Name: an ex vivo model to study hormone action in the human breast
Uploaded: 2015-01-08T15:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 31 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast at JoVE.com

Yazarlar mamoplasti fotoğrafı sağlamak için Lozan Üniversitesi Hastanesi M. Fişini teşekkür, M. Wirth ve Deneysel Kanser Araştırma Enstitüsü İsviçre, Araştırma Moleküler Onkoloji Yeterlilik Ulusal Merkezi, Yaşam Bilimleri Okulu, Ecole Polytechnique Fédérale de A. Ayyanan eleştirel yorumlar için Manchester Üniversitesi teknik yardım için Lozan ve R. Clarke. Bu sonuçlara önde gelen araştırma herhangi bir hibe anlaşması kapsamında SNF3100A0-112090, Oncosuisse 531.817 ve Yenilikçi İlaçlar Girişimi Ortak Taahhüt destek aldı. Avrupa Birliği&#39;nin Yedinci Çerçeve Programı (FP7 / 2007-2013) ve tür katkı İlaç Sanayi ve Dernekleri şirketlerin &#39;Avrupa Federasyonu mali katkısı oluşan kaynaklar olan 115.188. Yenilikçi İlaçlar Girişimi Web adresi <a href="http://www.imi.europa.eu/" target="_blank">http://www.imi.europa.eu/</a> . &lt;/ P&gt;

Genel değerlendirmeler: Zaman Ahead, bir etik protokolü kurmak, hastalar için anketler hazırlar, ve klinik personelinin eğitim görmek. Indirgeme mamoplasti cerrahi malzeme kullanmadan önce, yetkileri tedarik ve hasta rıza sağlamak. Doku bulaşıcı olması ve buna göre ele alınması gerekiyor olabilir. Deneysel Kanser Araştırma Enstitüsü İsviçre - Bu protokol ISREC etik komitesi tarafından onaylandı. 1. Doku Kurtarma, İşleme ve Biyo-bankacılık Biyo-bankacılık için en uygun örnek kalitesini sağlamak için, birkaç adım laboratuarına taşımak için önce hastanede yapılır. Hastanede: <ol><li> Gerekirse, indirgeme mamoplasti cerrahi ve kan örneklerinden, steril koşullar altında insan göğüs dokuları elde edilir. Doku malign lezyonların varlığını ekarte etmek için örnek olacak patolog tarafından incelenmesi gerekir. </li><li> Meme t yerleştirinsteril bir gemide başlık altında vermek ve makas, cerrahi neşter ve zaten buhar sterilizatör sterilize edilir forseps hazırlamak. Bunu açmak için bir neşter kullanılarak meme dokusunun farklı sitelerde derin kesim olun. Insan meme dokusunda sarı yağ dokusunda gömülü kanalları ve lobülleri, oluşan beyaz teller için bakmak. NOT: Sarı yağ dokusu beyaz parankimal oranı kadınlarda farklılık; tipik genç kadınlar daha epitel doku var. </li><li> Daha sonra makas ile adipoz dokudan hafifçe onları ayırmak, beyaz malzeme parçaları seçin ve forseps ile onları tutun. Kan damarlarını almaktan kaçının. </li><li> Fosfat tamponlu tuzlu su (PBS), pH 7.2 doku durulayın adet kanı çıkarmak için kullanılır. Ve% 1 An (5000 birim / ml penisilin ve 5000 ug / ml streptomisin içeren)% 2 penisilin / streptomisin ile fenol kırmızısı olmaksızın F12 ortamı (Dulbecco Değiştirilmiş Kartal Ortamı F12) ihtiva eden 250 ml&#39;lik bir plastik şişe doku aktarıntibiotic / amfoterisin B (10,000 birim / mL penisilin, streptomisin 10,000 ug / ml amfoterisin B ve 25 ug / ml olmak üzere). Laboratuara taşınması için ortamda depolanmalıdır dokular. </li><li> Soğuk (kuru buz) izopentanın ile cryovials bunları dondurmak RNA ve protein çıkarma ve flaş için 5 mm çaplı - 3 adet hazırlayın. Laboratuara taşınması için kuru buz kutusuna aktarabilirsiniz. </li><li> Kalıba 5 mm ve optimum kesme Sıcaklığı (Ekim), bir tabaka ile örtün ve daha sonra soğuk izopentan ile dolu kutunun düz bir alt kalıp yer - 3 parçalarını koyun. Tam donma sonra kuru buz kutusuna kalıp aktarmak. </li><li> Formaldehit içinde paraformaldehid 5 mm çapında (PFA)% 4 ve 5 parça (FA), daha sonra RT histolojik analiz PBS içinde% 4 - 3 5 adet düzeltin. Bazı antikorlar, daha bir ya da iki diğer çalışmak üzere iki farklı sabitleyici tavsiye edilir. </li></ol> Laboratuvarda: <ol start="8"><li> Yapmakindirgeme mammoplasty ilgili tüm bilgileri cument, cerrahi ve örnekler olup olmadığını tarih sağ meme karşı soldan türetilmiştir. </li><li> -80 ° C&#39;de dondurulmuş numuneler ve tespitin 2 saat sonra histolojik kasetlerine sabit dokuları aktarın. Daha sonra 4 ° C&#39;de O / N depolama için, etanol, PBS içinde veya% 70 ya da koyun. Ertesi gün, parafin gömme için histoloji tesislerine histoloji kasetleri aktarmak. </li></ol> 2. Doku sindirimi ve Hormon Uyarım <ol><li> P2 hücre kültürü odasında bir laminer akış kabine doku örnekleri içeren şişeleri aktarın. Steril doğrama tahtası (29 x 19 cm) doku parçaları yerleştirin. Forseps ile malzemeyi tutun ve neşter ile meme parankimi (beyaz kısmı) kalan yağ ve damarları kazımak. 10 cm kültür çanak PBS beyaz malzemeyi yerleştirin. </li><li> Tüm parçalar yağlı malzemenin çıkartılması ve atılması sonra onları güvenlik kuralına görelaboratuvar s, arka doğrama tahtası üzerinde epitel doku içeren beyaz parçalar yerleştirin. Karşıt neşter kullanılarak doku kesmek ve en fazla 2 mm çaplı parçalara doğrayın. </li><li> Yeterli büyüklükte tüplerin içine kıyılmış malzemeyi yerleştirin: 1, 2.5 ve 10 ml kadar 5, 15 ya da 50 ml&#39;lik tüplere, sırasıyla. Tipik olarak 5 ml&#39;lik bir tüp verimi yeterli parafin gömülmesi ve hormon uyarımlar için malzeme ve flöresanla aktive edilen hücre bir 15 ml tüp verimi yeterli malzemenin sıralama (FACS). Daha büyük tüp alikotları dondurulması için kullanılır. </li><li> % 1 penisilin / streptomisin / amfoterisin B (fenol kırmızısı olmadan DMEM / F12) ortama aşağıdakilerden oluşan sindirim ana karışımı hazırlamak ve (Clostridium histolyticum&#39;dan Clostridiopeptidase A) bir kolajenaz. Sindirim saatlerine göre kollajenaz doz. <ol><li> 12, 24, ve kuluçkalama 36 saat için, 1.5 mg / ml, 1.0 mg / ml ve 0.5 mg nihai kolajenaz konsantrasyonu, kullanımı / ml olarak tespit edildi. 4 kez sindirim ana karışımı ekleyinsindirilmiş malzemenin hacmi yeterli ajitasyon ve havalandırma sağlamak için. NOT: deneysel tasarım ve hormon stimülasyon süresine bağlı olarak, sırasında veya enzimatik sindirim adım ve mikro kurtarma sonra ya hormonlar ekleyin. </li></ol></li><li> Numune ve kontrol aracı test etmek için, istenen konsantrasyonda hormon (lar) ekleyin. 17 β-estradiyol ve promegeston (R5020) ile stimülasyonu için 20 nM nihai konsantrasyon kullanılır. Not: R5020 ortamda doğal progesteron daha kararlı olan bir sentetik progesteron reseptör agonistidir. <ol><li> 37 ° C ve 40 rpm O / N bir inkübatör içinde silindir mikser yerleştirin tüpleri. Mikserde örnekleri yerleştirmeden önce, tüm maddi santrifüj tüplerine boyunca dağıtır sağlamak için onları çok iyi tekrar süspansiyon. </li></ol></li><li> Sindirim az 12 saat hormon stimülasyon kez en az 12 saat (O / N), alır gibi, (mikroyapıların kurtarma sonra hormonları eklemek deAdım 3 altında kuyruklu). Eğer mikro tekrar süspansiyon ve ultra-düşük bağlanma plakaları üzerinde süspansiyon yer olarak hormonları ekleyin. Doku mikro yaklaşık% 70, canlılığını muhafaza büyüme faktörü içermeyen ortam içinde 7 gün boyunca ultra-düşük bağlanma plakaları üzerinde tutulabilir. </li><li> RNA ve protein analizi için, santrifüj tüplerine 5 dakika ve flaş dondurma için 400 xg&#39;de santrifüj doku mikro toplamak. </li></ol> Doku Microstructures 3. Kurtarma <ol><li> 5 dakika boyunca 400 xg&#39;de tüp (ler) santrifüj. Santrifüj tüpünün üst yağ aspire ve 5 dakika süreyle 1,250 x g de yeni bir santrifüj tüpüne ve santrifüj, fibroblastlar içinde zenginleştirilmiş olan geri kalan sulu süpernatan, süpernatanlarının aktarın. NOT: Meme dokusu mikroyapıları sonraki tüm adımlar için, çok yapışkan olduğundan tüp hafifçe çalkalayarak pelletini. Pipetleme nedeniyle malzeme kaybetme riski tavsiye edilmez. </li&gt; <li> Mikro ve PBS,% 2 Fetal Buzağı Serumu (FCS), sulu süpernatan elde edilen fibroblastlar zenginleştirilmiş pelet yeniden süspanse. Daha sonra 5 dakika boyunca 1.250 xg&#39;de hem tüpleri dönmeye ve daha sonra süpernatantlar atın. </li><li> 3 pelet tekrar süspansiyon - 5 ml kırmızı hücre kan parçalama tamponu ve temiz tüplere aktarabilirsiniz. Oda sıcaklığında 5 dakika boyunca inkübe. </li><li> PBS,% 2 FCS 2x hacmi ilave edin ve 5 dakika boyunca 1250 x g&#39;de santrifüj. 5 dakika boyunca 1,250 x g hızında PBS,% 2 FCS ve santrifüj ile pelet yıkayın. Iki kez bu adımı tekrarlayın. </li></ol> Akım Sitometrisi 4. Örnekler <ol><li> Pelet% 0.25 oranında tripsin 2 ml ve hücreleri ayırmak için 1.000 ul Pipetman ile 2 dakika süreyle çok hafifçe aşağı yukarı pipetleme karıştırın ve - 1 ekleyin. </li><li> 9 ml PBS,% 2 FCS eklenerek tripsin aktivitesi inhibe. 5 dakika boyunca 450 x g&#39;de santrifüj ve 10 ml PBS,% 2 FCS içinde pelletini. </li><li> T yerleştirilen 40 mikron hücre süzgecinden üzerine hücre süspansiyonu aktarın50 ml&#39;lik bir santrifüj tüpünün op tek hücrelerin hazırlanması için. Hücre süspansiyonu bir kaç mikrolitre filtrenin üstünde kalırsa, bir pipet ile süzgeçten diğer taraftan onları aspire onları filtreden geçerek yardım ve filtre mikroyapılarının ekleyebilirsiniz. </li><li> Daha sonra, ayrı bir bağışıklık hücreleri, anti-CD45, bir kokteyl ile mikro gelen fibroblastlar ve endotel hücreleri, anti-FAP ve anti-CD31 antikorları ve sırasıyla 10 lümen ve bazal hücrelerin ayrılması için bir pan-epitel işaretleyici EpCAM ve CD10 göre, FACS ile sıralamak . </li></ol> Histoloji 5. Örnekler <ol><li> Yukarıda tarif edildiği gibi, mekanik olarak ve enzimatik olarak sindirilen materyali yıkandıktan sonra, 30 dakika boyunca oda sıcaklığında PBS içinde% 4 PFA içinde 1 ml 1.5 mi, başlangıç ​​maddesi granül düzeltin. </li><li> 5 dakika boyunca 1.250 xg&#39;de Santrifüj ve 1 ile yıkayın - iki kez 2 ml PBS. </li><li> 10 dakika için 16,000 x g&#39;de santrifüjleyin. Bu süre boyunca, (Tris-Asetat-EDTA agaroz% 1 çok amaçlı hazırlanmasıTAE) tampon ve solüsyon kaynama noktasına gelene kadar mikrodalga fırında ısıtın çözüm. <ol><li> Mikrodalga fırından çözüm çıkarın ve çözüm karıştırın ve kalan agaroz parçacıkları tekrar süspansiyon yavaşça şişeyi girdap. 50 ° C&#39;ye soğutun, agaroz çözeltisi ve bir parafin baz kalıp içinde 1 ml akış 31 x 23 x 13.5 mm çapında. </li></ol></li><li> Süpernatant atılır ve katılaşan bir tabakanın üstünde yer pelet - düz bir uca sahip olan bir spatula kullanılarak agaroz (1 ila 3 mm) kadardı. Agaroz ek bir katman (40 ° C) ile hepsini kapsayacak. </li><li> Agaroz katılaşır sonra, genellikle 5 dakika içinde, parafin gömme için histoloji kasetleri içine agaroz blokları koydu. Agaroz örnekleri kalem küçük harflerle yazılmış azalma mamoplasti numarası, deneysel koşul ve tarihi hakkında tüm bilgiler kaset beyaz ofis kağıdı yerleştirin birlikte; Bu yazı sonraki tüm tedavi adımlarını dayanıklıdır. </li><li> Kasetler koyPBS O / N ya da 4 ° C&#39;de hafta sonu boyunca depolama için% 70 etanol içinde. Biz iki depolama çözümleri arasında herhangi bir fark fark değil. Sonra parafin gömme için histoloji tesislerine histoloji kasetleri aktarmak. </li></ol> 6. Dondurma Mikroyapılar (Gelecek Kültürleme) <ol><li> % 10 dimetil sülfoksit (DMSO) ile FCS içeren orta ve cryovials 1 ml&#39;lik numuneler dondurulması yeniden süspanse doku mikro. Elde edilen cryovials sayısı azaltma mammoplasty elde edilen birincil malzeme miktarına bağlıdır. </li><li> -12 ° C sıcaklık ile azalan, 6 ° C / dakika oranı ile C ila -7 sıcaklığının düşürülmesi, 5 dakika 4 ° C &#39;de yaşayan aşağıdaki program ile bir kontrollü hız dondurucu kullanılarak doku mikro içeren cryovials Freeze 6 ° C / dk, 10 dk konut hızı, 6 ° C / dakika oranı ile -40 ° C sıcaklık azaldıkça -80 ° C sıcaklıkta azalmaktadır6 ° C / dakika hızı. Sonra ° C derin dondurucuda -80 kadar cryovials aktarmak. </li><li> Ertesi gün, uzun depolama için sıvı azot tankına ° C -80 cryovials aktarın. </li></ol>

<ol>
	<li>Beral, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breast+cancer+and+hormone-replacement+therapy+in+the+Million+Women+Study.">Breast cancer and hormone-replacement therapy in the Million Women Study.</a> Lancet. 362 (9382), 419-427 (2003).</li><li>MacMahon, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age+at+first+birth+and+breast+cancer+risk.">Age at first birth and breast cancer risk.</a> Bull World Health Organ. 43 (2), 209-221 (1970).</li><li>Pike, M. C., Krailo, M. D., Henderson, B. E., Casagrande, J. T., Hoel, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term='Hormonal'+risk+factors,+'breast+tissue+age'+and+the+age-incidence+of+breast+cancer.">'Hormonal' risk factors, 'breast tissue age' and the age-incidence of breast cancer.</a> Nature. 303 (5920), 767-770 (1983).</li><li>Brisken, C., O'Malley, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormone+action+in+the+mammary+gland.">Hormone action in the mammary gland.</a> Cold Spring Harb Perspect Biol. 2 (12), a003178 (2011).</li><li>Levenson, A. S., Jordan, V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MCF-7:+the+first+hormone-responsive+breast+cancer+cell+line.">MCF-7: the first hormone-responsive breast cancer cell line.</a> Cancer Res. 57 (15), 3071-3078 (1997).</li><li>Tanos, T., Rojo, L. J., Echeverria, P., Brisken, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ER+and+PR+signaling+nodes+during+mammary+gland+development.">ER and PR signaling nodes during mammary gland development.</a> Breast Cancer Res. 14 (4), 210 (2012).</li><li>Roskelley, C., Desprez, P., Bissell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+matrix-dependent+tissue-specific+gene+expression+in+mammary+epithelial+cells+requires+both+physical+and+biochemical+signal+transduction.">Extracellular matrix-dependent tissue-specific gene expression in mammary epithelial cells requires both physical and biochemical signal transduction.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 91 (26), 12378-12382 (1994).</li><li>Kass, L., Erler, J. T., Dembo, M., Weaver, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammary+epithelial+cell:+influence+of+extracellular+matrix+composition+and+organization+during+development+and+tumorigenesis.">Mammary epithelial cell: influence of extracellular matrix composition and organization during development and tumorigenesis.</a> Int J Biochem Cell Biol. 39 (11), 1987-1994 (2007).</li><li>Graham, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+replication+licensing+and+progenitor+numbers+are+increased+by+progesterone+in+normal+human+breast.">DNA replication licensing and progenitor numbers are increased by progesterone in normal human breast.</a> Endocrinology. 150 (7), 3318-3326 (2009).</li><li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comment+on+&#34;Progesterone/RANKL+is+a+major+regulatory+axis+in+the+human+breast&#34;.">Comment on &#34;Progesterone/RANKL is a major regulatory axis in the human breast&#34;.</a> Sci Transl Med. 5 (215), 215le214 (2013).</li><li>Brisken, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progesterone+signalling+in+breast+cancer:+a+neglected+hormone+coming+into+the+limelight.">Progesterone signalling in breast cancer: a neglected hormone coming into the limelight.</a> Nat Rev Cancer. 13 (6), 385-396 (2013).</li><li>Xu, R., Boudreau, A., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+architecture+and+function:+dynamic+reciprocity+via+extra-+and+intra-cellular+matrices.">Tissue architecture and function: dynamic reciprocity via extra- and intra-cellular matrices.</a> Cancer Metastasis Rev. 28 (1-2), 167-176 (2009).</li><li>Tanos, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progesterone/RANKL+is+a+major+regulatory+axis+in+the+human+breast.">Progesterone/RANKL is a major regulatory axis in the human breast.</a> Sci Transl Med. 5 (182), 182ra155 (2013).</li><li>Yalcin-Ozuysal, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antagonistic+roles+of+Notch+and+p63+in+controlling+mammary+epithelial+cell+fate.">Antagonistic roles of Notch and p63 in controlling mammary epithelial cell fate.</a> Cell Death Differ. 17 (10), 1600-1610 (2010).</li><li>Hines, W. C., Su, Y., Kuhn, I., Polyak, K., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sorting+out+the+FACS:+a+devil+in+the+details.">Sorting out the FACS: a devil in the details.</a> Cell Rep. 6 (5), 779-781 (2014).</li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Burada anlatılan ex vivo kültür normalde insan kadın meme bulunan diğer hücre tipleri ile birlikte sağlam kanalları ve lobülleri içeren meme dokusu mikro sağlar. Genellikle azaltma tekniği mevcut ameliyat teknikleri elde edilen insan göğüs dokusunun işlenmesi sırasında, yağ dokusu, stromal matrisin mekanik ve enzimatik sindirme ve kırmızı kan hücrelerinin lizizine çıkarılması süt kanalı parçaları ve terminal duktal lobüler birimleri zenginleştirir. Sağ süresince doğru konsant...

A correction was made to <a href="/video/52436">An Ex Vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast</a>. There was an error with the author, Marie Shamsheddin&#39;s, name. The author&#39;s name has been corrected to:
Marie Shamseddin
instead of:
Marie Shamsheddin

A correction to the author list has been made for the article <a href="/video/52436">An Ex Vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast</a>.

Erratum: An Ex Vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

Meme kanserinde mutasyon manzara hakkında bilgiler hızla artmaktadır. Daha az dikkat meme kanseri gelişimini etkileyen sistemik faktörler ödenmiştir. Üreme hormonları maruz kalma hastalığın ilerlemesine 1-3 üzerinde büyük bir etkisi vardır. Ancak, üreme hormonları, insan meme çarpmadan hangi mekanizmalar tam olarak anlaşılamamıştır. Genetiği fare modelleri ile çalışmak onlar birkaç mansap efektörlerinin 4 ile hücre içsel ve parakrin sinyal içerdiğini ortaya koymuştur. İnsan meme hormon eylem hakkında sınırlı bilgi yeterli modellerin eksikliği büyük ölçüde kaynaklanmaktadır. Östrojen reseptörü (ER), progesteron reseptörü (PR), sinyal mekanizmaları ilişkin pek çok çalışma, MCF-7 ve T47D hormon reseptör pozitif göğüs kanseri hücre çizgileri ile gerçekleştirilmiştir. Bunlar alrea vardı ilerlemiş meme kanserli hastaların plevral efüzyon elde edildidy birden tedavileri 5 aldı. İnsan meme gibi basit laboratuar çalışmalarındaki modellerde bulgular biyolojik önemi, bu in vitro modellerde tespit şüpheli ve hedef genleridir olan hayvan modellerinde 6&#39;da tanımlanan hedef genlerin farklıdır. Birincil insan meme epitel hücreleri, in vitro olarak kültürlenir onlar hormon reseptör ekspresyonu ve bu nedenle hormon yanıt 7,8 kaybetmek eğilimindedir. Bu sorun, Matrigel kullanarak karmaşık 3D yaklaşımlarla circumventd edilebilir. Bu şekilde, C. Clarke ve arkadaşları, hormon reseptörü ifade muhafaza ve projesteron uyarması 9 bir çoğalma tepkisi gösterdi göğüs epitelyal hücrelerinin kurulma başarmıştır. Bununla birlikte, in vivo progesteron reseptörü hedef genlerin önemli iki Wnt-4 ve RANKL bu sistem 9 progesteron stimülasyonu üzerine azalmadı. Bu yaklaşım, son olarak nitro ile daha fazla alınmıştır </em&gt; hormon öncesi ve RANKL&#39;ın indüksiyon 10 sağlandı. Bir uyarı, matrigel toplu bağımlı faaliyetleri vardır kalır pahalı ve sadece küçük hücre sayıları için apt bir deneysel tasarım gerektirir. In vivo ER ve PR sinyalizasyon büyük ölçüde parakrin etkileşimleri 11 aracılık bulgusuna dayanarak, biz hücrelerarası etkileşimleri muhafaza edilmesi gerektiğini savundu. Dokular olarak kaybolur bir başka önemli faktör, in vitro kültür için tek bir hücre için hücre dışı matriks ile epitelyal hücrelerinin etkileşimlerdir ayrışmış edilir; ancak bu epitel farklılaşması için çok önemli olan ve bozulma tümör oluşumu 12 önemlidir. Bu düşünceyle, biz taze cerrahi ıskarta malzeme 13 meme dokusu mikro izole etmek için bir yöntem kurdu. İç luminal ve dış myoepitheli sahip bir iki tabakalı epitelyum oluşan meme parankimi,ark hücreleri, adipoz dokudan kesilmiş, mekanik ve enzimatik ayrışma tabi tutulur. Yıkama ve santrifüj sonra, süt kanallarının parçaları birçok stromal hücreler ile yakın ilişkileri korumak olduğunu elde edilir. Bu doku mikro duyarlı hormon kalır. Model klinik örneklerden 13 valide edildi. Bu haliyle, bu işlem, bir biyolojik ve klinik olarak anlamlı bir bağlamda meme hormon etkisini incelemek için yardımcı olabilir.

<table><tbody><tr><td>Microlitre Centrifuge</td><td>Heraeus Biofuge Fresco</td><td>75005521</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge 5810R</td><td>Eppendorf</td><td>5810 000.327</td><td></td></tr><tr><td>Cryobox</td><td>Nalgene&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td>5100-0001</td><td></td></tr><tr><td>Controlled Rate Freezer EF600 Grant</td><td>Asymptote&amp;nbsp;</td><td>EF600</td><td></td></tr><tr><td>CO&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; incubator</td><td>Hera Cell Heraeus</td><td>51022391</td><td></td></tr><tr><td>Roller Mixer SRT9D</td><td>Sturt</td><td>SRT9D</td><td></td></tr><tr><td>Histology Cassettes</td><td>Medizintechnik</td><td>81-0021-00</td><td></td></tr><tr><td>Cell Strainer</td><td>Falcon</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>Strile Surgical Blade&amp;nbsp;</td><td>Aesculap</td><td>BB536&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Scalpel</td><td>Aesculap</td><td>BB084R</td><td></td></tr><tr><td>Forceps</td><td>Aesculap</td><td>BD047R</td><td></td></tr><tr><td>Scissors</td><td>Aesculap</td><td>BC374R</td><td></td></tr><tr><td>Paraffin base mold</td><td>SAKURA</td><td>4166</td><td></td></tr><tr><td>Optimal Cutting Temperature (OCT) Cryomatrix</td><td>Thermoscientific</td><td>6769006</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin&amp;nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotic/Antimycotic</td><td>Life Technologies</td><td>15240-062</td><td></td></tr><tr><td>DMEM F/12</td><td>Life Technologies</td><td>11039-021</td><td>Prewarm (37 &amp;deg;C)</td></tr><tr><td>Collagenase</td><td>Roche</td><td>11 088 793 001</td><td>Prewarm (37 &amp;deg;C)</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Life Technologies</td><td>10270</td><td>Can be replaced with Fetal Calf Serum</td></tr><tr><td>Cell Blood Lysis Buffer</td><td>Sigma</td><td>R7757</td><td></td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td><td>Sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>Life Technologies</td><td>15400-054</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Invitrogen</td><td>16500-500</td><td></td></tr><tr><td>Formaldehyde</td><td>Sigma</td><td>F1635</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Roth</td><td>335</td><td></td></tr><tr><td>Isopentane</td><td>Sigma</td><td>M32631</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Merck</td><td>1009831000</td><td></td></tr><tr><td>Cryogenic vials (5.0 ml)</td><td>VWR, International</td><td>479-0820</td><td></td></tr><tr><td>Ultra low attachment culture dish</td><td>Corning, NY 14831</td><td>3471</td><td></td></tr></tbody></table>

an ex vivo model to study hormone action in the human breast

İnsan meme hormon eylem çalışması yeterli model sistemler eksikliği engel olmuştur. İn vitro kültüre, primer meme epitelyum hücreleri hormon reseptörü ifade kaybetme eğilimindedir. Yaygın olarak kullanılan hormon reseptörü pozitif meme kanseri hücre kuşakları in vivo duruma uygunluğu sınırlıdır. Burada, insan meme hormon etkisini incelemek için bir eks vivo modeli açıklar. Böyle azaltma tekniği mevcut ameliyat teknikleri veya mammectomies gibi cerrahi ıskarta malzeme Taze insan meme doku örnekleri mekanik ve enzimatik kanalları ve lobülleri ve çoklu stromal hücre tipleri içeren doku parçaları elde etmek için sindirilir. Büyüme faktörleri olmaksızın bazal ortamda tutulur Bu doku mikro bunların hücreler arası temas doku normal yapı, ve birkaç gün boyunca duyarlı hormon kalır. Bu maddeler hali hazırda, RNA ve protein çıkarma, histolojik analiz için işleme veya orta dondurma saklanır. Floresanaktif hücre ayrıştırma (FACS) belirli bir hücre popülasyonlarının zenginleştirilmesi için de kullanılabilir. Bu protokol son derece karmaşık, çeşitli insan örnekleri ile öteleme çalışmalar için basit, standart bir yaklaşım sağlar.

Östrojen ve progesteron rolünü incelemek ve daha iyi insan meme moleküler işlevlerini anlamak için, onların bilgilendirilmiş onam alındıktan sonra azalma tekniği mevcut ameliyat teknikleri (Şekil 1) uygulanan hastalarda taze insan meme doku örneklerinin toplamak. Biz de hastaların tıbbi ve üreme geçmişi, hem de ameliyat sırasında serum progesteron seviyelerini belirlemek için kan örneği almak. Taze azaltma tekniği mevcut ameliyat teknikleri doku mekanik ve enzimatik ayrışmış....

Watch this Scientific Journal Video about An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast at JoVE.com

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

Biz insan meme hormon eylem incelemek için yeni bir ex vivo modeli geliştirdik. Bu doku mimarisi, hücreler arası etkileşimleri ve parakrin sinyal korumak cerrahi göğüs doku numunesinin izole doku mikro dayanmaktadır.

Bir<em&gt; Ex vivo</em&gt; Model İnsan Meme Hormon Eylem Eğitim için

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...

an-ex-vivo-model-to-study-hormone-action-in-the-human-breast

Research

JoVE Journal

Medicine

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

11.3K Görüntüleme.  Ecole polytechnique fédérale de Lausanne.  Biz insan meme hormon eylem incelemek için yeni bir ex vivo modeli geliştirdik. Bu doku mimarisi, hücreler arası etkileşimleri ve parakrin sinyal korumak cerrahi göğüs doku numunesinin izole doku mikro dayanmaktadır. 

Video: An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, xenografts, genetic manipulation, chemical reagents induction, etc.) have various pathological characters and play important roles in investigating certain aspects of diseases. Although no single model can totally mimic the whole human disease progression, orthotopic organs disease models with a proper stromal environment play an irreplaceable role in understanding diseases and screening for potential drugs. In this article, we describe how to implant breast cancer cells into the mammary fat pad in a simple, less invasive, and easy-to-handle way, and follow the metastasis to distant organs. With the proper features of primary tumor growth, breast and nipple pathological changes, and a high occurrence of other organs&#39; metastasis, this model maximumly mimics human breast cancer progression. Primary tumor growth in situ, long-distant metastasis, and the tumor microenvironment of breast cancer can be investigated by using this model.

Here, we present a protocol to implant breast cancer cells into the mammary fat pad in a simple, less invasive, and easy-to-handle way, and this mouse orthotopic breast cancer model with a proper mammary fat pad environment can be used to investigate various aspects of cancer.

Fareler meme yağ yastığı içine meme kanser hücrelerinin Orthotopic enjeksiyon

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

Kanser Araştırmaları

Orthotopic Transplantation of Breast Tumors as Preclinical Models for Breast Cancer

Preclinical models that faithfully recapitulate tumor heterogeneity and therapeutic response are critical for translational breast cancer research. Immortalized cell lines are easy to grow and genetically modify to study molecular mechanisms, yet the selective pressure from cell culture often leads to genetic and epigenetic alterations over time. Patient-derived xenograft (PDX) models faithfully recapitulate the heterogeneity and drug response of human breast tumors. PDX models exhibit a relatively short latency after orthotopic transplantation that facilitates the investigation of breast tumor biology and drug response. The transplantable genetically engineered mouse models allow the study of breast tumor immunity. The current protocol describes the method to orthotopically transplant breast tumor fragments into the mammary fat pad followed by drug treatments. These preclinical models provide valuable approaches to investigate breast tumor biology, drug response, biomarker discovery and mechanisms of drug resistance.

Patient-derived xenograft (PDX) models and transplantable genetically engineered mouse models faithfully recapitulate human disease and are preferred models for basic and translational breast cancer research. Here, a method is described to orthotopically transplant breast tumor fragments into the mammary fat pad to study tumor biology and evaluate drug response.

Meme Kanseri için Preklinik Modeller Olarak Meme Tümörlerinin Ortopedik Transplantasyonu

Preclinical models that faithfully recapitulate tumor heterogeneity and therapeutic response are critical for translational breast cancer research. ...

Isolation and Functional Assessment of Human Breast Cancer Stem Cells from Cell and Tissue Samples

Breast cancer stem cells (BCSCs) are cancer cells with inherited or acquired stem cell-like characteristics. Despite their low frequency, they are major contributors to breast cancer initiation, relapse, metastasis and therapy resistance. It is imperative to understand the biology of breast cancer stem cells in order to identify novel therapeutic targets to treat breast cancer. Breast cancer stem cells are isolated and characterized based on expression of unique cell surface markers such as CD44, CD24 and enzymatic activity of aldehyde dehydrogenase (ALDH). These ALDHhighCD44+CD24- cells constitute the BCSC population and can be isolated by fluorescence-activated cell sorting (FACS) for downstream functional studies. Depending on the scientific question, different in vitro and in vivo methods can be used to assess the functional characteristics of BCSCs. Here, we provide a detailed experimental protocol for isolation of human BCSCs from both heterogenous populations of breast cancer cells as well as primary tumor tissue obtained from breast cancer patients. In addition, we highlight downstream in vitro and in vivo functional assays including colony forming assays, mammosphere assays, 3D culture models and tumor xenograft assays that can be used to assess BCSC function.

This experimental protocol describes the isolation of BCSCs from breast cancer cell and tissue samples as well as the in vitro and in vivo assays that can be used to assess BCSC phenotype and function.

İnsan Meme Kanseri Kök Hücrelerinin Hücre ve Doku Örneklerinden İzolasyonu ve Fonksiyonel Değerlendirmesi

Breast cancer stem cells (BCSCs) are cancer cells with inherited or acquired stem cell-like characteristics. Despite their low frequency, they are major ...

Modeling Breast Cancer in Human Breast Tissue using a Microphysiological System

Breast cancer (BC) remains a leading cause of death for women. Despite more than $700 million invested in BC research annually, 97% of candidate BC drugs fail clinical trials. Therefore, new models are needed to improve our understanding of the disease. The NIH Microphysiological Systems (MPS) program was developed to improve the clinical translation of basic science discoveries and promising new therapeutic strategies. Here we present a method for generating MPS for breast cancers (BC-MPS). This model adapts a previously described approach of culturing primary human white adipose tissue (WAT) by sandwiching WAT between adipose-derived stem cell sheets (ASC)s. Novel aspects of our BC-MPS include seeding BC cells into non-diseased human breast tissue (HBT) containing native extracellular matrix, mature adipocytes, resident fibroblasts, and immune cells; and sandwiching the BC-HBT admixture between HBT-derived ASC sheets. The resulting BC-MPS is stable in culture ex vivo for at least 14 days. This model system contains multiple elements of the microenvironment that influence BC including adipocytes, stromal cells, immune cells, and the extracellular matrix. Thus BC-MPS can be used to study the interactions between BC and its microenvironment. 
We demonstrate the advantages of our BC-MPS by studying two BC behaviors known to influence cancer progression and metastasis: 1) BC motility and 2) BC-HBT metabolic crosstalk. While BC motility has previously been demonstrated using intravital imaging, BC-MPS allows for high-resolution time-lapse imaging using fluorescence microscopy over several days. Furthermore, while metabolic crosstalk was previously demonstrated using BC cells and murine pre-adipocytes differentiated into immature adipocytes, our BC-MPS model is the first system to demonstrate this crosstalk between primary human mammary adipocytes and BC cells in vitro.

This protocol describes the construction of an in vitro microphysiological system for studying breast cancer using primary human breast tissue with off the shelf materials.

Mikrofizyolojik Sistem Kullanarak İnsan Meme Dokusunda Meme Kanseri Modellemesi

Breast cancer (BC) remains a leading cause of death for women. Despite more than $700 million invested in BC research annually, 97% of candidate BC drugs ...

An Ex Vivo Brain Slice Model to Study and Target Breast Cancer Brain Metastatic Tumor Growth

Brain metastasis is a serious consequence of breast cancer for women as these tumors are difficult to treat and are associated with poor clinical outcomes. Preclinical mouse models of breast cancer brain metastatic (BCBM) growth are useful but are expensive, and it is difficult to track live cells and tumor cell invasion within the brain parenchyma. Presented here is a protocol for ex vivo brain slice cultures from xenografted mice containing intracranially injected breast cancer brain-seeking clonal sublines. MDA-MB-231BR luciferase tagged cells were injected intracranially into the brains of Nu/Nu female mice, and following tumor formation, the brains were isolated, sliced, and cultured ex vivo. The tumor slices were imaged to identify tumor cells expressing luciferase and monitor their proliferation and invasion in the brain parenchyma for up to 10 days. Further, the protocol describes the use of time-lapse microscopy to image the growth and invasive behavior of the tumor cells following treatment with ionizing radiation or chemotherapy. The response of tumor cells to treatments can be visualized by live-imaging microscopy, measuring bioluminescence intensity, and performing histology on the brain slice containing BCBM cells. Thus, this ex vivo slice model may be a useful platform for rapid testing of novel therapeutic agents alone or in combination with radiation to identify drugs personalized to target an individual patient&#39;s breast cancer brain metastatic growth within the brain microenvironment.

An Ex Vivo Brain Slice Model to Study and Target Breast Cancer Brain Metastatic Tumor Growth

We introduce a protocol for measuring real-time drug and radiation response of breast cancer brain metastatic cells in an organotypic brain slice model. The methods provide a quantitative assay to investigate the therapeutic effects of various treatments on brain metastases from breast cancer in an ex vivo manner within the brain microenvironment interface.

Meme Kanseri Beyin Metastatik Tümör Büyümesini İncelemek ve Hedeflemek için Ex Vivo Beyin Dilimi Modeli

Brain metastasis is a serious consequence of breast cancer for women as these tumors are difficult to treat and are associated with poor clinical ...

Mammary Epithelial and Endothelial Cell Spheroids as a Potential Functional In vitro Model for Breast Cancer Research

Breast cancer is the leading cause of mortality in women. The growth of breast cancer cells and their subsequent metastasis is a key factor for its progression. Although the mechanisms involved in promoting breast cancer growth have been intensively studied using monocultures of breast cancer cells such as MCF-7 cells, the contribution of other cell types, such as vascular and lymphatic endothelial cells that are intimately involved in tumor growth, has not been investigated in depth. Cell-cell interaction plays a key role in tumor growth and progression. Neoangiogenesis, or the development of vessels, is essential for tumor growth, whereas the lymphatic system serves as a portal for cancer cell migration and subsequent metastasis. Recent studies provide evidence that vascular and lymphatic endothelial cells can significantly influence cancer cell growth. These observations imply a need for developing in vitro models that would more realistically reflect breast cancer growth processes in vivo. Moreover, restrictions in animal research require the development of ex vivo models to elucidate better the mechanisms involved.
This article describes the development of breast cancer spheroids composed of both breast cancer cells (estrogen receptor-positive MCF-7 cells) and vascular and/or lymphatic endothelial cells. The protocol describes a detailed step-by-step approach in creating dual-cell spheroids using two different approaches, hanging drop (gold standard and cheap) and 96-well U-bottom plates (expensive). In-depth instructions are provided for how to delicately pick up the formed spheroids to monitor growth by microscopic sizing and assessing viability using dead and live cell staining. Moreover, procedures to fix the spheroids for sectioning and staining with growth-specific antibodies to differentiate growth patterns in spheroids are delineated. Additionally, details for preparing spheroids with transfected cells and methods to extract RNA for molecular analysis are provided. In conclusion, this article provides in-depth instructions for preparing multi-cell spheroids for breast cancer research.

Mammary Epithelial and Endothelial Cell Spheroids as a Potential Functional In vitro Model for Breast Cancer Research

Crosstalk between mammary epithelial cells and endothelial cells importantly contributes to breast cancer progression, tumor growth, and metastasis. In this study, spheroids have been made from breast cancer cells together with vascular and/or lymphatic endothelial cells and demonstrate their applicability as an in vitro system for breast cancer research.

Meme Kanseri Araştırmaları için Potansiyel Fonksiyonel In vitro Model Olarak Meme Epitel ve Endotel Hücre Sferoidleri

Breast cancer is the leading cause of mortality in women. The growth of breast cancer cells and their subsequent metastasis is a key factor for its ...

A Hormone-responsive 3D Culture Model of the Human Mammary Gland Epithelium

The process of mammary epithelial morphogenesis is influenced by hormones. The study of hormone action on the breast epithelium using 2D cultures is limited to cell proliferation and gene expression endpoints. However, in the organism, mammary morphogenesis occurs in a 3D environment. 3D culture systems help bridge the gap between monolayer cell culture (2D) and the complexity of the organism. Herein, we describe a 3D culture model of the human breast epithelium that is suitable to study hormone action. It uses the commercially available hormone-responsive human breast epithelial cell line, T47D, and rat tail collagen type 1 as a matrix. This 3D culture model responds to the main mammotropic hormones: estradiol, progestins and prolactin. The influence of these hormones on epithelial morphogenesis can be observed after 1- or 2-week treatment according to the endpoint. The 3D cultures can be harvested for analysis of epithelial morphogenesis, cell proliferation and gene expression.

We describe a 3D culture model of the human breast epithelium that is suitable to study hormone action.

İnsan Meme Bezi Epitelinin Bir Hormon duyarlı 3D Kültür Modeli

The process of mammary epithelial morphogenesis is influenced by hormones. The study of hormone action on the breast epithelium using 2D cultures is ...

Biyomühendislik

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the functions of proteins involved in oncogenic progression or help to discover new tumor suppressors. In addition, injecting cancer cells into mice with different genotypes might provide a better understanding of the importance of the stromal compartment. Many models may be useful to investigate certain aspects of disease progression but do not recapitulate the entire cancerous process. In contrast, breast cancer cells engraftment to the mammary fat pad of mice better recapitulates the location of the disease and presence of the proper stromal compartment and therefore better mimics human cancerous disease. In this article, we describe how to implant breast cancer cells into mice orthotopically and explain how to collect tissues to analyse the tumor milieu and metastasis to distant organs. Using this model, many aspects (growth, angiogenesis, and metastasis) of cancer can be investigated simply by providing a proper environment for tumor cells to grow.

Cancer is a complex disease that is influenced by the tissue surrounding the tumor as well as local pro- and anti-inflammatory mediators. Therefore, orthotropic injection models, rather than subcutaneous models may be useful to study cancer progression in a manner that better mimics human pathology.

Farelerin Meme Fat Pad içine Meme Kanseri Hücreleri Ortotopik Enjeksiyon Tümör Büyüme Eğitim için.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

Tıp

Ex Vivo Treatment Response of Primary Tumors and/or Associated Metastases for Preclinical and Clinical Development of Therapeutics

The molecular analysis of established cancer cell lines has been the mainstay of cancer research for the past several decades. Cell culture provides both direct and rapid analysis of therapeutic sensitivity and resistance. However, recent evidence suggests that therapeutic response is not exclusive to the inherent molecular composition of cancer cells but rather is greatly influenced by the tumor cell microenvironment, a feature that cannot be recapitulated by traditional culturing methods. Even implementation of tumor xenografts, though providing a wealth of information on drug delivery/efficacy, cannot capture the tumor cell/microenvironment crosstalk (i.e., soluble factors) that occurs within human tumors and greatly impacts tumor response. To this extent, we have developed an ex vivo (fresh tissue sectioning) technique which allows for the direct assessment of treatment response for preclinical and clinical therapeutics development. This technique maintains tissue integrity and cellular architecture within the tumor cell/microenvironment context throughout treatment response providing a more precise means to assess drug efficacy.

Ex Vivo Treatment Response of Primary Tumors and/or Associated Metastases for Preclinical and Clinical Development of Therapeutics

Established cancer cell lines and xenografts have been the mainstay of cancer research for the past several decades. However, recent evidence suggests that therapeutic response is greatly influenced by the tumor cell microenvironment. Therefore, we have developed an ex vivo analysis of primary tumor specimens for drug development purposes.

İlköğretim Tümörleri ve / veya klinik öncesi için İlişkili Metastazlarının ve Tedavi Klinik Geliştirme Ex Vivo Tedavisi Tepki

The molecular analysis of established cancer cell lines has been the mainstay of cancer research for the past several decades. Cell culture provides both ...

Methods for Culturing Human Femur Tissue Explants to Study Breast Cancer Cell Colonization of the Metastatic Niche

Bone is the most common site of breast cancer metastasis. Although it is widely accepted that the microenvironment influences cancer cell behavior, little is known about breast cancer cell properties and behaviors within the native microenvironment of human bone tissue.We have developed approaches to track, quantify and modulate human breast cancer cells within the microenvironment of cultured human bone tissue fragments isolated from discarded femoral heads following total hip replacement surgeries. Using breast cancer cells engineered for luciferase and enhanced green fluorescent protein (EGFP) expression, we are able to reproducibly quantitate migration and proliferation patterns using bioluminescence imaging (BLI), track cell interactions within the bone fragments using fluorescence microscopy, and evaluate breast cells after colonization with flow cytometry. The key advantages of this model include: 1) a native, architecturally intact tissue microenvironment that includes relevant human cell types, and 2) direct access to the microenvironment, which facilitates rapid quantitative and qualitative monitoring and perturbation of breast and bone cell properties, behaviors and interactions. A primary limitation, at present, is the finite viability of the tissue fragments, which confines the window of study to short-term culture. Applications of the model system include studying the basic biology of&#160;breast cancer and other bone-seeking malignancies within the metastatic niche, and developing therapeutic strategies to effectively target breast cancer cells in bone tissues.

Protocols are described for studying breast cancer cell migration, proliferation and colonization in a human bone tissue explant model system.

Kültürleme İnsan Femur Doku Eksplantlarından yöntemleri Metastatik Niche Meme Kanseri Hücre Kolonizasyon Eğitim için

Bone is the most common site of breast cancer metastasis. Although it is widely accepted that the microenvironment influences cancer cell behavior, little ...

Bir

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler