm&#39;den daha çaplara sahip AGNPS da korunur ve daha sonra süzülen madde toplanır AGNPS toplam miktarını azaltacaktır. Basıncı izleme ve uygun temizlik dahil filtrasyon işlemi optimizasyonu filtrelerin ömrünü artırabilir. Temsilcisi TEM mikrografları<html> özgün Creighton koloit ve son 100 kD retentat (adım 3), sırasıyla, Şekil 5A ve 5C &#39;de gösterilmektedir. Onların Ayrı ayrı devlet, AGNPS daha açık gri arka plan üzerinde siyah yuvarlak alanlar olarak görünür. Yaklaşık olarak 800 AGNPS İki numunenin her birinin TEM mikrografları tespit edilmiştir ve Görüntü J yazılımı kullanılarak analiz edildi. Bir parçacık tam ve kapalı çevre tarafından tanımlanmıştır. Bir alan eşik değer TEM mikrografları çözümüne göre 1.0 nm 2 olarak belirlendi. AgNP sayar ve alan veriler Microsoft Excel ve AgNP çapları ekstrapole edilmiştir içine ihraç edilmiştir. Özgün koloit ve son 100 kD retentat içinde ortalama çap AgNP sırasıyla, 9.3 nm ve 11.1 nm olarak ölçüldü. AGNPS çapı ölçümleri daha sonra Menşe 8.0 yazılımı ihraç edildi ve TEM boyutu histogram (Şekil 5B ve 5D) her bir örnek için inşa edilmiştir. 1 &quot;src =&quot; / files/ftp_upload/4167/4167fig1.jpg &quot;/&gt; Şekil 1. A) Sentez kurulum, B) Karakteristik renk, C) UV-Vis absorpsiyon spektrumu ve Creighton kolloidal AGNPS D) Raman spektrumu. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/4167/4167fig2.jpg" /> Şekil A) 1. ve 2. adımları için 2 TFU deney düzeneği:. I) Rezervuar Creighton kolloidal AGNPS içeren. Süzüntü toplama II) Rezervuar. Tüp III) Y-bağlantı. IV) Peristaltik pompa kafası. . V) Ya 50-nm veya 100-kD Midi Kros filtresi B) Adım 3: I) Rezervuar Creighton kolloidal AGNPS içeren. Süzüntü toplama II) Rezervuar. III) 100-kD Mikro Kros filtresi. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/4167/4167fig3.jpg" /> Şekil 3. Flowchart TFU süreci tasvir. Mavi gölgeli kutular daha fazla analiz için toplanan AGNPS arasında kolloidal süspansiyonlar işaretleyin. Flakon photographs 50-nm süzüntü 100 kD Midi Kros kullanarak hacim küçültme sonrasında elde 50-nm filtresi (460 cm 2), C) ilk 100-kD retentat yoluyla orijinal kolloid işledikten sonra toplanan) A) Orijinal kolloid toplu, B göster Filtre (200 cm 2), ve 100 kD Mikro Kros filtre (20 cm 2) kullanarak hacim azalması sonucu D) nihai 100 kD retentat. 100-kD süzüntü suyu gibi görünüyor. <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/4167/4167fig4.jpg" /> Şekil 4, sekiz gümüş standartları kullanılarak yapılan okumada doğrusal kalibrasyon:. 0, 3, 7, 10, 15, 25, 50, ve 100 ug L-1. <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/4167/4167fig5.jpg" /> A) Orijinal Creighton AGNPS ve C Şekil 5. TEM mikrografları) son 100-kD retentat (ölçek çubuğu100 nm). TEM boyutu histogramlar B için yaklaşık 800 AGNPS) orijinal Creighton AGNPS analiz ederek inşa, ve D) son 100-kD retentat. Şekil 5B içerlek karşılaştırma amacıyla genişletilmiş 41-75 nm boyut aralığı gösterir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/4167/4167fig5large.jpg" target="_blank">büyük bir rakam görmek için buraya tıklayın</a> .

<ol>
	<li>Savage, N., Diallo, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomaterials+and+Water+Purification:+Opportunities+and+Challenges.">Nanomaterials and Water Purification: Opportunities and Challenges.</a> Journal of Nanoparticle Research. 7, 331-342 (2005).</li><li>Jain, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+Nanoparticles+in+Therapeutics:+Development+of+an+Antimicrobial+Gel+Formulation+for+Topical+Use.">Silver Nanoparticles in Therapeutics: Development of an Antimicrobial Gel Formulation for Topical Use.</a> Mol. Pharmaceutics. 6, 1388-1401 (2009).</li><li>Dal Lago, V., Franca, d. O., de, A. G., Kobarg, J., Borba Cardoso, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size-selective+silver+nanoparticles:+future+of+biomedical+devices+with+enhanced+bactericidal+properties.">Size-selective silver nanoparticles: future of biomedical devices with enhanced bactericidal properties.</a> J. Mater. Chem. 21, 12267-12273 (2011).</li><li>Panacek, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+Colloid+Nanoparticles:+Synthesis,+Characterization,+and+Their+Antibacterial+Activity.">Silver Colloid Nanoparticles: Synthesis, Characterization, and Their Antibacterial Activity.</a> J. Phys. Chem. B. 110, 16248-16253 (2006).</li><li>Elechiguerra, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+of+silver+nanoparticles+with+HIV-1.">Interaction of silver nanoparticles with HIV-1.</a> Journal of Nanobiotechnology. 3, 6 (2005).</li><li>Jana, N. R., Sau, T. K., Pal, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growing+Small+Silver+Particle+as+Redox+Catalyst.">Growing Small Silver Particle as Redox Catalyst.</a> J. Phys. Chem. B. 103, 115-121 (1999).</li><li>Tolaymat, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+evidence-based+environmental+perspective+of+manufactured+silver+nanoparticle+in+syntheses+and+applications:+A+systematic+review+and+critical+appraisal+of+peer-reviewed+scientific+papers.">An evidence-based environmental perspective of manufactured silver nanoparticle in syntheses and applications: A systematic review and critical appraisal of peer-reviewed scientific papers.</a> Sci. Total Environ. 408, 999-1006 (2010).</li><li>Willets, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface-enhanced+Raman+scattering+(SERS)+for+probing+internal+cellular+structure+and+dynamics.">Surface-enhanced Raman scattering (SERS) for probing internal cellular structure and dynamics.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 394, 85-94 (2009).</li><li>Novak, J. P., Nickerson, C., Franzen, S., Feldheim, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+Molecularly+Bridged+Metal+Nanoparticle+Arrays+by+Centrifugation+and+Size+Exclusion+Chromatography.">Purification of Molecularly Bridged Metal Nanoparticle Arrays by Centrifugation and Size Exclusion Chromatography.</a> Anal. Chem. 73, 5758-5761 (2001).</li><li>Hossain, M. K., Kitahama, Y., Huang, G. G., Han, X., Ozaki, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface-enhanced+Raman+scattering:+realization+of+localized+surface+plasmon+resonance+using+unique+substrates+and+methods.">Surface-enhanced Raman scattering: realization of localized surface plasmon resonance using unique substrates and methods.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 394, 1747-1760 (2009).</li><li>Henglein, A., Giersig, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+Colloidal+Silver+Nanoparticles:+Capping+Action+of+Citrate.">Formation of Colloidal Silver Nanoparticles: Capping Action of Citrate.</a> J. Phys. Chem. B. 103, 9533-9539 (1999).</li><li>Sapsford, K. E., Tyner, K. M., Dair, B. J., Deschamps, J. R., Medintz, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analyzing+Nanomaterial+Bioconjugates:+A+Review+of+Current+and+Emerging+Purification+and+Characterization+Techniques.">Analyzing Nanomaterial Bioconjugates: A Review of Current and Emerging Purification and Characterization Techniques.</a> Anal. Chem. 83, 4453-4488 (2011).</li><li>Al-Somali, A., Krueger, K. M., Falkner, J. C., Colvin, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recycling+Size+Exclusion+Chromatography+for+the+Analysis+and+Separation+of+Nanocrystalline+Gold.">Recycling Size Exclusion Chromatography for the Analysis and Separation of Nanocrystalline Gold.</a> Anal. Chem. 76, 5903-5910 (2004).</li><li>Hanauer, M., Pierrat, S., Zins, I., Lotz, A., Sonnichsen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Separation+of+Nanoparticles+by+Gel+Electrophoresis+According+to+Size+and+Shape.">Separation of Nanoparticles by Gel Electrophoresis According to Size and Shape.</a> Nano Lett. 7, 2881-2885 (2007).</li><li>Sweeney, S. F., Woehrle, G. H., Hutchison, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Purification+and+Size+Separation+of+Gold+Nanoparticles+via+Diafiltration.">Rapid Purification and Size Separation of Gold Nanoparticles via Diafiltration.</a> J. Am. Chem. Soc. 128, 3190-3197 (2006).</li><li>Clarke, N. Z., Waters, C., Johnson, K. A., Satherley, J., Schiffrin, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size-Dependent+Solubility+of+Thiol-Derivatized+Gold+Nanoparticles+in+Supercritical+Ethane.">Size-Dependent Solubility of Thiol-Derivatized Gold Nanoparticles in Supercritical Ethane.</a> Langmuir. 17, 6048-6050 (2001).</li><li>Schaaff, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Smaller+Nanocrystal+Au+Molecules:+Robust+Quantum+Effects+in+Optical+Spectra.">Isolation of Smaller Nanocrystal Au Molecules: Robust Quantum Effects in Optical Spectra.</a> J Phys Chem B. 101, 7885-7891 (1997).</li><li>Trefry, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size+Selection+and+Concentration+of+Silver+Nanoparticles+by+Tangential+Flow+Ultrafiltration+for+SERS-Based+Biosensors.">Size Selection and Concentration of Silver Nanoparticles by Tangential Flow Ultrafiltration for SERS-Based Biosensors.</a> J. Am. Chem. Soc. 132, 10970-10972 (2010).</li><li>Bhattacharjee, S., Bhattacharjee, C., Datta, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+fractionation+of+&#38;+beta-lactoglobulin+from+casein+whey+using+ultrafiltration+and+ion-exchange+membrane+chromatography.">Studies on the fractionation of &#38; beta-lactoglobulin from casein whey using ultrafiltration and ion-exchange membrane chromatography.</a> J. Membr. Sci. 275, 141-150 (2006).</li><li>Eppler, A., Weigandt, M., Schulze, S., Hanefeld, A., Bunjes, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+different+protein+concentration+techniques+within+preformulation+development.">Comparison of different protein concentration techniques within preformulation development.</a> Int. J. Pharm. 421, 120-129 (2011).</li><li>Creighton, J. A., Blatchford, C. G., Albrecht, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+resonance+enhancement+of+Raman+scattering+by+pyridine+adsorbed+on+silver+or+gold+sol+particles+of+size+comparable+to+the+excitation+wavelength.">Plasma resonance enhancement of Raman scattering by pyridine adsorbed on silver or gold sol particles of size comparable to the excitation wavelength.</a> J. Chem. Soc. Faraday Trans. 2, 790-798 (1979).</li><li>Pavel, I. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimating+the+Analytical+and+Surface+Enhancement+Factors+in+Surface-Enhanced+Raman+Scattering+(SERS):+A+Novel+Physical+Chemistry+and+Nanotechnology+Laboratory+Experiment.">Estimating the Analytical and Surface Enhancement Factors in Surface-Enhanced Raman Scattering (SERS): A Novel Physical Chemistry and Nanotechnology Laboratory Experiment.</a> J. Chem. Educ. , (2011).</li><li>Rasband, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> ImageJ. , (1997).</li><li>Kelly, K. L., Coronado, E., Zhao, L. L., Schatz, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Optical+Properties+of+Metal+Nanoparticles:+The+Influence+of+Size,+Shape,+and+Dielectric+Environment.">The Optical Properties of Metal Nanoparticles: The Influence of Size, Shape, and Dielectric Environment.</a> J. Phys. Chem. B. 107, 668-677 (2003).</li><li>&#346;ileikait&#267;, A., Prosy&#269;evas, I., Pui&#353;o, J., Juraitis, A., Guobien&#267;, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+Silver+Nanoparticles+Produced+by+Chemical+Reduction+of+Silver+Salt+Solution.">Analysis of Silver Nanoparticles Produced by Chemical Reduction of Silver Salt Solution.</a> Mater. Sci. (Medziagotyra). 12, 287-291 (2006).</li><li>Lewis, L. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+catalysis+by+colloids+and+clusters.">Chemical catalysis by colloids and clusters.</a> Chem. Rev. 93, 2693-2730 (1993).</li><li>Li, Y., Wu, Y., Ong, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Facile+Synthesis+of+Silver+Nanoparticles+Useful+for+Fabrication+of+High-Conductivity+Elements+for+Printed+Electronics.">Facile Synthesis of Silver Nanoparticles Useful for Fabrication of High-Conductivity Elements for Printed Electronics.</a> J. Am. Chem. Soc. 127, 3266-3267 (2005).</li><li>Sun, Y., Xia, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shape-Controlled+Synthesis+of+Gold+and+Silver+Nanoparticles.">Shape-Controlled Synthesis of Gold and Silver Nanoparticles.</a> Science. 298, 2176-2179 (2002).</li><li>Han, X., Zhao, B., Ozaki, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface-enhanced+Raman+scattering+for+protein+detection.">Surface-enhanced Raman scattering for protein detection.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 394, 1719-1727 (2009).</li><li>Pavel, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-Free+SERS+Detection+of+Small+Proteins+Modified+to+Act+as+Bifunctional+Linkers.">Label-Free SERS Detection of Small Proteins Modified to Act as Bifunctional Linkers.</a> J. Phys. Chem. C. 112, 4880-4883 (2008).</li><li>Ladner, D. A., Steele, M., Weir, A., Hristovski, K., Westerhoff, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functionalized+nanoparticle+interactions+with+polymeric+membranes.">Functionalized nanoparticle interactions with polymeric membranes.</a> J. Hazard. Mater. , (2011).</li></ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

UV-Vis Absorbsiyon Spektrometresi ve Kolloidal AGNPS Raman Spektroskopisi Bu, iyi bir kolloid absorbsiyon spektrumunu, yüzey plazmon rezonans tepe sayı AGNPS artar simetri olarak azalttığı bilinmektedir. Ayrıca, daha geniş veya daha AgNP toplama kırmızı-kaydırılmış zirveleri görünüme neden olur. 25,26 394 nm &#39;de bir tek, keskin ve simetrik SPR tepe varlığı orta toplama ve boyut dağılımının küçük, yuvarlak AGNPS göstergesidir. <p class="jove_conten...

<table border="1"><tr><td> Gümüş nitrat (AgNO 3) </td><td> Acros Organics Inc </td><td> CAS: 7761-88-8 </td><td></td></tr><tr><td> Sodyum borohidrid (NaBH4) </td><td> Acros Organics Inc </td><td> CAS: 16940-66-2 </td><td></td></tr><tr><td> Nitrik asit (HNO 3, Optima) </td><td> Fisher Scientific Inc </td><td> A467-1 </td><td> ICP analizi için metal tenörü Trace </td></tr><tr><td> 10.000 mg ml -1 gümüş standart, EnviroConcentrate </td><td> Ultra Bilimsel </td><td> ABD-IAA-047 </td><td></td></tr><tr><td> KrosFlo Araştırması II i Teğet Akış Filtrasyon Sistemi </td><td> Spektrum Laboratories Inc </td><td> <a href="http://www.spectrumlabs.com/pshop/RequestPrice/index.html?LiFrom=%2Ffiltration%2FKR2SystemO.html;FrName=Research+IIi+System;Pn=SYR2-U20-01N;" target="_blank">SYR2-U20-01N</a> </td><td></td></tr><tr><td> 0.05 mikron PS (0.5 mm) 460 cm 2 </td><td> Spektrum Laboratories Inc </td><td> <a href="http://www.spectrumlabs.com/filtration/MidiKros.html?Pn=X30S-900-02N;" target="_blank">X30S-900-02N</a> </td><td></td></tr><tr><td> Midi 100 kD PS 200 cm 2 </td><td> Spektrum Laboratories Inc </td><td> X3-100S-901-02N </td><td></td></tr><tr><td> Micro100 kD PS 20 cm 2 </td><td> Spektrum Laboratories Inc </td><td> X1AB-300-10N </td><td></td></tr><tr><td> MASTERFLEX C-Flex hortum L / S Boyutu 17 </td><td> Cole-Palmer Instrument Co </td><td> 06424-17 </td><td></td></tr><tr><td> MASTERFLEX C-Flex hortum L / S Boyutu 14 </td><td> Cole-Palmer Instrument Co </td><td> 06424-14 </td><td></td></tr><tr><td> Cary 50 UV-VIS-NIR spektrofotometre </td><td> Varian Inc </td><td></td><td></td></tr><tr><td> LabRam HR 800 sistemi </td><td> Horiba Jobin Yvon A.Ş. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Varian 710ES ICP-OES </td><td> Varian Inc </td><td></td><td></td></tr></table> Tablo 1. Özgül reaktifler ve ekipman.

tangential flow ultrafiltration: a  &ldquo;green&rdquo; method for the size selection and concentration of colloidal silver nanoparticles

Günümüzde yaygın olarak bunların AGNPS güçlü antimikrobiyel özellikleri nedeniyle tüketici ürünleri, 1 su dezenfektanlar, 2 Therapeutics, 1, 3 ve 4 Biyomedikal cihazların üretiminde kullanılmaktadır. 3-6 Bu nanoparçacık uygulamalar kuvvetle AgNP boyut ve toplama durum tarafından etkilenmektedir . Birçok zorluklar kontrollü imalat 7 ve kapaklama / ajanlar veya organik çözücüler stabilize agresif kimyasal arınmış unfunctionalized, homojen AGNPS büyüklüğü tabanlı yalıtım 4,8 var. 7-13 Sınırlamalar, reaktiflerin toksisitesi yüksek maliyetler ortaya veya azaltılmış AgNP sentez veya izolasyon yöntemleri (örneğin, santrifüj, boyut bağımlı çözünürlük, boyut dışlama kromatografisi vb) verimlilik. 10,14-18 Bunun üstesinden gelmek için, son zamanlarda TFU büyükse, konsantrasyonu üzerinde kontrol ve izin gösterdi Creighton AGNPS (300 agregasyonu devletBöyle Ultrasantrifügasyon gibi izolasyon geleneksel yöntemlere kıyasla 198.7 mg ml -1) 15.3 mg ml -1 ml aşağı 10 ml. 19 TFU genellikle proteinler, virüslerin ve hücrelerin ağırlık temelli izolasyon için kullanılan bir devridaim yöntemi. Kısaca 20,21, sıvı numune kD 1.000 ila 10 kD arasında değişen gözenek büyüklüğüne sahip içi boş elyaf membran bir dizi geçirilir. Büyük bileşenlerin (retentat) aynen korunurken örnek küçük askıya veya çözünmüş bileşenler (süzüntü) çözücü ile birlikte gözenekli bariyer geçecek. TFU o ne zarar örnek olarak &quot;yeşil&quot; bir yöntem olarak kabul veya zehirli aşırı ayıraç ve yan ortadan kaldırmak için ek çözücü gerektirir olabilir. Her ikisi de hidrofobik ve hidrofilik filtreler bulunmaktadır Dahası, TFU nanoparçacıklar büyük bir çeşitlilik için uygulanabilir. Bu çalışmanın iki temel amacı vardı: 1) göstermek içinBir davet video deneyimi ve 2 ile TFU yaklaşımın deneysel yönlerini) kolloidal nanopartiküller ve retentat daha küçük hacimli büyük hacimler için TFU yöntemin uygulanabilirliğini göstermek için. İlk olarak, unfuctionalized AGNPS (4 L, 15.2 ug ml-1) NaBH4 ile AgNO 3 azaltılması ile iyi kurulmuş Creighton 22,23 yöntem kullanılarak sentezlendi. AgNP polidispersite sonra iki 100-kD (200 cm 2 ve 20 cm 2) Filtreleri takip AGNPS ve AgNP-agrega daha büyük 50 nm, kaldırmak için bir 50-nm filtresi (460 cm 2) kullanılarak bir 3-adım TFU yoluyla minimize edildi AGNPS konsantre. Örnek örnekleri transmisyon elektron mikroskobu, UV-Vis absorpsiyon spektrofotometresi, Raman spektroskopisi ve indüktif eşleşmiş plazma optik emisyon spektroskopisi ile karakterize edildi. Nihai retentat yüksek konsantrasyonlu (4 mi, 8,539.9 mg ml-1) henüz birleştirilmiş ve homojen aşağı oluşuyorduÇapı 1-20 nm AGNPS. Bu, yaklaşık% 62 arasında bir konsantrasyonda gümüş verim karşılık gelir.

Watch this Scientific Journal Video about Tangential Flow Ultrafiltration: A  â€œGreenâ€ Method for the Size Selection and Concentration of Colloidal Silver Nanoparticles at JoVE.com

Tangential Flow Ultrafiltration: A  &amp;ldquo;Green&amp;rdquo; Method for the Size Selection and Concentration of Colloidal Silver Nanoparticles

Teğet Akış ultrafiltrasyon (TFU) biosamples ağırlığı bazlı ayrılması için kullanılan bir devridaim yöntemi. TFU boyutu-select (1-20 nm çapında) uyarlanmış ve yüksek polidispers gümüş nanopartikülleri büyük bir hacmi (15.2 mikrogram ml 4 L konsantre edildi<sup&gt; -1</sup8,539.9 mikrogram ml&gt; 4 aşağı ml<sup&gt; -1</sup&gt;) Minimal agregasyonu ile.

Teğet Akış Ultrafiltrasyon: Kolloidal Gümüş Nanopartiküllerin Boyutu Seçme ve Konsantrasyon için &quot;Yeşil&quot; Yöntemi

Nowadays, AgNPs are extensively used in the manufacture of consumer products,1 water disinfectants,2 therapeutics,1, 3 and biomedical devices4 due to ...

tangential-flow-ultrafiltration-green-method-for-size-selection

Research

JoVE Journal

Biology

Tangential Flow Ultrafiltration: A  &ldquo;Green&rdquo; Method for the Size Selection and Concentration of Colloidal Silver Nanoparticles

17.7K Görüntüleme.  Wright State University. Teğet Akış ultrafiltrasyon (TFU) biosamples ağırlığı bazlı ayrılması için kullanılan bir devridaim yöntemi. TFU boyutu-select (1-20 nm çapında) uyarlanmış ve yüksek polidispers gümüş nanopartikülleri büyük bir hacmi (15.2 mikrogram ml 4 L konsantre edildi -1 4 aşağı ml -1) Minimal agregasyonu ile.

Video: Tangential Flow Ultrafiltration: A  &ldquo;Green&rdquo; Method for the Size Selection and Concentration of Colloidal Silver Nanoparticles

A Method for 2-Photon Imaging of Blood Flow in the Neocortex through a Cranial Window

The ability to image the cerebral vasculature (from large vessels to capillaries) and record blood flow dynamics in the intact brain of living rodents is a powerful technique. Using in vivo 2-photon microscopy through a cranial window it is possible to image fluorescent dyes injected intravenously. This permits one to image the cortical vasculature and also to obtain measurements of blood flow. This technique was originally developed by David Kleinfeld and Winfried Denk. The method can be used to study blood flow dynamics during or after cerebral ischemia, in neurodegenerative disorders, in brain tumors, or in normal brain physiology. For example, it has been used to study how stroke causes shifts in blood flow direction and changes in red blood cell velocity or flux in and around the infarct. Here we demonstrate how to use 2-photon microscopy to image blood flow dynamics in the neocortex of living mice using fluorescent dyes injected into the tail vein.

Cortical blood flow dynamics can be studied in vivo by imaging fluorescent dextran dyes injected into the tail vein of rodents with 2-photon microscopy. This video shows how to image blood flow dynamics in neocortex of mice through a glass-covered cranial window preparation.

Kranial Pencere üzerinden neokorteks Kan Akış 2-Foton Görüntüleme Bir Yöntem

The ability to image the cerebral vasculature (from large vessels to capillaries) and record blood flow dynamics in the intact brain of living rodents is ...

Biyoloji

Use of Rotorod as a Method for the Qualitative Analysis of Walking in Rat

High speed videoanalysis of the details of movement can provide a source of information about qualitative aspects of walking movements. When walking on a rotorod, animals remain in approximately the same place making repetitive movements of stepping. Thus the task provides a rich source of information on the details of foot stepping movements. Subjects were hemi-Parkinson analogue rats, produced by injection of 6-hydroxydopamine (6-OHDA) into the right nigrostriatal bundle to deplete nigrostriatal dopamine (DA). The present report provides a video analysis illustration of animals previously were filmed from frontal, lateral, and posterior views as they walked (15). Rating scales and frame-by-frame replay of the video records of stepping behavior indicated that the hemi-Parkinson rats were chronically impaired in posture and limb use contralateral to the DA-depletion. The contralateral limbs participated less in initiating and sustaining propulsion than the ipsilateral limbs. These deficits secondary to unilateral DA-depletion show that the rotorod provides a use task for the analysis of stepping movements.

The rotorod test is used to assess motor status in the walking movement of hemi-Parkinson analogue rats.

Rotorod Rat Yürüyüş Kalitatif Analiz için bir yöntem olarak kullanımı

High speed videoanalysis of the details of movement can provide a source of information about qualitative aspects of walking movements. When walking on a ...

A Microfluidic Device for Quantifying Bacterial Chemotaxis in Stable Concentration Gradients

Chemotaxis allows bacteria to approach sources of attractant chemicals or to avoid sources of repellent chemicals. Bacteria constantly monitor the concentration of specific chemoeffectors by comparing the current concentration to the concentration detected a few seconds earlier. This comparison determines the net direction of movement. Although multiple, competing gradients often coexist in nature, conventional approaches for investigating bacterial chemotaxis are suboptimal for quantifying migration in response to concentration gradients of attractants and repellents. Here, we describe the development of a microfluidic chemotaxis model for presenting precise and stable concentration gradients of chemoeffectors to bacteria and quantitatively investigating their response to the applied gradient. The device is versatile in that concentration gradients of any desired absolute concentration and gradient strength can be easily generated by diffusive mixing. The device is demonstrated using the response of Escherichia coli RP437 to gradients of amino acids and nickel ions.

This protocol describes the development of a microfluidic device for investigating bacterial chemotaxis in stable concentration gradients of chemoeffectors.

Kararlı Konsantrasyon Degradeler Bakteriyel Kemotaksis miktarının mikroakışkan Aygıt

Chemotaxis allows bacteria to approach sources of attractant chemicals or to avoid sources of repellent chemicals. Bacteria constantly monitor the ...

Analysis of the Development of a Morphological Phenotype as a Function of Protein Concentration in Budding Yeast

Gene deletion and protein overexpression are common methods for studying functions of proteins. In this article, we describe a protocol for analysis of phenotype development as a function of protein concentration at population and single-cell levels in Saccharomyces cerevisiae. Although this protocol is based on the overexpression of a protein, it can easily be adapted for morphological phenotypes dependent on suppression of protein expression. Our lab is interested in studying the signaling properties of the endocytic adaptor protein epsin. To that purpose we used a dominant negative approach in which we over-expressed the conserved Epsin N-Terminal Homology (ENTH) domain in order to interfere with the functions of endogenous epsin-2 (Ent2 or YLR206W). We observed that overexpression of the ENTH domain of Ent2 (ENTH2) in wild type cells led to a cell division defect that is dependent on the mislocalization of a family of scaffolding proteins, septins.

Gene deletion and protein overexpression are common methods for studying functions of proteins. In this article, we describe a protocol for analysis of phenotype development as a function of protein concentration at population and single-cell levels in Saccharomyces cerevisiae.

Geliştirici Maya Protein Konsantrasyonu bir işlev olarak Morfolojik Fenotip Kalkınma Analizi

Gene deletion and protein overexpression are common methods for studying functions of proteins. In this article, we describe a protocol for analysis of ...

Flow Cytometry Purification of Mouse Meiotic Cells

The heterogeneous nature of cell types in the testis and the absence of meiotic cell culture models have been significant hurdles to the study of the unique differentiation programs that are manifest during meiosis. Two principal methods have been developed to purify, to varying degrees, various meiotic fractions from both adult and immature animals: elutriation or Staput (sedimentation) using BSA and/or percoll gradients. Both of these methods rely on cell size and density to separate meiotic cells1-5. Overall, except for few cell populations6, these protocols fail to yield sufficient purity of the numerous meiotic cell populations that are necessary for detailed molecular analyses. Moreover, with such methods usually one type of meiotic cells can be purified at a given time, which adds an extra level of complexity regarding the reproducibility and homogeneity when comparing meiotic cell samples.
Here, we describe a refined method that allows one to easily visualize, identify, and purify meiotic cells, from germ cells to round spermatids, using FACS combined with Hoechst 33342 staining7,8. This method provides an overall snapshot of the entire meiotic process and allows one to highly purify viable cells from most stage of meiosis. These purified cells can then be analyzed in detail for molecular changes that accompany progression through meiosis, for example changes in gene expression9,10and the dynamics of nucleosome occupancy at hotspots of meiotic recombination11.

An efficient method to obtain highly purified viable meiotic fractions from mouse testis is described, which combines a refined cell dissociation protocol with fluorescent activated cell sorting (FACS). This method takes advantage of differences in the DNA content and nuclear density of discrete meiotic fractions.

Fare Mayotik Hücreler Sitometrisi Arıtma

The heterogeneous nature of cell types in the testis and the absence of meiotic cell culture models have been significant hurdles to the study of the ...

Optimized Staining and Proliferation Modeling Methods for Cell Division Monitoring using Cell Tracking Dyes

Fluorescent cell tracking dyes, in combination with flow and image cytometry, are powerful tools with which to study the interactions and fates of different cell types in vitro and in vivo.1-5 Although there are literally thousands of publications using such dyes, some of the most commonly encountered cell tracking applications include monitoring of:
<ol>
	<li>stem and progenitor cell quiescence, proliferation and/or differentiation6-8</li>
	<li>antigen-driven membrane transfer9 and/or precursor cell proliferation3,4,10-18 and</li>
	<li>immune regulatory and effector cell function1,18-21.</li>
</ol>
Commercially available cell tracking dyes vary widely in their chemistries and fluorescence properties but the great majority fall into one of two classes based on their mechanism of cell labeling. "Membrane dyes", typified by PKH26, are highly lipophilic dyes that partition stably but non-covalently into cell membranes1,2,11. "Protein dyes", typified by CFSE, are amino-reactive dyes that form stable covalent bonds with cell proteins4,16,18. Each class has its own advantages and limitations. The key to their successful use, particularly in multicolor studies where multiple dyes are used to track different cell types, is therefore to understand the critical issues enabling optimal use of each class2-4,16,18,24.
The protocols included here highlight three common causes of poor or variable results when using cell-tracking dyes. These are:
<ol>
	<li>Failure to achieve bright, uniform, reproducible labeling. This is a necessary starting point for any cell tracking study but requires attention to different variables when using membrane dyes than when using protein dyes or equilibrium binding reagents such as antibodies.</li>
	<li>Suboptimal fluorochrome combinations and/or failure to include critical compensation controls. Tracking dye fluorescence is typically 102 - 103 times brighter than antibody fluorescence. It is therefore essential to verify that the presence of tracking dye does not compromise the ability to detect other probes being used.</li>
	<li>Failure to obtain a good fit with peak modeling software. Such software allows quantitative comparison of proliferative responses across different populations or stimuli based on precursor frequency or other metrics. Obtaining a good fit, however, requires exclusion of dead/dying cells that can distort dye dilution profiles and matching of the assumptions underlying the model with characteristics of the observed dye dilution profile.</li>
</ol>
Examples given here illustrate how these variables can affect results when using membrane and/or protein dyes to monitor cell proliferation.

Successful use of cell tracking dyes to monitor immune cell function and proliferation involves several critical steps. We describe methods for: 1) obtaining bright, uniform, reproducible label-ing with membrane dyes; 2) selecting fluorochromes and data acquisition conditions; and 3) choosing a model to quantify cell proliferation based on dye dilution.

Cep Takip Boyalar kullanarak Hücre Bölünmesi İzleme için optimize Boyama ve Çoğalma Modelleme Yöntemleri

Fluorescent cell tracking dyes, in combination with flow and image cytometry, are powerful tools with which to study the interactions and fates of ...

A Protocol for Phage Display and Affinity Selection Using Recombinant Protein Baits

Using recombinant phage as a scaffold to present various protein portions encoded by a directionally cloned cDNA library to immobilized bait molecules is an efficient means to discover interactions. The technique has largely been used to discover protein-protein interactions but the bait molecule to be challenged need not be restricted to proteins. The protocol presented here has been optimized to allow a modest number of baits to be screened in replicates to maximize the identification of independent clones presenting the same protein. This permits greater confidence that interacting proteins identified are legitimate interactors of the bait molecule. Monitoring the phage titer after each affinity selection round provides information on how the affinity selection is progressing as well as on the efficacy of negative controls. One means of titering the phage, and how and what to prepare in advance to allow this process to progress as efficiently as possible, is presented. Attributes of amplicons retrieved following isolation of independent plaque are highlighted that can be used to ascertain how well the affinity selection has progressed. Trouble shooting techniques to minimize false positives or to bypass persistently recovered phage are explained. Means of reducing viral contamination flare up are discussed.

Phage display is a powerful technique to capture proteins or protein moieties that interact with an immobilized molecule of interest. Once a decision of the type of phage cDNA library to create and screen has been made, the protocol described here permits efficient affinity selection leading to identification of interactors.

Rekombinant Protein Yemler Kullanarak Phage Ekran ve Affinity seçimi için Protokol

Using  recombinant phage as a scaffold to present various protein portions encoded by  a directionally cloned cDNA library to immobilized bait molecules ...

An Innovative Method for Exosome Quantification and Size Measurement

Although the biological importance of exosomes has recently gained an increasing amount of scientific and clinical attention, much is still unknown about their complex pathways, their bioavailability and their diverse functions in health and disease. Current work focuses on the presence and the behavior of exosomes (in vitro as well as in vivo) in the context of different human disorders, especially in the fields of oncology, gynecology and cardiology.
Unfortunately, neither a consensus regarding a gold standard for exosome isolation exists, nor is there an agreement on such a method for their quantitative analysis. As there are many methods for the purification of exosomes and also many possibilities for their quantitative and qualitative analysis, it is difficult to determine a combination of methods for the ideal approach. 
Here, we demonstrate nanoparticle tracking analysis (NTA), a semi-automated method for the characterization of exosomes after isolation from human plasma by ultracentrifugation. The presented results show that this approach for isolation, as well as the determination of the average number and size of exosomes, delivers reproducible and valid data, as confirmed by other methods, such as scanning electron microscopy (SEM).

A method for isolation of exosomes from whole blood and further analysis by nanoparticle tracking using a semi-automatic instrument is presented in this article. The presented technology provides an extremely sensitive method for visualizing and analyzing particles in liquid suspension.

Exosome Kantifikasyon ve Boyut Ölçüm Yenilikçi Yöntem

Although the biological importance of exosomes has recently gained an increasing amount of scientific and clinical attention, much is still unknown about ...

Development of a Colloidal Gold-based Immunochromatographic Test Strip for Detection of Cetacean Myoglobin

This protocol describes the development of a colloidal gold immunochromatographic test strip based on the sandwich format that can be used to differentiate the myoglobin (Mb) of cetaceans from that of seals and other animals. The strip provides rapid and on-the-spot screening for cetacean meat, thereby restraining its illegal trade and consumption. Two monoclonal antibodies (mAbs) with reactivity toward the Mb of cetaceans were developed. The amino acid sequences of Mb antigenic reactive regions from various animals were analyzed in order to design two synthetic peptides (a general peptide and a specific peptide) and thereafter raise the mAbs (subclass IgG1). The mAbs were selected from hybridomas screened by indirect ELISA, western blot and dot blot. CGF5H9 was specific to the Mbs of rabbits, dogs, pigs, cows, goats, and cetaceans while it showed weak to no affinity to the Mbs of chickens, tuna and seals. CSF1H13 can bind seals and cetaceans with strong affinity but showed no affinity to other animals. Cetacean samples from four families (Balaenopteridae, Delphinidae, Phocoenidae and Kogiidae) were used in this study, and the results indicated that these two mAbs have broad binding ability to Mbs from different cetaceans. These mAbs were applied on a sandwich-type colloidal gold immunochromatographic test strip. CGF5H9, which recognizes many species, was colloid gold-labeled and used as the detection antibody. CSF1H13, which was coated on the test zone, detected the presence of cetacean and seal Mbs. Muscle samples from tuna, chicken, seal, five species of terrestrial mammals and 15 species of cetaceans were tested in triplicate. All cetacean samples showed positive results and all the other samples showed negative results.

This protocol describes the development of two IgG class monoclonal antibodies (mAbs) strongly reactive to myoglobin of cetaceans. These mAbs are applied on a colloidal gold immunochromatographic test strip based on the sandwich format to differentiate the Mb of cetaceans from seal and other animals.

Deniz Memelileri Miyoglobin Tespiti için bir Kolloidal Altın merkezli İmmunokromatografik Testi Strip Gelişimi

This protocol describes the development of a colloidal gold immunochromatographic test strip based on the sandwich format that can be used to ...

Adipo-Clear: A Tissue Clearing Method for Three-Dimensional Imaging of Adipose Tissue

Adipose tissue plays a central role in energy homeostasis and thermoregulation. It is composed of different types of adipocytes, as well as adipocyte precursors, immune cells, fibroblasts, blood vessels, and nerve projections. Although the molecular control of cell type specification and how these cells interact have been increasingly delineated, a more comprehensive understanding of these adipose-resident cells can be achieved by visualizing their distribution and architecture throughout the whole tissue. Existing immunohistochemistry and immunofluorescence approaches to analyze adipose histology rely on thin paraffin-embedded sections. However, thin sections capture only a small portion of tissue; as a result, the conclusions can be biased by what portion of tissue is analyzed. We have therefore developed an adipose tissue clearing technique, Adipo-Clear, to permit comprehensive three-dimensional visualization of molecular and cellular patterns in whole adipose tissues. Adipo-Clear was adapted from iDISCO/iDISCO+, with specific modifications made to completely remove the lipid stored in the tissue while preserving native tissue morphology. In combination with light-sheet fluorescence microscopy, we demonstrate here the use of the Adipo-Clear method to obtain high-resolution volumetric images&#160;of an entire adipose tissue.

Due to the high lipid content, adipose tissue has been challenging to visualize using traditional histological methods. Adipo-Clear is a tissue clearing technique that allows robust labeling and high-resolution volumetric fluorescent imaging of adipose tissue. Here, we describe the methods for sample preparation, pretreatment, staining, clearing, and mounting for imaging.

Adipo-Clear: Bir doku Yöntem yağ dokusu üç boyutlu görüntüleme için temizlenmesi

Adipose tissue plays a central role in energy homeostasis and thermoregulation. It is composed of different types of adipocytes, as well as adipocyte ...