Bu çalışma Bill ve Melinda Gates Vakfı (SBG için Grand Challenge Keşif Ödülü), Sağlık Araştırması (NIHR), Mikrobiyal Hastalıklar Biyomedikal Araştırma Merkezi ve NIHR Kapsamlı Yerel Araştırma Ağı Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından finanse edildi. Biz altyapı desteği için NWDA kabul. Biz pnömokok izolatlarının Prof J. N Weiser, Pennsylvania Üniversitesi ve Prof P Hermans, Nijmegen Üniversitesi ederim. Fotoğraf çekmek için onların katılımı için tüm gönüllülere ve Mathieu Bangert için verdikleri destek ve tavsiye için EHPC Güvenliği Komitesi sayesinde.

1. Seçimi ve Tarama Gönüllü <ol><li> Sağlıklı gönüllüler NHS Araştırma ve Etik Komitesi yönlendirmeleri doğrultusunda, reklam afişleri aracılığıyla ve üniversite web sitesinde işe alınırlar. </li><li> Katılım için dahil edilme kriterleri şunlardır: <ol><li> 18-60 yaş arası yetişkinler. </li><li> Akıcı İngilizce konuşuyor ve mobil telefon ve kısa mesaj hem kolayca iletişim kurabilmektedir. </li></ol></li><li> Katılım için dışlama kriterleri şunlardır: <ol><li> Riskli bireyler (çocuklar, bağışıklık sistemi baskılanmış yetişkinler, yaşlılar, kronik hastalık) de yakın temas. </li><li> Halen içen veya önemli sigara öyküsü (&gt; 10 paket-yıl). </li><li> Astım ya da diğer solunum hastalığı. </li><li> Gebelik. </li><li> Penisilin veya amoksisilin alerji. </li><li> Gözlemsel sürece veya girişimsel olmayan faz bir başka klinik çalışmada Mevcut tutulumu. </li><li> Tamamen bilgilendirilmiş rıza açılamıyor. </li></ol></li><li>Bir ilk eleme ziyareti, yaklaşık bir hafta inokülasyon öncesinde, odaklanmış bir klinik öykü ve hedeflenen klinik muayene içerir. </li><li> Önceden tanınmayan bir anormallik bulunursa, gönüllü çalışmaya dahil edilecek ve uygun soruşturma birincil bakım yoluyla düzenlenecektir. </li><li> Ilk tarama sırasında beyaz küre sayısı inokülasyon ziyaretten önce normal sınırlar içinde olmasını sağlamak için alınan bir tam kan sayımı ziyaret edin. Bir nazal yıkama (6.1) doğal pnömokok taşıyıcıları dışlamak için yapılır. </li><li> Inokülasyon öncesinde, gönüllü çalışmaya katılımı ile riskleri üzerinde eğitimli ve acil hasta broşür, dijital termometre, acil telefon numaraları ve amoksisilin 3 günlük kurs ile sağlanır. </li></ol> 2. Aşılama Hisse hazırlanması <ol><li> Inokülasyon stoklarının hazırlanması temiz bir ortamda yapılmalıdır. Kullanılan pipetler sadece kullanmak gerekirinokülum hazırlanması için d. Tüm cam ve plastik eşya steril olmalıdır. Biz inokülasyon stokları adanmış fumehood ve inkübatör kullanarak, özel bir odada hazırlanmalıdır öneririz. </li><li> Pnömokok suşları bir kan agar plağına inoküle edilir. Plakalar% 5 CO2 içinde gece boyunca 37 ° C sıcaklıkta inkübe edilir. Aşağıdaki gün tüm bakterilerin kan agar plaka koparılmış ve bir boncuk stok koruma sistemi içine inoküle edilir. Bunlar boncuk stokları inokülasyon stoku hazırlanması için kullanılır. Bir aşı stoku hazırlamadan önce kontaminasyon ve koloni tekdüzelik için boncuk stokları sınayın. </li><li> Inokülasyon stok hazırlamak için tüm plaka kapsayacak şekilde çizgiler, istenen pnömokok serotipi boncuk stok iki boncuk ile bir kan agar plağına inoküle edin. 2 gece boyunca% 5 CO içinde 37 ° C &#39;de plakaları inkübe edin. Bütün ileri inkübasyonlar bu aynı koşullar kullanacaktır. Ayrıca kısırlık sağlamak için gecede Vegitone medya kuluçkaya yatmaktadır. </li><li> Ertesi sabah çubuklayarım tabak, dikkat çekici herhangi bir kan agar çıkarın ve önceden ısıtılmış Vegitone suyu 12 ml eklemek değildir. Plaka diğer yarısını kullanarak tekrarlayın. Bulanıklık değişikliği belirgin hale gelinceye kadar 2 saat veya 37 ° C&#39;de iki 12 ml şişe bırak, hangisi önce gelirse. </li><li> Önceden ısıtılmış Vegitone suyu 40 ml 12 ml ekleyin ve iyice karıştırın. Diğer 12 ml flakon için tekrarlayın. Bu sefer noktası = 0&#39;dır. 600 nm&#39;de optik yoğunluk (OD) okuma 100 ul çıkarın. Miles ve Misra (M &amp; M) 7 tarafından yöntemin bir varyasyonunu kullanıyor koloni oluşturan birim (CFU) sayısı ile bakteri ölçümü için 20 ul çıkarın. Her iki flakon inkübe edin. <ol><li> M &amp; M için altı bölüme bir kan agar bölün. 96 plaka altı kuyularının (U-alt) için steril PBS 180 ul ekleyin. Iyi iyi ve karıştırmak için suyu 20 ul ekleyin. Seri numune 01:10 altı kez sulandırmak ve altıncı kuyudan 20 ul atın. Ilk bölüme iyi yanı Sıra üç 10 ul damlakan agar plaka. Diğer beş kuyu için tekrarlayın. Terslenir ve inkübe önce plaka kuru olduğundan emin olun. </li><li> Ertesi gün her seyreltme bölüm ve kayıtlarında görülmesi kolonilerin sayısını saymak. , 30 ve 300 arasında bir sayı ile seyreltme bölümünü kullanarak bir ortalama elde etmek için üç tarafından görünür kolonilerin sayısı bölün. </li><li> Seyreltme faktörü ile kolonilerin ortalama sayısını çarpın ve sonra 10 (10 ul damla miktarı) bölün. Bu ul / CFU verir. </li><li> CFU / ml almak için 1,000 bu sayı çarpın. </li></ol></li><li> Erken, orta-log fazı, 0,25 OD ulaşılıncaya kadar M &amp; M yöntemi her saat OD 600 okumalar ve bakteri ölçümü gerçekleştirin. </li><li> Bu OD ulaşıldığında, bir şişe sterilize% 10 gliserol ekleyin ve 1 ml alikotları hazırlamak. -80 Mağaza alikotları ° C </li><li> Bir daha konsantre stok için, 15 dakika boyunca 3,345 x g de santrifüj diğer şişeye ve süpernatan çıkarın. Vegiton 22.5 ml pelet yeniden süspanse edinE orta ve% 10 gliserol ilave edin. -80 1 ml alikotları ve mağaza hazırlayın ° C. </li><li> Çözülme ve miktarının önce en az 48 saat boyunca -80 ° C&#39;de stokları bırakın. </li><li> M &amp; M yöntemi ile dondurulmuş bakteriyel stok sayısal. Tekrarlanabilirlik sağlamak için ayrı ayrı üç stok tüpleri sınayın. Aşağıda açıklandığı gibi, tuzlu su ile istenen konsantrasyona inokulum stok sulandırmak için elde edilen değerini kullanın. </li><li> , Bir aşılama için, inokulum içerisinde pnömokok miktar inokülasyondan önce ve sonra hesaplanır. M &amp; M yöntemi ile bakteri bu miktar da tüm prosedürü tamamlamak için gereken süreyi hesapları inokulum içerisinde pnömokok ortalama sayısını belirlemek için kullanılır. <ol><li> Bir inokulum hazırlanması istenilen konsantrasyona seyreltilmesi ve &quot;ön-inokülasyon&quot; saymak için M &amp; M yöntemi ile ölçümü gerçekleştirin. </li><li> Bizim Klinik Araştırma Tesisi yılında tüm aşılama prosedürünü tamamlamak için takım 30 dakika sürer. Pnsalin içinde eumococcal süspansiyonlar genellikle bu aralıkta bir azalma sayısını gösterir. Bu hesap için, 30 dakika için oda sıcaklığında seyreltilmiş inokulum bekletin ve sonra M &amp; M yöntem ile bakterilerin bir &quot;post-aşılama&quot; ölçümü gerçekleştirmek. </li><li> Nihai inoküle konsantrasyonunu belirlemek için önce ve sonra, ortalama al. Klinik protokolüne göre &quot;oturma&quot; zamanı ayarlayın ama mümkün olduğunca kısa süre tutun. </li></ol></li><li> Tüm yeni hisse senedi stoku saflık ve kimlik doğrulama için bir referans laboratuvara gönderilmesi gerekmektedir. </li></ol> 3. İnokulum Hazırlık <ol><li> Inokulum hazırlanması planlanan gönüllü inokülasyon randevu 30 dakika önce başlamalıdır. </li><li> -80 ° C dondurucu önceden yapılmış stok tüplerinden biri çıkar, çözülme ve 3 dakika boyunca 17.000 xg&#39;de mikrosantrifüj yılında tüp dönerler. </li><li> 37 ° C inkübatör Sıcak kanlı agar plaklarına. HazırlamakBir 96 M &amp; M yöntemi ile bakteri ölçümü için plaka ve istenilen doza göre seyreltme tüpleri hazırlayın. </li><li> Santrifüje tüp suyu süpernatantı ve tuzlu su, 1 ml pelet tekrar süspansiyon. Bu adım, inokulum gelen suyu kaldırır. </li><li> Santrifüj basamağı tekrarlayın. </li><li> Tuzlu süpernatantı ve tuzlu su, 1 ml pelet tekrar süspansiyon. </li><li> İstediğiniz inokulum konsantrasyonu dilüsyon set yapın ve M &amp; M yöntemi ile ölçmek. </li><li> Gönüllü randevuya inokulum atın ve gönüllüler inokülasyon sonrasında, laboratuarda ölçümü tekrarlayın. -80 Tarih ve inokulum dozu ve mağaza ile tüp etiketleyin ° C. </li><li> Inokülasyon gelen inokülasyon tutarlılık sağlamak için, aynı pipetler ve özel laboratuvar ekipmanı her zaman kullanmak önemlidir. </li></ol> 4. Aşılama <ol><li> Gönüllüler bir yarı yatar pozisyonda rahatça oturmuş olmalıdır. </li><li&gt; Bir P200 pipet kullanarak ve steril filtre ipuçları inokulum 100 ul hazırlar ve sadece burun boşluğunun içine ucu takın. </li><li> Yavaşça dairesel hareketlerle kullanarak nazal mukoza üzerine inokulum sınırdışı. </li><li> Bu pipet ucu kan dolaşımına giren bakteriler neden olabilir epitelinin bütünlüğünün bozulması gibi burun mukozası ile temas olmadığı önemlidir. </li><li> Bu inokülum çok geriye yerleştirilmiş olması veya boğazına çalışacağını da çok önemlidir, bu nazal kavite içinde bulunması gerekir. </li><li> Diğer Naris için tekrarlayın. </li><li> Gönüllü burun koklama veya üfleme olmadan 10 dakika yarı yatar pozisyonda kalır mı. Bu bakteriler için zaman mukozaya boyunca dağıtmak için izin verir. </li></ol> 5. İzleme <ol><li> Gönüllüler aşılanmasını takiben günlük olarak takip edilmektedir. Bu 2 pm önce araştırmacılara gönüllü tarafından gönderilen günlük bir metin mesajı içerir. </li><li> Eğer metin is gönüllü onun / onu refahı sağlamak için sizinle temasa geçecektir öğleden sonra saat 2&#39;de alınmadı. O / o yanıt vermezse, akrabası tahsis yanındaki gönüllünün refahını sağlamak için sizinle temasa geçecektir. </li><li> Gönüllüler her randevu herhangi bir üst solunum yolu semptomları rapor istenir. Klinik personeli onun / onu belirtileri tanımlamak için gönüllü soracaktır ve herhangi bir şikayetleri takip edecektir. </li><li> Gönüllüler için antibiyotikler üç koşullar altına alınması için sadece vardır; onlar hasta ve bunların çalışma sonunda pnömokok taşıma, ya da hasta eğer varsa, araştırma ekibi tarafından bunu yapması için talimat olması durumunda, ve araştırma ekibi iletişim kuramadı. Gönüllü çalışma sırasında her zaman onlarla bu acil paketi tutmak için teşvik edilir ve sonraki 7 gün için günlük bazda araştırma ekibi ile irtibata geçmeleri rica edilir. </li><li> Ekibimiz ho üzerinden mesai saatlerinde hemşire kişiyle 7/24 mevcuttur ve iki doktor mevcuttururs. Tüm sorgular telefon ve / veya derhal gözden tarafından ele alınmaktadır. Gerekirse Karşılıklar, bir Enfeksiyon Hastalıkları servisinde anında, doğrudan kabul için kullanılabilir. </li></ol> 6. Burun yıkama (KB) Prosedür <ol><li> Burun yıkamaları (NW), bir başlangıç ​​tarama ziyaret yanı sıra, 48 saat, 7 ve 14 gün aşılama sonrası gerçekleştirilir. Ikinci KB yöntem Naclerio et al alınmıştır. 8 Gönüllüler doğal olarak S. tarafından kolonize pneumoniae aşılama dışında ve takip edilmektedir. </li><li> Gönüllü rahatça oturduğundan ve kafası dikey geri 30 ° eğilir. </li><li> Derin bir nefes alın ve ağız çatı karşı geriye kendi dil yukarı itip ederken nefeslerini tutmak için gönüllü değildir. Bu pozisyonda iken, gönüllü onlar hazır olduğunu işaret etmesi istenir. </li><li> 20 ml tuzlu su ile doldurulmuş bir şırınga ön burun boşluğuna yerleştirilir ve tuzlu 5 ml dışarı atılır. Volunteer sonra hemen öne doğru eğilir ve bir folyo kaseye burundan hızla exhaling tarafından sıvı dışarı atar. </li><li> Bu işlem her Naris iki kez yıkanmış ve tam 20 ml kullanılır olmuştur böylece 3 kez daha tekrarlayın. </li><li> Bir santrifüj tüpü içinde bir arada Havuz tüm örnekler ve işleme için oda sıcaklığında laboratuvar için gönderir. </li></ol> 7. Burun yıkama İşleme <ol><li> 3,345 x g&#39;de 10 dakika boyunca santrifüjleyin. </li><li> -80 Etiketli Eppendorf tüplerine 1 ml alikotları gibi süpernatant ve mağaza kaldırın ° C </li><li> Pelet orta 9 STGG 100 ul ekleyin ve iyice karıştırın. Bu noktada tüp içinde toplam hacmi belirlendi olduğundan emin olun. Bu seyreltme, bir taşıma pozitif NW CFU hesaplanmasında kullanılır. </li><li> Plaka gentamisin ve çizgi tüm plaka içeren bir kan agar plaka üzerine yeniden süspanse pelet içeren STGG bir 20 ul damla. <ol><li> NW aşılama sonrası ise, Yeniden süspanse pelet ve M &amp; M yöntemi ile bakteri ölçümü için kullanılmasını içeren STGG 10 ul çıkarın. </li></ol></li><li> NW tüp STGG başka 800 ul ekleyin ve iyice karıştırın. </li><li> Tüm plağı çizgiler bir kan agar ve çikolata agar plaka üzerine 25 ul üzerine Tabak 25 ul,. </li><li> -80 2 kriyotüplerin ve mağaza içine orta STGG asılı kalan miktar bakteri Böl ° C. </li><li> % 5 CO2 içinde 37 ° C de bir gece de plakaları inkübe edin. </li><li> Plakaları pnömokok ve diğer potansiyel solunum patojenleri için ertesi gün inceleyin. </li><li> Pnömokok koloni morfolojisi ile plakalar üzerinde tanımlanır. Ressam morfolojiye sahip Alfa hemolitik koloniler bir optokine diski ile kan agara alt-kültür ve gece inkübe. </li><li> Optokine duyarlı Presumptive pnömokok koloniler Gram Gram pozitif diplokoklar onaylamak için lekeli ve Statens Serum Institut Pneu kullanarak serotiplendirilmiştir edilirmotest-Lateks kiti. </li></ol>

<ol>
	<li>Ferreira, D. M., Jambo, K. C., Gordon, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+human+pneumococcal+carriage+models+for+vaccine+research.">Experimental human pneumococcal carriage models for vaccine research.</a> Trends in Microbiology. 19, 464-470 (2011).</li><li>Mera, R., Miller, L. A., Fritsche, T. R., Jones, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotype+replacement+and+multiple+resistance+in+Streptococcus+pneumoniae+after+the+introduction+of+the+conjugate+pneumococcal+vaccine.">Serotype replacement and multiple resistance in Streptococcus pneumoniae after the introduction of the conjugate pneumococcal vaccine.</a> Microbial Drug Resistance. 14, 101-107 (2008).</li><li>Tocheva, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Declining+serotype+coverage+of+new+pneumococcal+conjugate+vaccines+relating+to+the+carriage+of+Streptococcus+pneumoniae+in+young+children.">Declining serotype coverage of new pneumococcal conjugate vaccines relating to the carriage of Streptococcus pneumoniae in young children.</a> Vaccine. 29, 4400-4404 (2011).</li><li>Weinberger, D. M., Malley, R., Lipsitch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotype+replacement+in+disease+after+pneumococcal+vaccination.">Serotype replacement in disease after pneumococcal vaccination.</a> Lancet. 378 (10), 1962-1973 (2011).</li><li>Wu, H. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+a+Streptococcus+pneumoniae+nasopharyngeal+colonization+model+in+adult+mice.">Establishment of a Streptococcus pneumoniae nasopharyngeal colonization model in adult mice.</a> Microb. Pathog. 23, 127-137 (1997).</li><li>Wright, A. K. A., Ferreira, D. M., Gritzfeld, J. F., Wright, A. D., Armitage, K., Jambo, K. C., Bate, E., Batrawy, S. E. l., Collins, A., Gordon, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Nasal+Challenge+with+Streptococcus+pneumoniae+is+Immunising+in+the+Absence+of+Carriage.">Human Nasal Challenge with Streptococcus pneumoniae is Immunising in the Absence of Carriage.</a> PloS Pathogens. 8 (4), e1002622 (2012).</li><li>Miles, A. A., Misra, S. S., Irwin, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+estimation+of+the+bactericidal+power+of+the+blood.">The estimation of the bactericidal power of the blood.</a> The Journal of Hygiene. 38, 732-749 (1938).</li><li>Naclerio, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mediator+release+after+nasal+airway+challenge+with+allergen.">Mediator release after nasal airway challenge with allergen.</a> Am. Rev. Respir. Dis. 128, 597-602 (1983).</li><li>O'Brien, K. L., Nohynek, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Report+from+a+WHO+working+group:+standard+method+for+detecting+upper+respiratory+carriage+of+Streptococcus+pneumoniae.">Report from a WHO working group: standard method for detecting upper respiratory carriage of Streptococcus pneumoniae.</a> Pediatr. Infect. Dis J. 22, 133-140 (2003).</li><li>Gritzfeld, J. F., Roberts, P., Roche, L., Batrawy, S. E. l., Gordon, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+between+nasopharyngeal+swab+and+nasal+wash,+using+culture+and+PCR,+in+the+detection+of+potential+respiratory+pathogens.">Comparison between nasopharyngeal swab and nasal wash, using culture and PCR, in the detection of potential respiratory pathogens.</a> BMC Research Notes. 4, 122 (2011).</li><li>McCool, T. L., Cate, T. R., Moy, G., Weiser, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immune+response+to+pneumococcal+proteins+during+experimental+human+carriage.">The immune response to pneumococcal proteins during experimental human carriage.</a> J. Exp. Med. 195, 359-365 (2002).</li></ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

EHPC platformu mukozal aşı model olarak ve yeni protein aşıları test etmek için bir koruma vekil olarak kullanımı da dahil olmak üzere potansiyel kullanım bir numarası vardır. Yöntem, bir sürekli aşılama tekniği ve bir yüksek kaliteli B bağlıdır. Tekrarlanabilirlik inokulum ile ilgili bir sorun olabilir. Donmuş bakteri alikotları değişken doğası nedeniyle, istenen doz çoğaltmak için zor olabilir. İstenen doz bir yarıya indirmek ya da iki katına çıkarılması aralık içinde yer alır. Bu bakteri miktarının doğru CFU bakterilerin miktarının belirlenmesi amacıyla, aşılama hemen öncesinde ve aşağıdaki işlemlerin yapılması çok önemlidir. Gönüllü randevuları oluşursa bu nedenle sadece bir inokulum hazırlanan ve önceki aşılama ve sonrasında yapılan miktar kaplama dışında en fazla 30 dk olur edilmesi ihtiyacı olduğunu aynı anda çok yararlı olabilir. NW yöntem coope gerektirirgönüllü ve rasyon çocuklarda ideal bir yöntem olmaz. Verim az 5 ml ise, işlem bir fazladan 20 ml kadar kullanarak tekrar edilebilir. Giyim protez KB verimini düşürebilir. Gönüllünün / bloke sıkışık burun vardır ve tuzlu takıldıktan sonra anteriorda üzerinden çalışıyorsa, burnunu, Biraz daha geriye şırınga takın ve daha geri gerekirse başını hafifçe. KB uygulama ile daha iyi olur bir tekniktir. Amacı, en azından 10 ml &#39;lik bir dönüş amaçlı olup bu nedenle bazı hacmi genellikle kaybolur. Gönüllü KB sırasında salin tadabilirsiniz Eğer posterior nazofarenks ve orofarenks arasındaki bağlantı yeterince gönüllü dilini tarafından kapatıldı olmamıştır. Gönüllü yutar salin çoğu ise, ağız çatısı karşı dil itme vurgulayarak, prosedüre tekrar açıklayabilir. Sonra ses döndü artırmak için işlemi tekrarlayın. NW substant içeriyorsamukus ial miktarı, bu santrifüj önce kaldırmak en iyisidir. Vorteks mukus bağlı ve mümkün olduğu kadar az tuzlu olarak çıkarılırken, daha sonra mümkün olduğu kadar büyük parçaları ortadan kaldırmak herhangi bir şey olabilir gevşetmek şekilde örnek. ABD&#39;de bir önceki EHPC çalışmada güvenle tamamlanmış ve hiçbir advers olaylar 11 vardı. EHPC platformunun sürekli güvenliğini sağlamak için, araştırma ekibi, 24 saat erişim etrafında dayanır acil durum protokolü kurdunuz. Gönüllüler onları bir gün araştırma ekibi, 24 saat erişim sağlayan iletişim bilgilerini verilmiştir. Gerekli her türlü tıbbi bakım Royal Liverpool Üniversite Hastanesi sağlanmaktadır. Koruma bir başka önlem olarak, klinisyenler ve araştırma grubu dışından bilim adamlarından oluşan bir güvenlik komitesi haftalık güvenlik raporu alır. Rapor, her gönüllü alınan ve herhangi bir semptom ya da hastalık rapor edilip bakteriyel doz içerir. Bu rapor th güvenliği sağlarE çalışmada dışarıdan önyargısız eleştirilmesi gereken. Güvenlik komitesi ayrıca acil olası olay bir gün 24 saat mevcuttur.

<table border="1"><tbody><tr><td> Isim </td><td> Şirket </td><td> Cat # </td></tr><tr><td> Gliserin </td><td> Balıkçı </td><td> G/0650/08 </td></tr><tr><td> % 0,9 Sodyum Klorür </td><td> B. Braun </td><td> 3627667 </td></tr><tr><td> Yağsız süt tozuna </td><td> Fluka </td><td> 70166 </td></tr><tr><td> Tripton soya broth </td><td> Becton Dickinson </td><td> 211768 </td></tr><tr><td> Glikoz </td><td> BDH </td><td> 284504S </td></tr><tr><td> Chocolated at kanı ile Columbia Agar </td><td> Oxoid </td><td> PB0124 </td></tr><tr><td> Pneumotest-lateks kiti </td><td> Statens Serum Institut </td><td> 51823 </td></tr></tbody></table>

experimental human pneumococcal carriage

Streptococcus pneumoniae nazofarengeal taşıma iletim ana kaynağı ve invaziv hastalık önkoşulu çünkü her iki Deneysel insan pnömokok taşıyıcısı (EHPC) bilimsel önemlidir. Taşıyıcı bir model, koruma bağışıklık karşılıkları doğru tespiti, taşıma immünizasyonu etkisi ve nazofaringeal niş patojen üzerinde ana basınç etkisine izin verir. Dahası, aşı çalışmaları dahil olmak üzere epidemiyolojik çalışmalarda, kullanışlı taşıma algılama yöntemleri, mukayese edilebilir. Amaç Biz aşı kaynaklı bağışıklığın bir vekil olarak taşıma önlenmesi ile aşağı-select aday romanı pnömokok aşıları için kullanılan olabilir yararlı ve güvenli bir tekrarlanabilir bir yöntemdir bir EHPC platformu geliştirmeyi hedefliyoruz. Bu EHPC ve taşıyıcısının gelen aşı koruması altında yatan mekanizmaların aday aşıların ve açıklamaları test yolunda çalışacakge 1. Yeni aşılar geçerli aşı olmayan bakteriyemik pnömoniye karşı optimum koruma taninmasi anlamina gelmez acil olarak ihtiyaç vardır ve non-aşı serotipleri 2-4 serotip değiştirme kanıt olmasına rağmen pnömokok karşı Cari konjuge aşılar invaziv hastalık çocukları korumak. Yöntem Biz S. ile inoküle pneumoniae tuzlu 100 ul içinde askıya alınır. Güvenlik EHPC modelinin gelişmesinde önemli bir faktör olduğunu ve yoğun gönüllü tarama ve izleme yoluyla elde edilir. Klinisyen ve çalışma bağımsız bilim adamlarından oluşan bir güvenlik komitesi haftalık bazda objektif geribildirim sağlar. Bakteriyel inokulum standardize edilmiştir ve hiçbir hayvansal ürünlerin gönüllü (bitkisel bazlı medya ve salin) inoküle gerektirir. Kolonizasyonu (10 4 -10 5) için gerekli olan doz çok daha düşük olan than bu (10 7) hayvan modellerinde 5 kullanılır. Pnömokok Taşıyıcı algılama ücretsiz nispeten mukus burun yıkama (ideal&gt; 10 ml) yüksek hacimli tarafından geliştirilmiştir. Bu protokol sırayla protokolünün en önemli parçaları ile ilgileneceğiz. Bunlar (a) gönüllü seçim, (b) pnömokok inokulum hazırlanması, (c) aşılama, (d) takip edilmesi ve (e) taşıyıcı algılama vardır. Sonuçlar Mevcut protokol iki farklı bakteri serotipleri 6 kullanarak doz aralığında 100&#39;ün üzerinde gönüllü güvenli olmuştur. S. kullanarak bir doz aralığında çalışması pneumoniae 6B ve 23F anda% 50 taşıma için en uygun aşı dozu belirlemek için yapılmaktadır. Taşıyıcı bir tahmin% 50 oranında EHPC modelinde küçük çalışma numaraları ile aşı etkinliği için yüksek duyarlılığa sahip sağlayacaktır.

Biz deneyim, 35 pnömokok yapmışlardır olan 159 kişi inokülasyon var. Bu serotip 6B ile birlikte taşıma elde en düşük doz en yüksek doz Naris başına 313,000 CFU/100 ul idi Naris başına 11,100 CFU/100 il idi. Bu serotip 23F kullanılarak taşıma elde en düşük doz en yüksek doz Naris başına 84,500 CFU/100 ul idi Naris başına 9.000 CFU/100 il idi. Taşıyıcı değerlendirme Bizim yöntemi yeni bir çalışma 10 gönüllülerin% 91 nazofarengeal sürüntü daha rahat olmak için nazal yıkama bulduğunu gösterdi çünkü seçilen bir nazal yıkama, olduğunu; burun yıkama, ayrıca mikrobiyolojik kültür kullanarak patojenler tespit etmek daha olasıdır. KB ile inoküle kan agar plaklarına kurtarıldı mikrobiyal flora okumak için değişken ve zor olabilir. Gentamisin pnömokok için seçmek için ilk kan agar kullanılır. Çukulata agar plaka ve ikinci kan agar diğer potansiyel solunum yolu tespit etmek için kullanılırpnömokok kolonizasyonu yardımcı ya da engel olabilir ogens. Okunması kolay KB ile aşılanmış bir kan agar plaka bir örneği Şekil 1a&#39;da gösterilen flora birçok türü ihtiva eden bir zor plaka Şekil 1b &#39;de gösterilmiştir. Her randevu gönüllüler anda herhangi bir üst solunum yolu semptomları tanımlamak için istendi, eğer varsa, taşıyıcı ve taşıyıcı olmayan arasındaki karşılaştırmalar çizildi. Son zamanlarda pnömokok ile inoküle 145 kişiden, 28 semptomları (Tablo 1) şikayet etti. Bunların sekizi taşıyıcıları, yirmi değil idi. En sık görülen semptomlar non-spesifik nazal semptomlar (Tablo 1). Ateş ve / veya halsizlik gibi sistemik belirtiler vardır bildirildi hangi olgunun, yapılan araştırmaların hiçbiri pnömokok hastalığı ve belirtileri kanıt tonsillit bir olgu dışında eşzamanlı viral enfeksiyon ile uyumlu olduğunu göstermiştir. Iki pnömokok positivE gönüllüler antibiyotik ile tedavi edildi. Bir boğaz ağrısı ve kulak ağrısı şikayet ve çalışma doktor ile tanıştıktan sonra, bir önlem olarak antibiyotik almaları tavsiye edildi. Diğer gönüllü tonsillit ile klinik tanısı kondu. Tüm gönüllüler semptomları hızla düzelmişti. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/50115/50115fig1.jpg" /> Şekil 1. Kan agar KB ile aşılanmış. KB ile inoküle Kan agar plaklarına okunması zor olabilir. 1a açıkça görülebilir pnömokok ile okunması kolay bir tabak bir örnektir. 1b daha yapım co-kolonize flora dolu bir tabak pnömokoklar mevcut olup olmadığını tespit etmek zordur. <table border="1"><tbody><tr><td> Belirtileri </td><td></td><td> Taşıma (n = 32) </td><td> Hayır Taşıma (n = 112) </td></tr><tr><td> Tümsemptomlar </td><td></td><td> 24% </td><td> % 18 </td></tr><tr><td> Sistemik </td><td> Ateş </td><td> % 3 </td><td> 4% </td></tr><tr><td></td><td> Kırıklık * </td><td> % 9 </td><td> 4% </td></tr><tr><td> Yerel </td><td> Kulaklar </td><td> % 9 </td><td> % 3 </td></tr><tr><td></td><td> Burun </td><td> 0 </td><td> % 10 </td></tr><tr><td></td><td> Boğaz </td><td> % 12 </td><td> % 3 </td></tr></tbody></table> Tablo 1. Gönüllü Karakterizasyonu S. Aşağıdaki belirtiler bildirilmiştir pneumoniae 6B inokülasyon. tüm şikayetler tam incelemelerden sonra, dış güvenlik komitesi tarafından gözden edildi ve hiçbir belirti pnömokok hastalığı atfedilmiştir. En sık görülen semptomlar, boğaz ağrısı vardı burun ve grip benzeri hastalık dolması.

Watch this Scientific Journal Video about Experimental Human Pneumococcal Carriage at JoVE.com

Experimental Human Pneumococcal Carriage

Deneysel insan pnömokok taşıma taşıma doğal bir modeli ve aşı geliştirme kullanım için potansiyel model sunmaktadır. Bu teknik çok değerli ama karmaşık ve bir insan bir patojen getirerek klinik risklidir. Biz ayrıntılı bir protokol geliştirmiştir.

Deneysel İnsan Pnömokok Taşıma

Experimental human pneumococcal carriage (EHPC) is scientifically important because nasopharyngeal carriage of Streptococcus pneumoniae is both the major ...

Research

JoVE Journal

Medicine

15.4K Görüntüleme.  Liverpool School of Tropical Medicine. Deneysel insan pnömokok taşıma taşıma doğal bir modeli ve aşı geliştirme kullanım için potansiyel model sunmaktadır. Bu teknik çok değerli ama karmaşık ve bir insan bir patojen getirerek klinik risklidir. Biz ayrıntılı bir protokol geliştirmiştir.

Video: Experimental Human Pneumococcal Carriage

Experimental Metastasis Assay

Metastasis is the leading cause of death in cancer patients. To understand the mechanism of metastasis, an experimental metastasis assay was established using immunodeficient mice. This article delineates the procedures involved in this assay, including sample preparation, intravenous injection, and culturing cells from lung metastases. Briefly, a pre-determined number of human cancer cells were prepared in vitro and directly injected into the circulation of immunodeficient mice through their tail veins. A small number of cells survive the turbulence in the circulation and grow as metastases in internal organs, such as lung. The injected mice are dissected after a certain period. The tissue distribution of metastases is determined under a dissecting microscope. The number of metastases in a specific tissue is counted and it directly correlates with the metastatic ability of the injected cancer cells. The arisen metastases are isolated and cultured in vitro as cell lines, which often show enhanced metastatic abilities than the parental line when injected again into immunodeficient mice. These highly metastatic derivatives become useful tools for identifying genes or molecular pathways that regulate metastatic progression.

This article describes the procedures of an experimental metastasis assay that is used to determine the metastatic potential of human cancer cell lines.

Deneysel metastaz Testi

Metastasis is the leading cause of death in cancer patients.  To understand the mechanism of metastasis, an experimental metastasis assay was established ...

Tıp

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts (CAFs) from Human Mammary Fibroblasts

Carcinomas are complex tissues comprised of neoplastic cells and a non-cancerous compartment referred to as the 'stroma'. The stroma consists of extracellular matrix (ECM) and a variety of mesenchymal cells, including fibroblasts, myofibroblasts, endothelial cells, pericytes and leukocytes 1-3.
The tumour-associated stroma is responsive to substantial paracrine signals released by neighbouring carcinoma cells. During the disease process, the stroma often becomes populated by carcinoma-associated fibroblasts (CAFs) including large numbers of myofibroblasts. These cells have previously been extracted from many different types of human carcinomas for their in vitro culture. A subpopulation of CAFs is distinguishable through their up-regulation of &alpha;-smooth muscle actin (&alpha;-SMA) expression4,5. These cells are a hallmark of 'activated fibroblasts' that share similar properties with myofibroblasts commonly observed in injured and fibrotic tissues 6. The presence of this myofibroblastic CAF subset is highly related to high-grade malignancies and associated with poor prognoses in patients.
Many laboratories, including our own, have shown that CAFs, when injected with carcinoma cells into immunodeficient mice, are capable of substantially promoting tumourigenesis 7-10. CAFs prepared from carcinoma patients, however, frequently undergo senescence during propagation in culture limiting the extensiveness of their use throughout ongoing experimentation. To overcome this difficulty, we developed a novel technique to experimentally generate immortalised human mammary CAF cell lines (exp-CAFs) from human mammary fibroblasts, using a coimplantation breast tumour xenograft model.
In order to generate exp-CAFs, parental human mammary fibroblasts, obtained from the reduction mammoplasty tissue, were first immortalised with hTERT, the catalytic subunit of the telomerase holoenzyme, and engineered to express GFP and a puromycin resistance gene. These cells were coimplanted with MCF-7 human breast carcinoma cells expressing an activated ras oncogene (MCF-7-ras cells) into a mouse xenograft. After a period of incubation in vivo, the initially injected human mammary fibroblasts were extracted from the tumour xenografts on the basis of their puromycin resistance 11.
We observed that the resident human mammary fibroblasts have differentiated, adopting a myofibroblastic phenotype and acquired tumour-promoting properties during the course of tumour progression. Importantly, these cells, defined as exp-CAFs, closely mimic the tumour-promoting myofibroblastic phenotype of CAFs isolated from breast carcinomas dissected from patients. Our tumour xenograft-derived exp-CAFs therefore provide an effective model to study the biology of CAFs in human breast carcinomas. The described protocol may also be extended for generating and characterising various CAF populations derived from other types of human carcinomas.

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts CAFs from Human Mammary Fibroblasts

Carcinoma-associated fibroblasts (CAFs) rich in myofibroblasts present within the tumour stroma, play a major role in driving tumour progression. We developed a coimplantation tumour xengraft model for experimentally generating CAFs from human mammary fibroblasts. The protocol describes how to establish CAF myofibroblasts that acquire an ability to promote tumourigenesis.

İnsan Meme Fibroblastlar Karsinom İlişkili Fibroblastlar Deneysel Nesil (CAFs)

Carcinomas are complex tissues comprised of neoplastic cells and a non-cancerous compartment referred to as the 'stroma'. The stroma consists of ...

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Stem cell transplantation protocols are finding their way into clinical practice1,2,3. Getting better results, making the protocols more robust, and finding new sources for implantable cells are the focus of recent research4,5. Investigating the effectiveness of cell therapies is not an easy task and new tools are needed to investigate the mechanisms involved in the treatment process6. We designed an experimental protocol of ischemia/reperfusion in order to allow the observation of cellular connections and even subcellular mechanisms during ischemia/reperfusion injury and after stem cell transplantation and to evaluate the efficacy of cell therapy. H9c2 cardiomyoblast cells were placed onto cell culture plates7,8. Ischemia was simulated with 150 minutes in a glucose free medium with oxygen level below 0.5%. Then, normal media and oxygen levels were reintroduced to simulate reperfusion. After oxygen glucose deprivation, the damaged cells were treated with transplantation of labeled human bone marrow derived mesenchymal stem cells by adding them to the culture. Mesenchymal stem cells are preferred in clinical trials because they are easily accessible with minimal invasive surgery, easily expandable and autologous. After 24 hours of co-cultivation, cells were stained with calcein and ethidium-homodimer to differentiate between live and dead cells. This setup allowed us to investigate the intercellular connections using confocal fluorescent microscopy and to quantify the survival rate of postischemic cells by flow cytometry. Confocal microscopy showed the interactions of the two cell populations such as cell fusion and formation of intercellular nanotubes. Flow cytometry analysis revealed 3 clusters of damaged cells which can be plotted on a graph and analyzed statistically. These populations can be investigated separately and conclusions can be drawn on these data on the effectiveness of the simulated therapeutical approach.

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

We demonstrate how to set up an in vitro ischemia/reperfusion model and how to evaluate the effect of stem cell therapy on postischemic cardiac cells.

Bir Kök Hücre Nakli In vitro Simüle İskemi / Reperfüzyon Modeli

Stem cell transplantation protocols are finding their way into clinical practice1,2,3. Getting better results, making the protocols more robust, and ...

Isolation and Functional Characterization of Human Ventricular Cardiomyocytes from Fresh Surgical Samples

Cardiomyocytes from diseased hearts are subjected to complex remodeling processes involving changes in cell structure, excitation contraction coupling and membrane ion currents. Those changes are likely&#160;to be responsible for the increased arrhythmogenic risk and the contractile alterations leading to systolic and diastolic dysfunction in cardiac patients. However, most information on the alterations of myocyte function in cardiac diseases has come from animal models.
Here we describe and validate a protocol to isolate viable myocytes from small surgical samples of ventricular myocardium from patients undergoing cardiac surgery operations. The protocol is described in detail. Electrophysiological and intracellular calcium measurements are reported to demonstrate the feasibility of a number of single cell measurements in human ventricular cardiomyocytes obtained with this method.
The protocol reported here can be useful for future investigations of the cellular and molecular basis of functional alterations of the human heart in the presence of different cardiac diseases. Further, this method can be used to identify novel therapeutic targets at cellular level and to test the effectiveness of new compounds on human cardiomyocytes, with direct translational value.

Current knowledge on the cellular basis of cardiac diseases mostly relies on studies on animal models. Here we describe and validate a novel method to obtain single viable cardiomyocytes from small surgical samples of human ventricular myocardium. Human ventricular myocytes can be used for electrophysiological studies and drug testing.

Taze Cerrahi Örneklerden İzolasyon ve İnsan Ventriküler kardiyomiyositlerin Fonksiyonel Karakterizasyonu

Cardiomyocytes from diseased hearts are subjected to complex remodeling processes involving changes in cell structure, excitation contraction coupling and ...

Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

The mainstay of contemporary therapies for extensive occlusive arterial disease is venous bypass graft. However, its durability is threatened by intimal hyperplasia (IH) that eventually leads to vessel occlusion and graft failure. Mechanical forces, particularly low shear stress and high wall tension, are thought to initiate and to sustain these cellular and molecular changes, but their exact contribution remains to be unraveled. To selectively evaluate the role of pressure and shear stress on the biology of IH, an ex&#160;vivo perfusion system (EVPS) was created to perfuse segments of human saphenous veins under arterial regimen (high shear stress and high pressure). Further technical innovations allowed the simultaneous perfusion of two segments from the same vein, one reinforced with an external mesh. Veins were harvested using a no-touch technique and immediately transferred to the laboratory for assembly in the EVPS. One segment of the freshly isolated vein was not perfused (control, day 0). The two others segments were perfused for up to 7 days, one being completely sheltered with a 4 mm (diameter) external mesh. The pressure, flow velocity, and pulse rate were continuously monitored and adjusted to mimic the hemodynamic conditions prevailing in the femoral artery. Upon completion of the perfusion, veins were dismounted and used for histological and molecular analysis. Under ex&#160;vivo conditions, high pressure perfusion (arterial, mean = 100 mm Hg) is sufficient to generate IH and remodeling of human veins. These alterations are reduced in the presence of an external polyester mesh.

Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

The mechanisms leading to the development of intimal hyperplasia (IH) and vein graft failure are still poorly understood. This study describes an ex&#160;vivo system to perfuse human veins under controlled flow and pressure. Furthermore the efficiency of external mesh reinforcement to limit the development of IH was evaluated.

İnsan Safen Ven Prosedürü<em&gt; Ex vivo</em&gt; Perfüzyon ve Dış Takviye

The mainstay of contemporary therapies for extensive occlusive arterial disease is venous bypass graft. However, its durability is threatened by intimal ...

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial cells tend to lose hormone receptor expression. Widely used hormone receptor positive breast cancer cell lines are of limited relevance to the in vivo situation. Here, we describe an ex vivo model to study hormone action in the human breast. Fresh human breast tissue specimens from surgical discard material such as reduction mammoplasties or mammectomies are mechanically and enzymatically digested to obtain tissue fragments containing ducts and lobules and multiple stromal cell types. These tissue microstructures kept in basal medium without growth factors preserve their intercellular contacts, the tissue architecture, and remain hormone responsive for several days. They are readily processed for RNA and protein extraction, histological analysis or stored in freezing medium. Fluorescence activated cell sorting (FACS) can be used to enrich for specific cell populations. This protocol provides a straightforward, standard approach for translational studies with highly complex, varied human specimens.

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

We have developed a novel ex vivo model to study hormone action in the human breast. It is based on tissue microstructures isolated from surgical breast tissue specimens which preserve tissue architecture, intercellular interactions, and paracrine signaling.

Bir<em&gt; Ex vivo</em&gt; Model İnsan Meme Hormon Eylem Eğitim için

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...

Tissue Characterization after a New Disaggregation Method for Skin Micro-Grafts Generation

Several new methods have been developed in the field of biotechnology to obtain autologous cellular suspensions during surgery, in order to provide one step treatments for acute and chronic skin lesions. Moreover, the management of chronic but also acute wounds resulting from trauma, diabetes, infections and other causes, remains challenging. In this study we describe a new method to create autologous micro-grafts from cutaneous tissue of a single patient and their clinical application. Moreover, in vitro biological characterization of cutaneous tissue derived from skin, de-epidermized dermis (Ded) and dermis of multi-organ and/or multi-tissue donors was also performed. All tissues were disaggregated by this new protocol, allowing us to obtain viable micro-grafts. In particular, we reported that this innovative protocol is able to create bio-complexes composed by autologous micro-grafts and collagen sponges ready to be applied on skin lesions. The clinical application of autologous bio-complexes on a leg lesion was also reported, showing an improvement of both re-epitalization process and softness of the lesion. Additionally, our in vitro model showed that cell viability after mechanical disaggregation with this system is maintained over time for up to seven (7) days of culture. We also observed, by flow cytometry analysis, that the pool of cells obtained from disaggregation is composed of several cell types, including mesenchymal stem cells, that exert a key role in the processes of tissue regeneration and repair, for their high regenerative potential. Finally, we demonstrated in vitro that this procedure maintains the sterility of micro-grafts when cultured in Agar dishes. In summary, we conclude that this new regenerative approach can be a promising tool for clinicians to obtain in one step viable, sterile and ready to use micro-grafts that can be applied alone or in combination with most common biological scaffolds.

The protocol describes a new method to disaggregate human tissues and to create autologous micro-grafts that, combined with collagen sponges, give rise to human bio-complexes ready to use in the treatment of skin lesions. Further, this system preserves cell viability of micro-grafts at different times after mechanical disaggregation.

Cilt Mikro-Greftler Üretimi için Yeni Bir Ayrıştırma Yöntemi sonra doku karakterizasyonu

Several new methods have been developed in the field of biotechnology to obtain autologous cellular suspensions during surgery, in order to provide one ...

Three-dimensional Alginate-bead Culture of Human Pituitary Adenoma Cells

A three-dimensional culture method is described in which primary pituitary adenoma cells are grown in alginate beads. Alginate is a polymer derived from brown sea algae. Briefly, the tumor tissue is cut into small pieces and submitted to an enzymatic digestion with collagenase and trypsin. Next, a cell suspension is obtained. The tumor cell suspension is mixed with 1.2% sodium alginate and dropped into a CaCl2 solution, and the alginate/cell suspension is gelled on contact with the CaCl2 to form spherical beads. The cells embedded in the alginate beads are supplied with nutrients provided by the culture media enriched with 20% FBS. Three-dimensional culture in alginate beads maintains the viability of adenoma cells for long periods of time, up to four months. Moreover, the cells can be liberated from the alginate by washing the beads with sodium citrate and seeded on glass coverslips for further immunocytochemical analyses. The use of a cell culture model allows for the fixation and visualization of the actin cytoskeleton with minimal disorganization. In summary, alginate beads provide a reliable culture system for the maintenance of pituitary adenoma cells.

Three-dimensional culture in alginate beads, due to its simplicity and reproducibility, was chosen to maintain the pituitary adenoma cells. The procedures included an initial enzymatic digestion and mechanical dissociation of the tumor tissue, and the subsequent cell suspension was encapsulated in alginate beads.

İnsan Hipofiz Adenom Hücreleri üç boyutlu Aljinat-boncuk Kültür

A three-dimensional culture method is described in which primary pituitary adenoma cells are grown in alginate beads. Alginate is a polymer derived from ...

Ultrasonography in Experimental Reproductive Investigations on Rats

With the development of assisted reproductive technology and the ethical limitations of research on humans, rat animal models have been widely used in reproductive medicine. In the past, the study of reproductive system development in rodents has been based on one-time histological examination of excised tissues. Recently, with the development of high-resolution transabdominal ultrasound, high-quality sonography can now be performed to evaluate the reproductive organs of rats, allowing a new method for studying the reproductive system. Images were obtained using a high-resolution ultrasonographic system. Gynecological ultrasonography was performed on 28 eight-week-old non-pregnant rats and 5 pregnant Sprague-Dawley rats. We describe how to recognize organs of the reproductive system and associated structures in typical views during different phases of the estrus cycle. Color flow Doppler was used to measure uterine artery blood flow and evaluate uterine blood flow pattern changes during different stages of pregnancy. We have demonstrated that ultrasound exploration is a useful method for evaluating changes in internal reproductive organs. Its use raises the possibility of conducting additional experiments, including medical or surgical procedures, and provides the ability to monitor sonographic changes to internal organs without sacrificing animals.

This manuscript describes the utility of ultrasound performed on female rats to design experimental models for reproductive and gynecological investigation. A step-by-step explanation of how to perform ultrasonographic evaluation is shown.

Fareler üzerinde deneysel üreme araştırmalarda Ultrasonografi

With the development of assisted reproductive technology and the ethical limitations of research on humans, rat animal models have been widely used in ...

Advanced Imaging of Lung Homing Human Lymphocytes in an Experimental In Vivo Model of Allergic Inflammation Based on Light-sheet Microscopy

Overwhelming tissue accumulation of highly activated immune cells represents a hallmark of various chronic inflammatory diseases and emerged as an attractive therapeutic target in the clinical management of affected patients. In order to further optimize strategies aiming at therapeutic regulation of pathologically imbalanced tissue infiltration of pro-inflammatory immune cells, it will be of particular importance to achieve improved insights into disease- and organ-specific homing properties of peripheral lymphocytes. The here described experimental protocol allows to monitor lung accumulation of fluorescently labeled and adoptively transferred human lymphocytes in the context of papain-induced pulmonary inflammation. In contrast to standard in vitro assays frequently used for the analysis of immune cell migration and chemotaxis, the now introduced in vivo setting takes into account lung-specific aspects of tissue organization and the influence of the complex inflammatory scenario taking place in the living murine organism. Moreover, three-dimensional cross-sectional light-sheet fluorescence microscopic imaging does not only provide quantitative data on infiltrating immune cells, but also depicts the pattern of immune cell localization within the inflamed lung. Overall, we are able to introduce an innovative technique of high value for immunological research in the field of chronic inflammatory lung diseases, which can be easily applied by following the provided step-by-step protocol.

The here introduced protocol allows characterization of the lung homing capacity of primary human lymphocytes under in vivo inflammatory conditions. Pulmonary infiltration of adoptively transferred human immune cells in a mouse model of allergic inflammation can be imaged and quantified by light-sheet fluorescence microscopy of chemically cleared lung tissue.